HiActi™ Cytokines validées dans des organoïdes cultivés

En 2021, les organoïdes seront répertoriés comme un projet clé du plan national de recherche et développement clé « 14e Plan quinquennal ». Les organoïdes sont si en vogue, et la manière de les obtenir est également devenue le centre d'attention. Différents organoïdes nécessitent différentes cytokines pendant la culture. En ajoutant des cytokines qui favorisent ou inhibent des voies de signalisation spécifiques, les cellules souches peuvent être amenées à se différencier en organoïdes souhaités. Le protocole de culture de cytokines le plus classique dans la culture d'organoïdes est WNER (respectivement : Wnt-3a, Noggin, EGF et R-Spondins), et la combinaison d'augmentation ou de diminution de ces 4 facteurs peut être appliquée à presque toutes les expériences de culture d'organoïdes.

Cytokines couramment utilisées dans la culture d'organoïdes

R-Spodine 1

Fonction: La R-Spodine 1 appartient à la famille Rspo des régulateurs Wnt, qui comprend 4 membres, à savoir Rspo1-4. Cette famille est un facteur microenvironnemental qui maintient les cellules souches adultes dans plusieurs organes. RSPO1 est une protéine activatrice sécrétée. Rspo-1 est exprimée dans certaines régions du système nerveux central en développement et se trouve également dans la glande surrénale, l'ovaire, le testicule, la thyroïde et la trachée.

En tant qu'activateur de la voie de signalisation Wnt, Rspo1 joue un rôle dans de nombreux aspects en améliorant la signalisation Wnt. C'est un milieu de croissance couramment utilisé pour les organoïdes épithéliaux gastriques, les organoïdes de l'intestin grêle et du côlon, les organoïdes hépatiques, les organoïdes de la prostate, les organoïdes pancréatiques et les organoïdes mammaires.

Wnt-3a

Fonction: Wnt-3a appartient à la famille des protéines de signalisation Wnt et joue un rôle important dans le maintien de l'intégrité des tissus embryonnaires et adultes. La famille Wnt est hautement conservée et riche en cystéine. Les Wnts assurent la médiation de la voie de signalisation Wnt en se liant aux récepteurs de la membrane cellulaire et/ou en se liant aux récepteurs de la membrane cellulaire adjacents. La voie de signalisation Wnt peut être divisée en voie canonique et voie non canonique, l'une est impliquée dans la voie de signalisation canonique médiée par la β-caténine, comprenant Wnt1, Wnt2, Wnt2b, Wnt3, Wnt3a, Wnt7a, Wnt8, Wnt8b et Wnt10a ; l'autre n'est pas impliquée dans les voies de signalisation non canoniques dépendantes de la β-caténine, notamment Wnt4, Wnt5a, Wnt6 et Wnt11. En tant que protéine de signalisation la plus représentative de la famille Wnt, Wnt3a est largement distribuée et joue un rôle clé dans la régulation des fonctions cellulaires pléiotropiques, notamment l'auto-renouvellement, la prolifération, la différenciation et la motilité.

FEM

Fonction: L'EGF est un puissant facteur de croissance qui stimule le développement épithélial multiple, l'angiogenèse, l'inhibition de la sécrétion d'acide gastrique, la prolifération des fibroblastes et la formation de colonies de cellules épidermiques en culture. L'EGF est un membre fondateur de la famille EGF, qui comprend également le TGF-α, deux protéines régulatrices (AR), la protéine des cellules β (BTC), la protéine épidermique (EPR), le facteur de croissance de type EGF se liant à l'héparine (HB-EGF), les épiprotéines et les neurégulines (NRG1-6). Physiologiquement, l'EGF est présent dans divers fluides corporels, notamment le sang, le lait, l'urine, la salive, le sperme, le suc pancréatique, le liquide céphalo-rachidien et le liquide amniotique. L'EGF est un ligand à haute affinité pour le récepteur de l'EGF (ErbB). L'EGF se lie au récepteur de l'EGF et induit sa dimérisation, ce qui entraîne l'activation de la voie de signalisation de la protéine tyrosine kinase, transduisant ainsi le signal de la famille EGF.

