कोशिका संवर्धन की प्रक्रिया में, कोशिका पाचन की अक्सर आवश्यकता होती है, इसलिए कोशिकाओं को पचाने के लिए उपयोग किया जाने वाला ट्रिप्सिन कोशिका संवर्धन के लिए अपरिहार्य होगा, और यह बहुत महत्वपूर्ण भी है, जो कोशिकाओं की वृद्धि स्थिति को प्रभावित करेगा।

ट्रिप्सिन को मोटे तौर पर दो प्रकारों में विभाजित किया जा सकता है, एक पुनः संयोजक ट्रिप्सिन और दूसरा गैर-पुनः संयोजक ट्रिप्सिन।

• गैर-पुनःसंयोजक ट्रिप्सिन पशु मूल के साथ पशु निष्कर्षण से प्राप्त होता है, और यह ट्रिप्सिन का पारंपरिक उपयोग भी है, जो आमतौर पर पशु पाचन तंत्र में पाया जाता है और मवेशियों या सूअरों के अग्नाशयी ऊतक से सीधे निकाला जाता है।
• पुनः संयोजक ट्रिप्सिन का उत्पादन आनुवंशिक पुनः संयोजक प्रौद्योगिकी का उपयोग करके किया जाता है तथा यह पशु मूल का नहीं है।

उत्पाद परिचय और अनुप्रयोग

गैर-पुनःसंयोजक ट्रिप्सिन (पशु व्युत्पन्न)

उत्पाद की विशेषताएँ:

गैर-पुनः संयोजक ट्रिप्सिन (जिसे ट्रिप्सिन के नाम से भी जाना जाता है) मवेशियों, भेड़ों और सूअरों के अग्न्याशय से निकाला जाने वाला एक सेरीन प्रोटीयोलाइटिक एंजाइम है, जो विशेष रूप से सकारात्मक रूप से आवेशित लाइसिन और आर्जिनिन के कार्बोक्सिल टर्मिनस को विभाजित कर सकता है, जिसे बहु क्रिस्टलीकरण द्वारा शुद्ध किया जाता है, और आगे क्रोमैटोग्राफी और अल्ट्राफिल्ट्रेशन तकनीक द्वारा पशु मूल के साथ तैयार किया जाता है।

क्योंकि अग्नाशयी एंजाइम ट्रांसमेम्ब्रेन प्रोटीन और बाह्यकोशिकीय मैट्रिक्स में प्रोटीन, जैसे कि कैडहेरिन, इंटेग्रिन, आदि पर कार्य कर सकते हैं, इसलिए अब उनका उपयोग आमतौर पर ऊतकों और मोनोलेयर कोशिकाओं को अलग करने के लिए किया जाता है। हालाँकि ट्रिप्सिन कोशिकाओं के बीच प्रोटियोलिसिस को असतत कोशिकाओं में हाइड्रोलाइज़ कर सकता है, लेकिन ट्रिप्सिन के लिए विभिन्न ऊतकों या कोशिकाओं की प्रतिक्रिया अलग-अलग होती है, और फैली हुई कोशिकाओं की गतिविधि भी ट्रिप्सिन की सांद्रता, प्रतिक्रिया तापमान और समय से संबंधित होती है, और कोशिकाओं को फैलाने की ट्रिप्सिन की क्षमता 7-9 के पीएच और 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान की स्थितियों में सबसे मजबूत होती है। ट्रिप्सिन के घोल में एक चेलेटिंग एजेंट के रूप में EDTA को जोड़ने से कैल्शियम और मैग्नीशियम छह-दांतों वाली संरचना में बंध जाते हैं, जो कोशिका-कोशिका आसंजन को कमजोर कर सकता है और ट्रिप्सिन के हाइड्रोलाइज्ड लक्षित पेप्टाइड बॉन्ड के अधिग्रहण को बढ़ा सकता है।

