1 ब्लास्टिसिडिन एस की क्रियाविधि
ब्लास्टिसिडिन एस स्ट्रेप्टोमाइसेस ग्रिसोक्रोमोजेन्स से निकाला गया एक न्यूक्लियोसाइड एंटीबायोटिक है, जो विशेष रूप से राइबोसोम में पेप्टाइड बॉन्ड के निर्माण में हस्तक्षेप करके प्रोकैरियोटिक और यूकेरियोटिक कोशिकाओं में प्रोटीन संश्लेषण को रोकता है। इसकी क्रियाविधि में रिलीज फैक्टर द्वारा प्रेरित पेप्टाइडाइल-टीआरएनए के हाइड्रोलिसिस को रोकना और बड़े राइबोसोमल सबयूनिट में टीआरएनए के बंधन को बढ़ाना शामिल है, जिससे पेप्टाइड बॉन्ड के निर्माण को एक निश्चित सीमा तक बाधित किया जा सकता है।
ब्लास्टिसिडिन एस की क्रियाशीलता तीव्र और शक्तिशाली है, तथा बहुत कम एंटीबायोटिक सांद्रता से कोशिका की मृत्यु तीव्र हो सकती है। यह न केवल बैक्टीरिया और यूकेरियोट्स में प्रोटीन संश्लेषण का महत्वपूर्ण अवरोध है, बल्कि कवक, नेमाटोड और ट्यूमर कोशिकाओं के विरुद्ध भी सक्रिय है। प्ल्टोसिडिन एस का उपयोग अक्सर बीएसआर या बीएसडी जीन ले जाने वाली ट्रांसफ़ेक्टेड कोशिकाओं की जांच के लिए किया जाता है।
2 ब्लास्टिसिडिन एस का अनुप्रयोग
2.1 कोशिका संवर्धन और स्क्रीनिंग
- स्तनधारी कोशिकाएँ: ब्लास्ट एस का उपयोग अक्सर बीएसआर या बीएसडी जीन ले जाने वाली ट्रांसफ़ेक्टेड कोशिकाओं की स्क्रीनिंग के लिए किया जाता है। ये प्रतिरोध जीन, क्रमशः बी. सेरेस और एस्परगिलस से, मुरानसिडिन को अविषाक्त व्युत्पन्न में परिवर्तित करने में सक्षम थे, जिससे प्रतिरोध जीन ले जाने वाली कोशिकाओं को चुनिंदा रूप से मारना संभव हो गया, स्तनधारी कोशिकाओं में ब्लास्टिसिडिन एस की कार्यशील सांद्रता 1 से 50 μg/mL तक थी।
| सीपक्ष | जीएनुस | हेसंगठन | सीअल्टूर मीडियम | ब्लास्टिसिडिन एस सांद्रता (μg/mL) |
| हेला | इंसान | गर्भाशय | डीएमईएम | 3-10 |
| HEK293 | इंसान | किडनी | डीएमईएम | 3-10 |
| बी16 | चूहा | मेलेनोमा | आरपीएमआई | 3-10 |
| पीसी1.0 | हम्सटर | ग्रंथिकर्कटता | आरपीएमआई | 10-30 |
| चो | हम्सटर | अंडाशय | डीएमईएम | 5-15 |
- जीवाणु चयन: जीवाणु संवर्धन में, 25-100 µg/mL की अनुशंसित सांद्रता, प्रतिरोधी जीन के बिना कोशिकाओं की शीघ्र मृत्यु का कारण बन सकती है।
ई.कोली ब्लास्टिसिडिन एस के प्रति थोड़ा कम संवेदनशील है, लेकिन ट्रांसफॉर्मेंट्स ब्लास्टिसिडिन एस के प्रति सहनशील हैं और इन्हें 50-100 μg/mL ब्लास्टिसिडिन एस की सांद्रता रेंज में कम नमक एलबी माध्यम (पीएच 8) के साथ जांचा जा सकता है, और उच्च पीएच ब्लास्टिसिडिन एस गतिविधि में सुधार करता है।
- पादप कोशिकाएं: पादप कोशिकाओं में जीन स्थानांतरण प्रयोगों के लिए भी लागू, बीएसआर और बीएसडी को सामान्यतः स्क्रीनिंग मार्कर के रूप में उपयोग किया जाता है।
2.2 प्रोटीन संश्लेषण पर अनुसंधान
- ब्लास्टिसिडिन एस.ए. का उपयोग पेप्टाइड बंध निर्माण के स्तर पर प्रोटीन संश्लेषण प्रक्रिया का अध्ययन करने के लिए किया जाता है, विशेष रूप से HEK293-T कोशिकाओं और TLR-2 संरचनाओं के HEK-D5 कोशिकाओं में।
2.3 एंटीफंगल गुण
