UCF.ME™ UltraNuclease, également connue sous le nom de nucléase totipotente, nucléase à large spectre et endonucléase inhibitrice non limitante, est issue de Serratia Marcescen mais a ensuite été repensée et produite par l'équipe de recherche et développement de Yeasen, exprimée dans E. coli. Elle possède un poids moléculaire de 26,5 kD et un point isoélectrique de 6,85. Il est remarquable qu'elle ait la capacité de dégrader complètement l'acide nucléique en oligonucléotides 5'-monophosphate d'une longueur de 2 à 5 bases. UltraNuclease et Salt Active UltraNuclease constituent toutes deux d'excellentes alternatives à la benzonase.
1. Qu'est-ce que la nucléase totipotente ?
2. Quels sont les scénarios d’utilisation de la nucléase totipotente ?
3. Quels sont les avantages que la nucléase totipotente doit avoir ?
4. FAQ
5. Produits connexes
1. Qu'est-ce que la nucléase totipotente ?
Les nucléases totipotentes sont des endonucléases génétiquement modifiées capables de dégrader une large gamme de formes d'acides nucléiques, englobant les acides nucléiques monocaténaires, bicaténaires, linéaires, natifs et dénaturés. Elles génèrent des oligonucléotides 5'-monophosphate d'une longueur comprise entre 3 et 5 bases et ne présentent aucune reconnaissance de base spécifique. Ces nucléases polyvalentes présentent une stabilité et une activité de digestion robustes dans diverses conditions, ce qui les rend très efficaces pour éliminer les résidus d'acides nucléiques dans les échantillons ou les produits. Cela améliore la pureté des échantillons et l'efficacité biologique des produits, faisant des nucléases totipotentes la préparation enzymatique préférée pour la recherche scientifique, les vaccins et les industries telles que les produits pharmaceutiques à base de protéines et de polysaccharides.
De plus, les nucléases totipotentes jouent un rôle crucial dans l'élimination des acides nucléiques lors de la préparation de vaccins, d'anticorps, de thérapies cellulaires et d'autres produits biologiques, garantissant le respect des réglementations de la FDA stipulant que l'acide nucléique résiduel dans le produit final à usage thérapeutique ne doit pas dépasser 10 pg/dose. En dégradant les acides nucléiques, les nucléases totipotentes réduisent la viscosité des lysats cellulaires, facilitant le processus de filtration/ultrafiltration en solution lors de la purification de particules dérivées de cellules telles que les virus, les vecteurs AAV et les corps d'inclusion. Cela rationalise le traitement, améliore la centrifugation, renforce l'efficacité de la séparation des précipitations et du surnageant et renforce l'efficacité de la purification chromatographique, augmentant ainsi le rendement et la pureté du produit.
2. Quels sont les scénarios d’utilisation de la nucléase totipotente ?
UltraNuclease a une large gamme d'applications et voici les scénarios d'utilisation spécifiques.
2.1 Purification du virus (lentivirus, AAV, vaccin adénovirus recombinant, virus inactivé, virus oncolytique, etc.)
L'utilisation des virus dans le secteur biomédical est en pleine expansion, couvrant des applications telles que les vaccins, la thérapie cellulaire, la thérapie génique et divers autres domaines. Les cellules hôtes responsables de la production de virus sont principalement des cellules à passage continu (CCL). Les CCL présentent une prédisposition génétique à une croissance non régulée, leur conférant la capacité de proliférer indéfiniment. Cependant, la présence d'ADN résiduel des CCL peut présenter des risques potentiels, tels qu'une prolifération cellulaire humaine incontrôlée conduisant à la formation de tumeurs. De plus, ces fragments d'ADN résiduels peuvent contenir des génomes viraux infectieux, ce qui soulève des inquiétudes quant au risque d'infection et à la tumorigenèse. Par conséquent, des mesures de contrôle strictes sont impératives pour gérer l'ADN résiduel dans les produits biologiques, garantissant leur sécurité. À cet égard, notre UCF.ME™ UltraNuclease offre une solution sécurisée pour la purification des virus.