बायोफार्मास्युटिकल क्षेत्र में शुरुआती दिनों में ट्रिप्सिन का मुख्य उपयोग इंसुलिन का उत्पादन था, और जल्द ही इसका उपयोग अन्य सेल कल्चर क्षेत्रों में भी किया जाने लगा। सीरम कल्चर में आमतौर पर जानवरों के अग्नाशयी एंजाइम का उपयोग किया जाता है, और विभिन्न कोशिकाओं में जोड़े जाने वाले ट्रिप्सिन की संरचना और सांद्रता अलग-अलग होती है।

अनुप्रयोग

1. इंसुलिन और निष्क्रिय टीकों का उत्पादन;
2. ऊतक कोशिकाओं का पृथक्करण और संवर्धन;
3. नैदानिक ​​और शल्य चिकित्सा उपयोग;
4. खाद्य उद्योग में प्रसंस्करण सहायता;

पुनः संयोजक ट्रिप्सिन (पशु मूल-मुक्त)

उत्पाद की विशेषताएँ

रिकॉम्बिनेंट ट्रिप्सिन जेनेटिक इंजीनियरिंग तकनीक का उपयोग करके उत्पादित एक एंजाइम है, जिसमें अच्छी स्थिरता, उच्च शुद्धता और कोई पशु मूल नहीं होने के फायदे हैं। आधुनिक बायोफार्मास्युटिकल्स की उत्पादन प्रक्रिया में, पशु मूल वाले कच्चे माल के उपयोग से संभावित वायरस स्रोत उत्पाद में आ सकते हैं जो जूनोटिक बीमारियों का कारण बनते हैं, जैसे कि पागल गाय रोग का बीएसई, खुरपका और मुंहपका रोग वायरस, आदि, प्रदूषण के स्रोत को कम करने के लिए, ट्रिप्सिन को जेनेटिक इंजीनियरिंग तकनीक के माध्यम से संश्लेषित किया जाता है, जो पारंपरिक सूअर या गोजातीय ट्रिप्सिन द्वारा लाए जा सकने वाले वायरस संदूषण के जोखिम को हल करता है।

पुनः संयोजक ट्रिप्सिन अधिकतर पुनः संयोजक ई. कोली या यीस्ट सिस्टम द्वारा व्यक्त किया जाता है और काइमोट्रिप्सिन जैसे हेटेरोज़ाइम संदूषण के बिना, बहु-चरण क्रोमैटोग्राफी द्वारा शुद्ध किया जाता है। पुनः संयोजक ट्रिप्सिन में प्राकृतिक रूप से निकाले गए ट्रिप्सिन के समान गुण होते हैं, जिसमें पोर्सिन ट्रिप्सिन अनुक्रम के समरूप अमीनो एसिड अनुक्रम होता है, जो विशेष रूप से पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला में लाइसिन और आर्जिनिन अवशेषों में कार्बोक्सिल समूहों को विभाजित करता है।इसके गैर-पशु स्रोत प्रदूषण और उच्च शुद्धता के कारण, इसका फार्मास्यूटिकल विकास, जैव रासायनिक अनुसंधान, प्रोटिओमिक्स और अन्य क्षेत्रों में व्यापक अनुप्रयोग है।

बाजार में मुख्यधारा का पुनः संयोजक ट्रिप्सिन एक पुनः संयोजक पोर्सिन ट्रिप्सिन है जिसे डीएनए पुनः संयोजक प्रौद्योगिकी का उपयोग करके एस्चेरिचिया कोली या खमीर में व्यक्त किया जाता है, और इसका अमीनो एसिड अनुक्रम पूरी तरह से पोर्सिन ट्रिप्सिन के अनुरूप है, जिसमें प्राकृतिक ट्रिप्सिन के समान ही गतिविधि और विशिष्टता है। यह 223 अमीनो एसिड से बना है और इसमें 6 जोड़े डाइसल्फ़ाइड बॉन्ड हैं। एंजाइम में ट्रिप्सिन के दो सक्रिय रूप होते हैं: α-ट्रिप्सिन और β-ट्रिप्सिन। इसकी गतिविधि को PMSF और TLCK जैसे सेरीन प्रोटीज अवरोधकों, EDTA जैसे धातु आयन केलेटर आदि द्वारा बाधित किया जाता है। पुनः संयोजक ट्रिप्सिन का उपयोग सीरम-मुक्त संस्कृति में किया जाता है, और ट्रिप्सिन की तरह, विभिन्न कोशिकाओं में ट्रिप्सिन के विभिन्न घटकों और सांद्रता को जोड़ा जाता है।

