Description
Hifair™ Kit de sonde RT-qPCR multiplex en une étape (UDG Plus) est un kit de PCR quantitative multiplex basé sur l'ARN comme matrice. Au cours de l'expérience, la transcription inverse et la PCR quantitative ont été réalisées dans le même tube, ce qui a simplifié l'opération expérimentale et réduit le risque de contamination.
Dans ce kit, le premier brin d'ADNc a été synthétisé efficacement par Hifair résistant à la chaleurMT V Reverse Transcriptase et amplifiée quantitativement par UNICON™ ADN polymérase HotStart Taq. Le kit contient principalement un tampon MP optimisé, un mélange d'enzymes, etc. La solution tampon contient déjà du Mg2+ et dNTP. De plus, les facteurs qui peuvent inhiber efficacement l'amplification PCR non spécifique et améliorer l'efficacité d'amplification de multiples réactions qPCR sont ajoutés, ce qui peut garantir l'efficacité de l'amplification et réaliser jusqu'à plusieurs réactions d'amplification. Le système dUTP/UDG a été ajouté pour prévenir efficacement le risque de contamination par aérosol.
Caractéristiques
1. Gbonne polyvalence: Il convient à l'amplification qPCR et à la détection d'acides nucléiques de micro-organismes pathogènes, de génomes humains, de plantes et d'autres espèces.
2. Haute sensibilité: Le système tampon soigneusement optimisé améliore la sensibilité de détection des modèles à faible concentration jusqu'à 250 copies/mL.
3. Système dUP/UDG: Le système antipollution dUTP/UDG thermolabile est introduit pour dégrader efficacement la pollution par aérosol des produits, réduire les faux positifs et garantir des résultats authentiques.
4. Soutiening programme rapide : compatible avec le programme rapide 40 min.
5. Super stabilité : stableet à 37℃ pendant 14 jours, congélation et décongélation répétées 10 fois.
Composants
Composants | Nom | 16630ES60 (100 T) | 16630ES80 (1000 T) | 16630ES92 (10000 T) |
16630-A | Tampon MP Hifair 5× | 500 μL | 5 mL | 50 ml |
16630-B | Enzyme Hifair Mélanger | 100 μL | 1 mL | 10 mL |
16630-C | GC-Enhancer | 500 μL | 5 mL | 50 ml |
Note: 1) 5×HifairMT Tampon MP est l'abréviation de HifairMT Tampon de sonde RT-qPCR multiplex en une étape V, qui comprend les dNTP, les dUTP, le Mg2+, stabilisateurs, activateurs et plus encore.
2) Mélange d'enzymes Hifair contient principalement Hifair résistant à la chaleurMT V transcriptase inverse, UNICONMT Polymères d'ADN HotStart Taq et Base de données UDG.
3) L'amplificateur GC est facultatif. Veuillez trouver la version gratuite de l'amplificateur GC : Chat : 16901ES.
4) Les 16630-A et 16630-B sont équivalents aux 16901-A et 16901-B, respectivement.
Caractéristiques
Méthode PCR | RT-qPCR en une étape |
Type d'échantillon | ARN |
Stockage
Til produit devrait être stocké à -25°C~-15°C pour 1 année.
Chiffres
Figure 1. Taux de détection élevé
Instructions
1. Réaction Composition
Composants | Volume (μL) | Concentration finale |
5×Hifair™ Tampon MP | 5 | 1 × |
Mélange d'enzymes Hifair | 1 | - |
GC-Enhancer | 0-5 | - |
Mélange d'amorces (10 μM) | 0,4 chaque | 0,16 μM |
Mélange de sondes (10 μM) | 0,2 chaque | 0,08 μM |
ARN | 1-5 | - |
H2O sans RNase | à 25 | - |
Note:Assurez-vous de bien mélanger avant utilisation, évitez les bulles excessives causées par des vibrations violentes.
a) Concentration de l'amorce : Apprêt mélange comprenant un apprêt multiplex, selon la situation, la concentration optimale de l'amorce peut être comprise entre 0,1 et 1,0 μM.
b) Concentration de la sonde : Mélange de sondes comprenant un groupe fluorescent de différence de marquage de sonde multiplex, selon la situation, la concentration optimale de la sonde peut être comprise entre 0,05 et 0.5 µM.
c) Dilution du modèle : la qPCR est très sensible et il est recommandé de diluer le modèle. La valeur Ct du contrôle est comprise entre 20 et 35.
d) Préparation du système : démonter la tête avec l'élément filtrant. Éviter la contamination croisée et la contamination par aérosol.
2. Protocole de cyclisme optimisé
Étape de réaction | Température | Temps | Faire du vélo | |
1 | Transcription inverse | 50°Cun | 15 min | 1 |
2 | Dénaturation initiale | 95°C | 5 minutes | 1 |
3 | Réaction d'amplification | 95°C | 15 secondes | 45 cycles |
60°Cb | 30 secondesc |
Note:a) Rtranscription inverse : La température peut être sélectionnée à 42°C ou 50°C pendant 10 à 15 minutes.
b) Réaction d'amplification : La température est ajustée en fonction de la valeur Tm des amorces conçues.
c) Acquisition du signal de fluorescence:Veuillez définir la procédure expérimentale conformément aux exigences du manuel de l'instrument.
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Enquête
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