Le sel joue un rôle essentiel dans l'atténuation de l'agrégation des protéines ou des virus, facilitant la séparation de l'ADN et de l'ARN des protéines et d'autres composants cellulaires. L'UltraNuclease active au sel, étant une endonucléase non spécifique, présente une activité optimale à des concentrations élevées en sel. Dans des conditions de forte teneur en sel, les enzymes ont un meilleur accès à l'ADN et à l'ARN libérés, améliorant ainsi leur dégradation. Les nucléases ayant une activité accrue dans des environnements à forte teneur en sel s'avèrent plus efficaces pour améliorer les processus de purification. L'UltraNuclease active au sel peut être utilisée pour réduire la viscosité des surnageants et des lysats cellulaires, améliorant ainsi l'efficacité de la purification dans des conditions de forte teneur en sel. Cette enzyme réduit également les résidus d'acide nucléique de l'hôte au niveau du picogramme, améliorant ainsi les performances et la sécurité de diverses applications de produits biologiques, notamment la purification des virus, la fabrication de vaccins et la production de produits pharmaceutiques à base de protéines et de polysaccharides.
2.2 Purification de la protéine recombinante exprimée dans E. coli
Certaines protéines exprimées dans E. coli ont tendance à s'agréger en corps d'inclusion, ce qui complique le processus de purification car elles s'entremêlent souvent avec l'ADN de l'hôte. Les cellules bactériennes rompues qui en résultent peuvent présenter une viscosité élevée, ce qui diminue considérablement l'efficacité de la purification des protéines. Cependant, en introduisant 10 à 50 U/mL d'UCF.ME™ UltraNuclease dans la solution bactérienne pendant la rupture par ultrasons et en incubant l'échantillon à 37 °C pendant 30 minutes ou à 4 °C pendant la nuit après la fin de la rupture, la viscosité de la solution bactérienne peut être efficacement réduite. Cela, à son tour, améliore considérablement l'efficacité du processus de purification. En résumé, vous pouvez compter sur notre UCF.ME™ UltraNuclease pour faciliter la purification efficace de la protéine.
2.3 Prévenir l’agglutination des cellules
Ces dernières années, l'utilisation de cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) cryoconservées dans les immuno-essais a considérablement augmenté. La principale caractéristique des cellules PBMC est qu'elles s'agglutinent très facilement après la réanimation, ce qui peut facilement conduire à une mauvaise qualité cellulaire et à des résultats de test peu fiables. Lorsque les cellules sont réanimées, la concentration appropriée (25-50 U/mL) d'UCF.ME™UltraNuclease est ajoutée au milieu de culture et les cellules sont co-cultivées, ce qui peut empêcher efficacement l'agglutination des cellules. Par conséquent, vous pouvez tirer le meilleur parti de notre UCF.ME™ UltraNuclease pour augmenter les chances d'un résultat positif.
3. Quels sont les avantages que la nucléase totipotente doit avoir ?
3.1 Large gamme d'applications
UCF.ME™ UltraNuclease peut couper et dégrader diverses formes d’ADN et d’ARN dans diverses conditions expérimentales et peut être appliqué pour éliminer l’acide nucléique résiduel dans divers produits biologiques.
3.2 Haute pureté, activité enzymatique élevée
Pour notre UCF.ME™ UltraNuclease, sa pureté enzymatique est supérieure ou égale à 99 % (HPLC) et son activité enzymatique est supérieure ou égale à 1,5*106 U/mg (en utilisant une méthode quantitative absolue pour le substrat général).
3.3 Forte adaptabilité
UCF.ME™ UltraNuclease présente une grande stabilité lors du stockage et de la congélation-décongélation. Nous stockons UCF.ME™ UltraNuclease à -20 °C, 4 °C et 37 °C pour détecter la tendance de l'activité enzymatique. Lorsqu'il a été placé à 37 °C pendant 2 semaines, il n'y a eu aucun changement significatif de l'activité enzymatique.Pendant ce temps, pour assurer la stabilité de l'enzyme, nous utilisons une combinaison de glace sèche + pack de glace pour transport UCF.ME™ UltraNuclease chez vous. Il présente également une forte tolérance et peut s'adapter à une variété de conditions de fonctionnement.
3.4 Se conformer à la pharmacopée
UCF.ME™ UltraNuclease est fabriqué dans l'usine UCF.ME (Ultra Clean Factory. Molecular Enzyme) et est une sorte d'enzyme ultra-propre. Qu'est-ce qu'une enzyme ultra-propre ? Il s'agit d'une enzyme moléculaire qui répond aux normes de qualité suivantes : pas de HCD, HCR, HCP, SANS DNASE, SANS RNASE, pas de résidus de protéase, pas de résidus microbiens, pas de pathogènes, d'origine animale, de pollution par les antibiotiques, de résidus d'endotoxines ultra-faibles, d'activité enzymatique élevée et de pureté élevée, etc. Par conséquent, vous pouvez faire confiance à nos produits, en toute sécurité et fiabilité.
