द्वितीयक एंटीबॉडी क्या है?
द्वितीयक एंटीबॉडी एक एंटीबॉडी है जो प्राथमिक एंटीबॉडी से जुड़ सकती है। इसका उपयोग मुख्य रूप से प्राथमिक एंटीबॉडी की उपस्थिति का पता लगाने के लिए किया जाता है। प्राथमिक एंटीबॉडी विशेष रूप से एंटीजन से जुड़ती है, और द्वितीयक एंटीबॉडी विशेष रूप से प्राथमिक एंटीबॉडी से जुड़ती है। दूसरे शब्दों में, प्राथमिक एंटीबॉडी का Fc क्षेत्र या Fab खंड एंटीबॉडी का उत्पादन करने के लिए शरीर को उत्तेजित करने के लिए एंटीजन के रूप में कार्य कर सकता है। दूसरे शब्दों में, प्राथमिक एंटीबॉडी मुख्य रूप से IgG वर्ग इम्युनोग्लोबुलिन है, इसलिए द्वितीयक एंटीबॉडी एक एंटी-IgG एंटीबॉडी है।
द्वितीयक एंटीबॉडी की भूमिका
प्राथमिक एंटीबॉडी विशेष रूप से लक्ष्य प्रोटीन से जुड़ती है, और प्राथमिक एंटीबॉडी को ल्यूमिनसेंट पदार्थ या क्रोमोजेनिक समूह के साथ लेबल किया जाना चाहिए। नंगी आँखों से यह देखना संभव नहीं है कि प्राथमिक एंटीबॉडी बाँध प्रोटीन। हालाँकि, प्राथमिक एंटीबॉडी अपेक्षाकृत विशिष्ट है, और प्रत्येक को उच्च लागत पर लेबल किया जाता है। एक लेबल वाली द्वितीयक एंटीबॉडी का उपयोग करना आम बात है जो प्राथमिक एंटीबॉडी से बंध सकती है और जिसका एक पता लगाने योग्य लेबल होता है (जैसे कि फ्लोरोसेंट, रेडियोधर्मी, केमिलुमिनसेंट, या क्रोमोजेनिक समूह)। इसलिए वर्तमान डिज़ाइन में आम तौर पर प्राथमिक एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक पता लगाने योग्य लेबल के साथ द्वितीयक एंटीबॉडी होती है, जबकि प्राथमिक एंटीबॉडी सब्सट्रेट को पहचानती है। इस तरह, जब प्राथमिक एंटीबॉडी सब्सट्रेट से बंधती है, तो इसे द्वितीयक एंटीबॉडी के माध्यम से पता लगाया जा सकता है।
उदाहरण के लिए, ईसीएल ल्यूमिनेसेंस सिद्धांत: ईसीएल सब्सट्रेट में, एच होते हैं2हे2 और ल्यूमिनोल (और इसके व्युत्पन्न), जो एचआरपी (हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज) की क्रिया के तहत प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करते हैं।
द्वितीयक एंटीबॉडी का उपयोग करने के लिए मुख्य बिंदु
द्वितीयक एंटीबॉडी एक एंटीबॉडी है जो स्तनधारियों (आमतौर पर बकरियों, घोड़ों, गधों, खच्चरों और गिनी सूअरों आदि को प्रतिरक्षित करके) को प्राथमिक एंटीबॉडी प्रजातियों (जैसे खरगोश, चूहे) के एक निश्चित उपप्रकार के इम्युनोग्लोबुलिन IgG के साथ प्रतिरक्षित करके बनाई जाती है, इसलिए द्वितीयक एंटीबॉडी केवल प्राथमिक एंटीबॉडी की एक विशिष्ट प्रजाति और उपप्रकार से बंधती है। उदाहरण के लिए, भेड़ एंटी-माउस (द्वितीयक एंटीबॉडी) विशेष रूप से माउस मोनोक्लोनल (प्राथमिक एंटीबॉडी) से बंधेगी और खरगोश पॉलीक्लोनल या चूहे मोनोक्लोनल से नहीं बंधेगी।
