चित्र 1 घरेलू और अंतर्राष्ट्रीय विनियमों द्वारा आवश्यक माइकोप्लाज्मा संदूषण परीक्षण बिंदु

पारंपरिक माइकोप्लाज्मा पहचान विधियों में मुख्य रूप से कल्चर विधियाँ और संकेतक सेल विधियाँ शामिल हैं। हालाँकि, इन दो विधियों के लंबे पहचान चक्र या संवेदनशीलता मुद्दों के कारण, वे उद्यमों के लिए विस्तारित उत्पादन या उत्पाद रिलीज़ चक्रों की ओर ले जाते हैं। सेल और जीन थेरेपी के विकास के साथ, माइकोप्लाज्मा पहचान की समयबद्धता और संवेदनशीलता के लिए उद्योग की आवश्यकताएँ तेज़ी से सख्त हो गई हैं। छोटी शेल्फ लाइफ़ ऐसी लंबी पहचान अवधि का समर्थन करने के लिए अपर्याप्त है, यही वजह है कि रैपिड NAT (न्यूक्लिक एसिड टेस्टिंग) विधि विभिन्न माइकोप्लाज्मा पहचान विधियों में से एक है।

चित्र 2 घरेलू और अंतर्राष्ट्रीय विनियमों में सूचीबद्ध माइकोप्लाज्मा का पता लगाने के तरीके

एनएटी (न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन तकनीक) के आधार पर, यीसेन ने तीव्र माइकोप्लाज्मा पहचान किटों की एक श्रृंखला विकसित की है, जिसमें माइकोप्लाज्मा रियल-टाइम क्यूपीसीआर डिटेक्शन किट, माइकअवे™ प्लस-कलर वन-स्टेप माइकोप्लाज्मा डिटेक्शन किट और जीमाइक-पीसीआर माइकोप्लाज्मा टेस्ट किट शामिल हैं।

1.माइकोप्लाज्मा रियल-टाइम qPCR डिटेक्शन किट

यह उत्पादन कच्चे माल, सेल बैंकों, वायरल बीजों, वायरल या सेल हार्वेस्ट तरल पदार्थ और चिकित्सीय कोशिकाओं में संभावित माइकोप्लाज्मा संदूषण का तेजी से गुणात्मक पता लगाने के लिए एक उत्पाद है। इसका उपयोग मुख्य रूप से बायोफार्मास्युटिकल्स के अनुसंधान, विकास, उत्पादन और रिलीज प्रक्रियाओं में किया जाता है।

उत्पाद योग्यता

विनियामक अनुपालन: ईपी2.6.7, जेपी जी3, और यूएसपी 63 फार्माकोपिया की आवश्यकताओं के अनुसार मान्य, अंतर्राष्ट्रीय आधिकारिक संगठनों के मानकों को पूरा करना।

लेखापरीक्षा अनुपालन: उत्पाद उत्पादन ISO13485 गुणवत्ता प्रबंधन प्रणाली मानकों का अनुपालन करता है और व्यापक लेखापरीक्षा दस्तावेजीकरण द्वारा समर्थित है।

गुणवत्ता आश्वासन: किट के लिए आवश्यक सभी एंजाइम कच्चे माल स्वयं उत्पादित हैं और उनका औद्योगिकीकरण किया गया है, जिससे स्थिर आपूर्ति सुनिश्चित होती है।

तकनीकी अनुभव संचयन: टैकमैन पद्धति में ठोस तकनीकी आधार है, और किट संवेदनशीलता 10 सीएफयू/एमएल और उससे नीचे तक पहुंच सकती है।

उत्पाद प्रदर्शन पर ध्यान केंद्रित करें: दोहरे अवरोधक एंटीबॉडी के साथ टैक एंजाइम एंटीबॉडी लाइब्रेरी, किट की विशिष्टता, संवेदनशीलता और स्थिरता को बढ़ाती है।

उत्पाद की विशेषताएँ

एकाधिक पहचान प्रकार: अनुकूलित टैकमैन जांच 183 माइकोप्लाज्मा प्रजातियों का पता लगा सकती है।

प्रयोग करने में आसान: नमूना तैयार करने और परीक्षण के लिए कुल समय 3 घंटे से भी कम है, जिससे संवर्धन विधियों से जुड़ी 28 दिन की प्रतीक्षा की आवश्यकता समाप्त हो जाती है।

उच्च संवेदनशीलता: इसकी पहचान सीमा 10 CFU/mL जितनी कम है, जो इसे प्रत्यक्ष संवर्धन विधियों का एक व्यवहार्य विकल्प बनाती है।