अनुप्रयोग

1. टीका और पुनः संयोजक इंसुलिन उत्पादन;
2. कोशिका विश्लेषण के लिए ऊतक के नमूनों की तैयारी;
3. प्रतिरक्षा कोशिका चिकित्सा;
4. बायोफार्मास्युटिकल उत्पादन;
5. प्रोटीन अनुक्रम, संरचना और ओमिक्स अनुसंधान

उत्पादों की विस्तृत तुलना

उत्पादों	गैर-पुनःसंयोजक ट्रिप्सिन (पशु व्युत्पन्न)	पुनः संयोजक ट्रिप्सिन (पशु मूल-मुक्त)
वस्तु	40123ES（फिनोल रेड(-),EDTA(+)） 40124ES（फिनोल रेड(-),EDTA(-)） 40126ES（फिनोल रेड(+),EDTA(-)） 40127ES（फिनोल रेड(+),EDTA(+)）	40512ईएस 20416ES（एमएस-सेफ）
स्रोत	मवेशियों, सूअरों और भेड़ों के अग्न्याशय से लिया गया	कोलीबैसिलस（40512ES） पिचिया पास्टोरिस（20416ES）
सुरक्षा	संभावित रोगाणुओं से संदूषण	कोई बाह्य विषाणु संदूषण नहीं
पवित्रता	1:250 ट्रिप्सिन घोल का 90% से अधिक भाग अशुद्ध है	उच्च शुद्धता (β-ट्रिप्सिन≥ 70%, α-ट्रिप्सिन≤20%）
पाचन कोशिका का प्रकार	सबसे अधिक सन्निहित दृढ़तापूर्वक अनुरक्त कोशिका रेखाएं	सबसे अधिक सन्निहित दृढ़तापूर्वक अनुरक्त कोशिका रेखाएं
काइमोट्रिप्सिन सीमा	प्रति 2500 यूनिट ट्रिप्सिन में 50 यूनिट से अधिक काइमोट्रिप्सिन नहीं।	कोई मायरोसिनेस और अन्य अशुद्धता एंजाइम संदूषण नहीं
विशिष्ट गतिविधि	≥2500 यूएसपी यूनिट/मिलीग्राम प्रोटीन	≥3800 यूएसपी यूनिट/मिलीग्राम प्रोटीन
पाचन प्रभाव	अस्थिरता	मजबूत पाचन और एंजाइम्स की कम मात्रा
स्व-काटने की दर	स्वयं को काटना और स्वयं काटने वाले टुकड़े उत्पन्न करना आसान है, जो मास स्पेक्ट्रोमेट्री विश्लेषण के परिणामों को प्रभावित करता है	स्वयं को काटना और स्वयं काटने वाले टुकड़े उत्पन्न करना आसान है, जो मास स्पेक्ट्रोमेट्री विश्लेषण के परिणामों को प्रभावित करता है
घुला हुआ तरल	Ca2+, Mg2+ के साथ या बिना HBSS घोल	Ca2+ और Mg2+ के साथ या बिना HBSS घोल (40512ES); 1 मिमी एचसीएल（20416ईएस）
कोशिका का अस्तित्व	सामान्य	सामान्य
क्या फ्रीज-थॉ की आवश्यकता है	हाँ	हाँ