द्वितीयक एंटीबॉडी के युग्मन चिह्न
विभिन्न प्रयोगात्मक तरीकों के परिणामस्वरूप द्वितीयक एंटीबॉडी के लिए विभिन्न युग्मन समूह होंगे, जो मुख्य रूप से एंजाइम (हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज/एचआरपी और एल्कलाइन फॉस्फेटेज/एपी), फ्लोरोसेंट समूह (एफआईटीसी, रोडामाइन, पीई, डाइलाइट, एलेक्सा फ्लोर, साइ3, आदि), बायोटिन, सोने के कण, आदि हैं। आम तौर पर, एचआरपी-लेबल वाले द्वितीयक एंटीबॉडी को डब्लूबी, एलिसा, आईएचसी जैसे प्रयोगों के लिए अनुशंसित किया जाता है, और बायोटिन-लेबल वाले द्वितीयक एंटीबॉडी को आईएचसी के लिए अनुशंसित किया जाता है, जबकि एलेक्सा फ्लोर 488, एफआईटीसी, पीई जैसे फ्लोरोसेंट लेबल का उपयोग आईएफ, एफसी, आदि के लिए किया जाता है।
सही द्वितीयक एंटीबॉडी का चयन कैसे करें
क. इम्यूनोब्लॉटिंग (डब्ल्यूबी)
पारंपरिक वेस्टर्न ब्लॉटिंग के लिए हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज या एल्केलाइन फॉस्फेटेज के साथ लेबल किए गए द्वितीयक एंटीबॉडी का चयन करें; फ्लोरोसेंट वेस्टर्न ब्लॉटिंग के लिए संबंधित फ्लोरोफोर के साथ लेबल किए गए द्वितीयक एंटीबॉडी का चयन करें।
बी. इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (आईएचसी/आईसीसी)
बी.आईसीसी (इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री) के लिए, बायोटिन के साथ लेबल किए गए एक द्वितीयक एंटीबॉडी का चयन करें।
सी. इम्यूनोफ्लोरेसेंस (आईएचएफ/आईसीएफ)
इम्यूनोप्रीसिपिटेशन अक्सर एक द्वितीयक एंटीबॉडी का उपयोग करने का विकल्प देता है जो या तो Fc या Fab विशिष्ट होता है। ऐसे द्वितीयक एंटीबॉडी भारी श्रृंखला (आणविक भार 55 kDa) या हल्की श्रृंखला (आणविक भार 25 kDa) से हस्तक्षेप से बच सकते हैं।
अनुशंसित उत्पाद जानकारी
| लेबल समूह | उत्पाद संख्या | प्रोडक्ट का नाम |
| अगोचर | 34850ईएस | बकरी विरोधी खरगोश lgG(H+L) |
| 34851ईएस | बकरी विरोधी मस्जिद lgG(H+L) | |
| 34847ईएस | गधा एंटी-ह्यूमन आईजीजी(एच+एल) | |
| एचआरपी | 33101ईएस | पेरोक्सीडेस एफिनिप्योर बकरी एंटी-रैबिट आईजीजी (एच+एल) |
| 33201ईएस | पेरोक्सीडेस एफिनिप्योर बकरी एंटी-माउस आईजीजी (एच+एल) | |
| 33301ईएस | पेरोक्सीडेस एफिनिप्योर बकरी एंटी-रैट आईजीजी (एच+एल) | |