उच्च विशिष्टता: प्राइमर और प्रोब्स को 16S rRNA को लक्ष्य करके डिजाइन किया गया है, ताकि क्लोस्ट्रीडिया और लैक्टोबैसिली जैसी निकट संबंधी प्रजातियों के साथ कोई क्रॉस-रिएक्शन न हो।

उच्च सुरक्षा: किट में मौजूद पॉजिटिव कंट्रोल (पीसी) गैर-संक्रामक है, जिससे संदूषण का खतरा पूरी तरह समाप्त हो जाता है।

मजबूत हस्तक्षेप प्रतिरोध: आंतरिक नियंत्रण (आईसी) के प्रयोग से प्रतिक्रिया की तैयारी में नमूना हस्तक्षेप और असामान्यताओं को बाहर करने में मदद मिलती है, जिससे गलत नकारात्मक परिणामों से प्रभावी रूप से बचा जा सकता है।

चित्र 3 माइकोप्लाज्मा रियल-टाइम qPCR डिटेक्शन किट का उपयोग करके माइकोप्लाज्मा का पता लगाने के लिए कार्यप्रवाह

2.MycAway™ प्लस-कलर वन-स्टेप माइकोप्लाज्मा डिटेक्शन किट

इसमें एक अद्वितीय आइसोथर्मल प्रवर्धन तकनीक का उपयोग किया गया है, जो उच्च रंग भेदभाव प्रदान करता है। नीले-बैंगनी (नकारात्मक) से आसमानी नीले (सकारात्मक) में परिवर्तन नग्न आंखों से अधिक आसानी से पहचाना जा सकता है। इसके अतिरिक्त, इसमें झूठे सकारात्मक परिणामों की घटना को खत्म करने के लिए संदूषण-रोधी घटक शामिल हैं।

चित्र 4: माइकअवे™ प्लस-कलर वन-स्टेप माइकोप्लाज्मा डिटेक्शन किट का उपयोग करके माइकोप्लाज्मा का पता लगाने की संचालन प्रक्रिया

3.जीमाइक-पीसीआर माइकोप्लाज्मा खोजकिट

पारंपरिक एक-चरणीय पीसीआर पहचान विधियों के विपरीत, प्राइमरों की संख्या एक जोड़ी से तीन जोड़े तक बढ़ाई जाती है, जो नेस्टेड पीसीआर प्रवर्धन के लिए माइकोप्लाज्मा 16S और 23S rRNA के संरक्षित क्षेत्रों को लक्षित करती है। यह न केवल गैर-विशिष्ट उत्पादों को कम करता है, बल्कि उत्पाद की संवेदनशीलता को भी महत्वपूर्ण रूप से बढ़ाता है, जिससे माइकोप्लाज्मा की एक ही प्रति का पता लगाना संभव हो जाता है।

、

चित्र 5 GMyc-PCR माइकोप्लाज्मा परीक्षण किट का उपयोग करके माइकोप्लाज्मा का पता लगाने की संचालन प्रक्रिया

माइकोप्लाज्मा हटाना

सेल कल्चर की प्रक्रिया में, नियमित परीक्षण प्रभावी रूप से बड़े पैमाने पर माइकोप्लाज्मा संदूषण को रोक सकता है। हालाँकि, यदि कोशिकाएँ पहले से ही माइकोप्लाज्मा से संदूषित हैं, तो उन्हें तुरंत संभालना होगा। सबसे अच्छा अभ्यास उच्च दबाव में दूषित कोशिकाओं को निष्फल करना और फिर उन्हें अन्य स्वच्छ सेल लाइनों को दूषित होने से बचाने के लिए त्यागना है। यदि दूषित कोशिकाएँ विशेष रूप से मूल्यवान हैं और माइकोप्लाज्मा संदूषण को हटाना आवश्यक है, तो इस लक्ष्य को प्राप्त करने के लिए एंटीबायोटिक दवाओं के संयोजन का उपयोग किया जा सकता है। चूँकि माइकोप्लाज्मा में कोशिका भित्ति नहीं होती है, इसलिए पारंपरिक एंटीबायोटिक्स आमतौर पर उनके खिलाफ अप्रभावी होते हैं। इसलिए, एक उपयुक्त माइकोप्लाज्मा हटाने वाले अभिकर्मक का चयन करना महत्वपूर्ण है।