3.5 Production GMP
L'ensemble du processus de production d'UltraNuclease est réalisé dans l'atelier de production GMP et le plan d'inspection qualité est strictement conforme aux normes pharmacopée méthode, répondant à la demande à grande échelle, de la recherche et développement à la production.
UCF.ME™ Partenaire d'UltraNuclease —— Kit ELISA UltraNuclease
Dans les étapes de purification normales, UCF.ME™ UltraNuclease est facilement éliminé en tant qu'impureté. Pour détecter les résidus d'UCF.ME™ UltraNuclease, YEASEN a développé le kit ELISA UltraNuclease, qui peut détecter avec précision les résidus d'UCF.ME™ UltraNuclease dans l'échantillon. Le kit présente une excellente linéarité, répétabilité, taux de récupération et spécificité.
UltraNuclease Kit ELISA
Français La plage linéaire est comprise entre 0,047 et 3 ng/mL, et R2 est supérieur à 0,99. Avec une bonne reproductibilité inter-lots, nous ajoutons une concentration fixe d'UltraNuclease à l'échantillon et utilisons 3 lots différents de kits ELISA pour la détection. Le taux de récupération de la détection est compris entre 70 % et 110 % lorsque la concentration en nucléase est comprise entre 3 et 0,186 ng/mL, et le CV est inférieur à 10 %. De plus, les taux de récupération d'échantillons simulés d'UltraNuclease avec différentes concentrations sont tous compris entre 70 % et 130 % et sont meilleurs que ceux des autres marques. Il présente également une forte spécificité selon laquelle nous avons évalué la liaison non spécifique de l'anticorps UltraNuclease à 8 échantillons communs. Les résultats du groupe d'interférence et du groupe témoin se chevauchaient et aucune interférence n'a été observée.
Suite au dépôt du DMF d'UltraNuclease, YEASEN a obtenu des DMF de ultranucléase active au sel de la FDA américaine.
Le numéro de dossier est :
| Nombre | Nom du produit | Numéro de dossier |
| 1 | UltraNuclease | MF037298 |
| 2 | UltraNuclease active au sel | MF037815 |
4. FAQ
Q1 : À quelle étape ajouter UltraNuclease ?
R : Cela dépend des échantillons que vous traitez. Dans la purification des virus, il est généralement ajouté après la clarification du virus ; dans la purification des protéines d'E. coli, il peut être ajouté lorsque les cellules sont lysées ; dans le traitement de l'agglutination des cellules, il peut être ajouté directement au milieu pour la co-culture avec les cellules.
T2 : Si la température de réaction ne peut pas atteindre 37°C, comment l'utiliser ?
UN: L'activité enzymatique de l'UltraNuclease est affectée par la température, le temps de traitement et les unités d'activité enzymatique. Si la température ne peut pas atteindre 37 °C, la quantité d'enzyme peut être ajoutée de manière appropriée ou le temps d'incubation peut être prolongé.
Q3 : UltraNuclease est-il compatible avec les inhibiteurs de protéase ?
UN: Compatible, mais sachez que de nombreux inhibiteurs de protéase contiennent de l'EDTA. Lorsque l'EDTA commence à dépasser 1 mM, l'EDTA inhibe l'activité de certaines nucléases.
T4 : Comment supprimer UltraNuclease ?
UN: Il peut être éliminé par des méthodes telles que le TFF, la dialyse et les colonnes chromatographiques.
Q5 : Le kit ELISA UltraNuclease peut-il être utilisé pour la détection d’autres marques de résidus de nucléase totipotente ?
UN: Nous ne recommandons pas de procéder ainsi. Le kit ELISA est entièrement développé sur la base d'UltraNuclease et peut quantifier avec précision l'UltraNuclease. Les nucléases altipotentes d'autres marques peuvent être différentes de l'UltraNuclease en termes de séquence et de processus de production, et les résultats du test peuvent être inexacts.
5. Produits connexes
Les produits fournis par Yeasen sont les suivants.
Tableau 1 Produits connexes
| Nom du produit | UGS | Caractéristiques |
| 20157ES25/60/80/90 | 25KU/100KU/1MU/5MU | |
| 20159ES25/60/80/90 | 25KU/100KU/1MU/5MU | |
| 36701ES59 | 96T | |
| Sel actif Kit ELISA UltraNuclease | 36703ES96 | 96T |