- इसमें एक निश्चित एंटीफंगल गतिविधि भी होती है, जिसका उपयोग चावल के ब्लास्ट की रोकथाम और उपचार के लिए किया जा सकता है। इसका जीवाणुनाशक प्रभाव मुख्य रूप से प्रोटीन संश्लेषण को प्रभावित करना है, और बीजाणु अंकुरण, हाइफ़ल विकास और बीजाणु गठन को रोक सकता है।
2.4 अन्य अनुप्रयोग
- ब्लास्टिसिडिन शा का उपयोग ट्यूमर कोशिकाओं के निरोधात्मक प्रभाव का अध्ययन करने के लिए भी किया गया है।
- यह प्रतिरोधी जीन बीएलएस, बीएसआर या बीएसडी युक्त रूपांतरित कोशिकाओं के लिए चयन एजेंट के रूप में भी कार्य करता है।
3 ब्लास्टिसिडिन एस से संबंधित प्रायोगिक प्रक्रियाएं (स्तनधारी स्थिर ट्रांसफेक्टेंट्स की स्क्रीनिंग)
1) ब्लास्टिसिडिन एस का उपयोग आम तौर पर 10 μg/mL की सांद्रता पर किया जाता है। कोशिकाओं को bsr या BSD जीन वाले प्लास्मिड से ट्रांसफ़ेक्ट किया जाता है और स्थिर ट्रांसफ़ेक्टेंट्स के चयन के लिए ब्लास्टिसिडिन एस युक्त सामान्य वृद्धि माध्यम में इनक्यूबेट किया जाता है।
2) अभिसरण के 48 घंटे बाद, कोशिकाओं को ब्लास्टिसिडिन एस की उचित सांद्रता वाले ताजा माध्यम में प्रवाहित करें (नोट: एंटीबायोटिक्स तब सबसे अच्छा काम करते हैं जब कोशिकाएं सक्रिय विभाजन चरण में होती हैं। यदि कोशिका घनत्व बहुत अधिक है तो एंटीबायोटिक्स की दक्षता कम हो जाती है। कोशिकाओं को विभाजित करते समय, संगम 25% से अधिक नहीं होना चाहिए)।
3) हर 3-4 दिन में, उपयोग किए गए माध्यम को हटा दें और एंटीबायोटिक युक्त ताजा माध्यम डालें।
4) 7 दिनों के बाद, सेल कॉलोनियों के निर्माण की जाँच करें। होस्ट सेल के प्रकार और ट्रांसफ़ेक्शन/चयन दक्षता के आधार पर, कॉलोनी निर्माण में एक अतिरिक्त सप्ताह या उससे अधिक समय लग सकता है।
5) 5-10 प्रतिरोधी क्लोनों को 35 मिमी सेल कल्चर डिश में स्थानांतरित करें और 7 दिनों के लिए चयनात्मक माध्यम में रखें। इसके बाद, परीक्षण के लिए साइटोटॉक्सिसिटी परख करें।
4 उत्पाद अनुशंसा
येसेन बायोटेक ब्लास्टिसिडिन एस (60218ES) दो रूपों में उपलब्ध है: पाउडर (1 ग्राम) और घोल (10 मिलीग्राम/एमएल)।
| प्रोडक्ट का नाम | बिल्ली# | विनिर्देश | उपस्थिति |
| ब्लास्टिसिडिन एस सीएएस：3513-03-9 | 60218ईएस10 | 10 एमजी | HEPES में समाधान（10 mg/mL， बफर，pH 7.5） |
| 60218ईएस50 | 5×10 एमजी | ||
| 60218ES60 | 10×10 एमजी | ||
| 60218ES80 | 1 जी | पाउडर (उपयोग करते समय बाँझ पानी या बफर के साथ 5-10 मिलीग्राम/एमएल का स्टॉक घोल तैयार करें) |
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[1] मो जे, टैन के, डोंग वाई, लू डब्ल्यू, लियू एफ, मेई वाई, हुआंग एच, झाओ के, लव जेड, ये वाई, टैंग वाई। एफएसीटी कॉम्प्लेक्स के अवरोध के माध्यम से इविंग सारकोमा में ऑन्कोजेनिक ड्राइवर ईडब्ल्यूएसआर1::एफएलआई1 को चिकित्सीय रूप से लक्षित करना। ऑन्कोजीन। 2023 जनवरी;42(1):11-25। doi: 10.1038/s41388-022-02533-1। ईपब 2022 नवंबर 10। पीएमआईडी: 36357572। (अगर:8.0)
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