Caboche

Fonction: Noggin peut inhiber les ligands de la famille TGF-β et les empêcher de se lier aux récepteurs correspondants.Noggin a été initialement découvert comme antagoniste de BMP-4 et s'est ensuite avéré moduler l'activité d'autres BMP (BMP-2, 7, 13 et 14). Noggin est hautement conservé chez les vertébrés. Les protéines Noggin sécrétées régulent l'activité des protéines morphogénétiques osseuses au cours du développement. Rôle de l'antagoniste de signalisation BMP Noggin dans le développement de métastases osseuses ostéolytiques du cancer de la prostate.

bFGF/FGF-2

Fonction: Le bFGF est un membre de la superfamille FGF des protéines mitogéniques. Il s'agit d'un facteur chimiotactique et mitogénique hautement spécifique pour de nombreux types de cellules et semble être impliqué dans le remodelage des tissus endommagés tels que la cicatrisation des ulcères, la réparation vasculaire et les lésions cérébrales traumatiques. Le bFGF est un composant important du milieu de culture des cellules souches embryonnaires humaines. De plus, la protéine bFGF est une protéine cationique de liaison à l'héparine impliquée dans diverses conditions pathologiques, notamment l'angiogenèse et la croissance de tumeurs solides. Par conséquent, le bFGF est considéré comme une cible pour la chimioprévention du cancer et les stratégies thérapeutiques. Le bFGF est souvent utilisé comme composant important du milieu de culture cellulaire, tel que le milieu de culture des cellules souches embryonnaires humaines et le système de culture sans sérum.

FGF-10

Fonction: Le facteur de croissance des fibroblastes 10 (FGF-10) est un facteur de croissance liant l'héparine qui appartient à la famille des FGF. Les protéines de cette famille jouent un rôle central dans le développement prénatal, la croissance postnatale et la régénération de divers tissus en favorisant la prolifération et la différenciation cellulaires. Le FGF-10 est sécrété par les cellules mésenchymateuses et se lie au FGF-BP extracellulaire, le FGF-10 se lie préférentiellement au FGF R2 (IIIb) épithélial et l'active, et interagit faiblement avec le FGF R1 (IIIb).

QSystème de gestion de la qualité de HiActi™ cytokine

Système de gestion de la qualité

• Certifiées ISO 13485:2016, les cytokines sont fabriquées grâce à un processus de production ultra-propre entièrement fermé pour garantir la propreté et la stabilité des protéines.
• Se conformer au système de « Bonnes pratiques de fabrication des médicaments »
• Avoir un certificat d'approbation de qualité (COA)
• Technologie aseptique et filtration de stérilisation secondaire
• Base de production de matières premières pour produits pharmaceutiques

Gestion de l'assurance qualité

• Une personne spéciale est responsable du système de formation du personnel de gestion
• Établir des procédures de maintenance et d'étalonnage des équipements
• Système de gestion des matières premières et des fournisseurs
• Dossiers complets de production par lots, dossiers d'inspection par lots, dossiers d'emballage, etc.
• Les dossiers de documents de qualité ont été audités et inspectés par l'AQ
• Dossiers complets de production et d'inspection des lots
• Validation des méthodes analytiques

Système de contrôle de la qualité

• Se conformer à la troisième règle générale de l'édition 2020 de la Pharmacopée de la République populaire de Chine : contrôle qualité des matières premières et des excipients pour la production de produits biologiques

Validation de la culture d'organoïdes

Yeasen Les cytokines ont été vérifiées sur des organoïdes tumoraux humains tels que le cancer du poumon, le cancer du col de l'utérus, le cancer de l'ovaire, le cancer du pancréas et le cancer de l'intestin, ainsi que sur des organoïdes normaux tels que les organoïdes de l'intestin grêle humain et murin.

Informations sur les produits associés