कोशिका पाचन में उपयोग किए जाने वाले सबसे आम ट्रिप्सिन के अलावा, कई अन्य प्रकार के पाचन एंजाइम उत्पाद भी हैं जिनका उपयोग किया जा सकता है, जैसे कि निम्नलिखित।

कोलेजनेज़ के अनुप्रयोग क्षेत्र के बारे में

कोलेजनेज एक पेप्टिडेज़ एंडोन्यूक्लिऐस है जो विशेष रूप से प्रो-एक्स-ग्लाइ-प्रो अनुक्रम को पहचान सकता है और अनुक्रम में तटस्थ अमीनो एसिड (एक्स) और ग्लाइसिन (ग्लाइ) के बीच पेप्टाइड बॉन्ड को तोड़ सकता है, कोलेजनेज एकमात्र प्रोटीज़ है जो तीन-स्ट्रैंड सुपरकोइल्ड संरचना के साथ प्राकृतिक कोलेजन फाइब्रिल को विघटित कर सकता है, और संयोजी ऊतक और उपकला ऊतक के बाह्य कोशिकीय मैट्रिक्स में अन्य प्रोटीन, पॉलीसेकेराइड और लिपिड को प्रभावी रूप से हाइड्रोलाइज कर सकता है, जिससे यह उत्पाद ऊतक पाचन के लिए बहुत उपयुक्त है।

1. कोलेजनेज़ I., आमतौर पर उपकला कोशिकाओं, यकृत, फेफड़े, वसा और अधिवृक्क ऊतक कोशिकाओं की तैयारी के रूप में उपयोग किया जाता है;
2. कोलेजनेज़ II, जिसका उपयोग ऊतक-व्युत्पन्न कोशिकाओं जैसे हृदय, हड्डी, मांसपेशी, यकृत, थायरॉयड और उपास्थि की तैयारी के लिए किया जाता है;
3. कोलेजनेज़ III, आमतौर पर स्तन कोशिकाओं की तैयारी में उपयोग किया जाता है;
4. कोलेजनेज़ IV, जिसका उपयोग सामान्यतः अग्नाशयी आइलेट कोशिकाओं की तैयारी के लिए, या कोशिका तैयारी प्रयोगों के लिए किया जाता है, जहां रिसेप्टर अखंडता को बनाए रखने की आवश्यकता होती है।
5. कोलेजनेज़ वी., अग्नाशयी आइलेट कोशिकाओं और संयोजी ऊतक कोशिकाओं के पृथक्करण के लिए उपयुक्त है।

यौगिक ट्रिप्सिन के अनुप्रयोग क्षेत्र के बारे में

एक्यूटेस एक सेल डाइजेस्ट है जिसमें प्रोटीयोलिटिक और कोलेजनेज गतिविधि होती है, और यह पारंपरिक ऊतक संवर्धन वाहिकाओं और एडहेरेंट कल्चर वाहिकाओं से कोशिकाओं को पचाने के लिए ट्रिप्सिन-ईडीटीए डाइजेस्ट के लिए एक आदर्श प्रतिस्थापन है। एक्यूटेस ऊतक पृथक्करण और कोशिका पृथक्करण के लिए उपयुक्त है, क्योंकि पृथक कोशिकाएं बरकरार सतह प्रतिजनों को बनाए रखती हैं और उनमें कोई भी पशु- या जीवाणु-व्युत्पन्न घटक नहीं होते हैं, जो कोशिका सतह लेबलिंग, वायरल वृद्धि विश्लेषण, प्रवाह साइटोमेट्री और बायोरिएक्टर-संबंधित परख जैसे बाद के प्रयोगों की आवश्यकताओं को पूरा कर सकते हैं।