| 33401ईएस | पेरोक्सीडेस एफिनिप्योर बकरी एंटी-गिनी पिग आईजीजी (एच+एल) | |
| 33501ईएस | हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज बकरी एंटी-ह्यूमन आईजीजी (एच+एल) | |
| 33701ईएस | पेरोक्सीडेस एफिनिप्योर रैबिट एंटी-गोट आईजीजी (एच+एल) | |
| 33801ईएस | पेरोक्सीडेज एफिनिप्योर रैबिट एंटी-शीप आईजीजी (एच+एल) | |
| 34201ईएस | पेरोक्सीडेज एफिनिप्योर डोंकी एंटी-रैबिट आईजीजी (एच+एल) | |
| 34101ईएस | पेरोक्सीडेस एफिनिप्योर गधा एंटी-माउस आईजीजी (एच+एल) | |
| 34301ईएस | पेरोक्सीडेस एफिनिप्योर गधा एंटी-बकरी आईजीजी (एच+एल) | |
| 33101ईएस | पेरोक्सीडेस एफिनिप्योर बकरी एंटी-रैबिट आईजीजी (एच+एल) | |
| हरित प्रतिदीप्ति | 33106ईएस | YSFluor™ 488 बकरी एंटी-खरगोश IgG (H+L) |
| 33126ईएस | YSFluor™ 488 बकरी एंटी-ह्यूमन IgG (H+L) | |
| 33206ईएस | YSFluor™488 बकरी विरोधी माउस IgG (H+L) | |
| 33306ईएस | YSFluor™ 488 बकरी एंटी-बोवाइन IgG (H+L) | |
| 33406ईएस | YSFluor™ 488 बकरी एंटी-गिनी पिग IgG (H+L) | |
| 33706ईएस | YSFluor™488 खरगोश विरोधी बकरी IgG (H+L) | |
| 33906ईएस | YSFluor™ 488 खरगोश विरोधी माउस IgG (H+L) | |
| 34906ईएस | YSFluor™488 गधा एंटी-भेड़ IgG (H+L) | |
| 34106ईएस | YSFluor™488 गधा विरोधी माउस IgG (H+L) | |
| 34206ईएस | YSFluor™488 गधा एंटी-खरगोश IgG (H+L) | |
| 34306ईएस | YSFluor™ 488 गधा एंटी-बकरी IgG (H+L) | |
| 34406ईएस | YSFluor™ 488 गधा एंटी-रैट IgG (H+L) | |
| 34506ईएस | YSFluor™488 गधा एंटी-गिनी पिग आईजीजी (एच+एल) | |
| 34606ईएस | YSFluor™488 गधा एंटी-चिकन आईजीजी (एच+एल) | |
| 34706ईएस | YSFluor™488 रैबिट एंटी-चिकन IgY(H+L) | |
| 34806ईएस | YSFluor™488 गधा एंटी-ह्यूमन IgG (H+L) | |
| 34856ईएस | FITC AffiniPure बकरी एंटी-ह्यूमन IgG(H+L) | |
| 33107ईएस | FITC-AffiniPure बकरी एंटी-खरगोश IgG (H+L) | |
| 33207ईएस | FITC-AffiniPure बकरी एंटी-माउस IgG (H+L) | |
| 33307ईएस | FITC-AffiniPure बकरी एंटी-रैट IgG (H+L) | |
| 33707ईएस | FITC-AffiniPure खरगोश एंटी-बकरी IgG (H+L) | |
| 33807ईएस | FITC-AffiniPure खरगोश एंटी-भेड़ IgG (H+L) | |
| रोडामाइन | 33109ईएस | रोडामाइन (TRITC) बकरी एंटी-खरगोश IgG (H+L) |
| 33209ईएस | रोडामाइन (TRITC) बकरी एंटी-माउस IgG (H+L) | |
| 33709ईएस | रोडामाइन (TRITC) एफिनिप्योर रैबिट एंटी-बकरी IgG (H+L) | |
| 33210ईएस | रोडामाइन रेड-एक्स (आरआरएक्स) बकरी एंटी-माउस आईजीजी (एच+एल) | |