अग्नाशयी एंजाइम प्रतिस्थापन के लिए अनुप्रयोग क्षेत्र

पर्फसेल ट्राइज़ाइम™ एक्सप्रेस एंजाइम उत्पाद अत्यधिक शुद्ध होते हैं, इनमें कोशिका क्षति कम होती है, पाचन में हल्के होते हैं, और इन्हें कमरे के तापमान पर स्थिर रूप से संग्रहीत किया जा सकता है, जो उन्हें विभिन्न सेल लाइन संस्कृतियों के लिए एक आदर्श पाचन एंजाइम बनाता है। इस प्रकार के उत्पाद को निष्क्रियता के लिए ट्रिप्सिन अवरोधकों के उपयोग की आवश्यकता नहीं होती है, और इसमें पशु मूल नहीं होता है, जो कुछ सीरम-मुक्त विकास अनुयाई कोशिका प्रयोगों के लिए अधिक अनुकूल है।

डिस्पैस के अनुप्रयोग क्षेत्र के बारे में

डिस्पेस II डिस्पेस II, एक गैर-विशिष्ट मेटालोप्रोटीनेज, आमतौर पर कोशिका जीव विज्ञान में विभिन्न ऊतकों या अंगों से एकल कोशिकाओं को अलग करने के लिए उपयोग किया जाता है, और बाद की कोशिका संस्कृतियों में उपयोग किया जाता है, जैसे कि प्राथमिक कोशिकाओं का अलगाव, सेल पासिंग, आदि, और निलंबन सेल संस्कृति के दौरान होने वाले सेल एकत्रीकरण को खत्म करने के लिए भी इसका उपयोग किया जा सकता है। कोशिका जीव विज्ञान में आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले अन्य प्रोटीज (जैसे, ट्रिप्सिन, कोलेजनेज, प्रोनेज, आदि) की तुलना में, इस एंजाइम के निम्नलिखित फायदे हैं:

1. तेज़, प्रभावी और कोमल कोशिका पाचन एंजाइम, कोशिकाओं को कम नुकसान पहुंचाते हैं, और कोशिका झिल्ली की अखंडता को बनाए रख सकते हैं;
2. बैक्टीरिया से व्युत्पन्न, कोई माइकोप्लाज्मा या अन्य पशु वायरस संदूषण नहीं;
3. मजबूत स्थिरता, तापमान, पीएच और सीरम घटकों से प्रभावित नहीं;
4. इसका उपयोग विभिन्न प्रकार के ऊतकों और कोशिकाओं को अलग करने के लिए किया जा सकता है।

संबंधित उत्पाद अनुशंसाएँ

सूची की संख्या	प्रोडक्ट का नाम	आकार
40123ES60	पर्फसेल™एल ट्रिप्सिन-ईडीटीए (0.25%), फिनोल रेड	100 एमएल
40124ES60	पर्फसेल™ ट्रिप्सिन-कोई EDTA (0.25%) नहीं, कोई फिनोल रेड नहीं	100 एमएल
40126ES60	पर्फसेल™ ट्रिप्सिन (0.25%), फिनोल रेड	100 एमएल
40127ES60	पर्फसेल™ ट्रिप्सिन-ईडीटीए (0.25%), फिनोल रेड	100 एमएल
40101ईएस25	ट्रिप्सिन 1:250(पाउडर)	25 ग्राम
40512ईएस10/60	पर्फसेल™ रिकॉम्बिनेंट ट्रिप्सिन (पाउडर)	10 मिलीग्राम/100 मिलीग्राम
20416ईएस60	पुनः संयोजक ट्रिप्सिन (MS-SAFE)	100 माइक्रोग्राम
40134ES60	पर्फसेल ट्राइज़ाइम™एक्सप्रेस	100 एमएल
40135ईएस60	पर्फसेल ट्राइज़ाइम™एक्सप्रेस	100 एमएल
40506ES60	एक्यूटेस	100 एमएल
40104ईएस60/80	डिस्पैस II	100 मिलीग्राम/1 ग्राम