| नारंगी प्रतिदीप्ति | 33112ईएस | YSFluor™594 AffiniPure बकरी एंटी-खरगोश IgG (H+L) |
| 33212ईएस | YSFluor™ 594 बकरी विरोधी माउस IgG (H+L) | |
| 33222ईएस | YSFluor™ 594 बकरी एंटी-ह्यूमन IgG (H+L) | |
| 33412ईएस | YSFluor™594 बकरी एंटी-गिनी पिग आईजीजी (एच+एल) | |
| 33312ईएस | YSFluor™ 594 बकरी एंटी-बोवाइन IgG (H+L) | |
| 33712ईएस | YSFluor™594 खरगोश एंटी-बकरी IgG (H+L) | |
| 33812ईएस | YSFluor™ 594 खरगोश एंटी-भेड़ IgG (H+L) | |
| 33912ईएस | YSFluor™594 खरगोश विरोधी माउस IgG (H+L) | |
| 34712ईएस | YSFluor™594 रैबिट एंटी-चिकन IgY (H+L) | |
| 34112ईएस | YSFluor™ 594 गधा विरोधी माउस IgG (H+L) | |
| 34212ईएस | YSFluor™594 गधा एंटी-खरगोश IgG (H+L) | |
| 34312ईएस | YSFluor™ 594 गधा एंटी-बकरी IgG (H+L) | |
| 34412ईएस | YSFluor™ 594 गधा एंटी-रैट IgG (H+L) | |
| 34512ईएस | YSFluor™594 गधा एंटी-गिनी पिग आईजीजी (एच+एल) | |
| 34612ईएस | YSFluor™594 गधा एंटी-चिकन आईजीजी (एच+एल) | |
| 34812ईएस | YSFluor™594 गधा एंटी-ह्यूमन IgG (H+L) | |
| 34912ईएस | YSFluor™594 गधा एंटी-भेड़ IgG (H+L) | |
| 33208ईएस | Cy3-AffiniPure बकरी एंटी-माउस IgG (H+L) | |
| 33308ईएस | Cy3-AffiniPure बकरी एंटी-रैट IgG (H+L) | |
| 33708ईएस | Cy3-AffiniPure खरगोश विरोधी बकरी IgG (H+L) | |
| 33808ईएस | Cy3-AffiniPure खरगोश विरोधी भेड़ IgG (H+L) | |
| 34855ईएस | Cy3-AffiniPure गधा एंटी-बकरी IgG(H+L) | |
| लाल प्रतिदीप्ति | 33113ईएस | YSFluor™647 बकरी एंटी-खरगोश IgG (H+L) |
| 33213ईएस | YSFluor™ 647 बकरी विरोधी माउस IgG (H+L) | |
| 33223ईएस | YSFluor™647 बकरी एंटी-ह्यूमन IgG (H+L) | |
| 33313ईएस | YSFluor™ 647 बकरी एंटी-बोवाइन IgG (H+L) | |
| 33413ईएस | YSFluor™ 647 बकरी एंटी-गिनी पिग IgG (H+L) | |
| 33713ईएस | YSFluor™ 647 खरगोश एंटी-बकरी IgG (H+L) | |
| 33813ईएस | YSFluor™647 खरगोश विरोधी भेड़ IgG (H+L) | |
| 33913ईएस | YSFluor™ 647 खरगोश विरोधी माउस IgG (H+L) | |
| 34713ईएस | YSFluor™647 रैबिट एंटी-चिकन IgY (H+L) | |
| 34113ईएस | YSFluor™ 647 गधा विरोधी माउस IgG (H+L) | |
| 34213ईएस | YSFluor™ 647 गधा एंटी-खरगोश IgG (H+L) | |
| 34413ईएस | YSFluor™ 647 गधा एंटी-रैट IgG (H+L) | |
| 34813ईएस | YSFluor™647 गधा एंटी-ह्यूमन IgG (H+L) | |
| 34913ईएस | YSFluor™647 गधा एंटी-भेड़ IgG (H+L) |
संदर्भ
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