येसेन का माइकअवे™ ट्रीटमेंट (1000×) एक मिश्रित एंटीबायोटिक तैयारी है जिसमें माइकोप्लाज्मा पर रोगाणुरोधी प्रभाव वाले तीन घटक होते हैं: क्विनोलोन, टेट्रासाइक्लिन डेरिवेटिव और मैक्रोलाइड एंटीबायोटिक्स। यह माइकोप्लाज्मा हटाने वाला अभिकर्मक कोशिकाओं को नुकसान पहुँचाए बिना डीएनए संश्लेषण और माइकोप्लाज्मा वृद्धि के लिए आवश्यक प्रोटीन के उत्पादन को बाधित करके प्रभावी माइकोप्लाज्मा निकासी प्राप्त करता है। यह कोशिका बचाव को अधिकतम करता है और माइकोप्लाज्मा संदूषण के कारण होने वाले नुकसान को कम करता है।

उत्पाद की विशेषताएँ

कम विषाक्तता: कोशिकाओं के लिए न्यूनतम विषाक्तता, जिससे बाद के कोशिका प्रयोगों जैसे कि ट्रांसफेक्शन और व्यवहार्यता परीक्षण में कोई व्यवधान न हो।

उच्च स्थिरता: अभिकर्मक को -20°C पर लम्बे समय तक भंडारित किया जा सकता है तथा इसकी उच्च प्रभावकारिता बनी रहती है।

प्रयोग करने में आसान: बस उत्पाद को माइकोप्लाज्मा-दूषित संवर्धन माध्यम में डालें और इनक्यूबेट करें।

तेजी से कार्य करने वाला: 'तत्काल परिणाम', जिसका प्रभाव 3 दिनों के भीतर दिखाई देने लगता है।

व्यापक परछाई: प्रयोगशालाओं में पाए जाने वाले अधिकांश माइकोप्लाज्मा प्रकारों को हटाने में सक्षम।

चित्र 6.माइकोप्लाज्मा रिमूवल रिएजेंट साइटोटॉक्सिसिटी टेस्ट का चित्रण

माइकोप्लाज्मा की रोकथाम

सेल कल्चर की प्रक्रिया में माइकोप्लाज्मा संदूषण अक्सर होता है। हालांकि, इसकी अनूठी विशेषताओं के कारण, इसे नंगी आंखों या सूक्ष्म उपकरणों से पहचानना मुश्किल है। इसलिए, माइकोप्लाज्मा की रोकथाम में अच्छा काम करना विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। कल्चर माध्यम में माइकोप्लाज्मा रोकथाम अभिकर्मकों को जोड़कर माइकोप्लाज्मा संदूषण की प्रभावी रोकथाम हासिल की जा सकती है।

वर्तमान में, प्रयोगशालाओं में माइकोप्लाज्मा मुख्य रूप से इनसे उत्पन्न होता है: कोशिकाओं के बीच क्रॉस-संदूषण, काम के माहौल या प्रयोगशाला उपकरणों का संदूषण, प्रयोगकर्ताओं द्वारा खराब सड़न रोकने वाली तकनीक, दूषित संस्कृति मीडिया या अभिकर्मकों, और माइकोप्लाज्मा संदूषण वाले मूल ऊतक या अंग। येसेन द्वारा विकसित माइकोप्लाज्मा रोकथाम उत्पाद श्रृंखला में सादगी, सुविधा और उच्च स्थिरता है, जो इसे नियमित सेल लाइन संस्कृतियों में माइकोप्लाज्मा रोकथाम के लिए बहुत उपयुक्त बनाती है।

उत्पाद की जानकारी

उत्पाद	सूची की संख्या	प्रोडक्ट का नाम	उत्पाद विनिर्देश
नमूना पूर्व उपचार किट	18461ईएस	MolPure® चुंबकीय अवशिष्ट डीएनए नमूना तैयारी किट	25टी/100टी
	18467ईएस	MolPure® Mag48 नमूना तैयारी किट FN	3×16टी/ 6×16टी
न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण उपकरण	80511ईएस	48-चैनल स्वचालित न्यूक्लिक एसिड एक्सट्रैक्टर	48 चैनल
माइकोप्लाज्मा डिटेक्शन किट	40619ईएस	MycAway® माइकोप्लाज्मा रियल-टाइम qPCR डिटेक्शन किट (2जी)	25टी/100टी
	40612ईएस	MycAway™ प्लस-कलर वन-स्टेप माइकोप्लाज्मा डिटेक्शन किट	25टी/100टी
	40601ईएस	जीमाइक-पीसीआर माइकोप्लाज्मा टेस्ट किट	10परख/20परख
माइकोप्लाज्मा निष्कासन अभिकर्मक	40607ईएस	मायकअवेटीएम उपचार (1000×) - माइकोप्लाज्मा रिमूवल रिएजेंट	1एमएल/5×1एमएल
माइकोप्लाज्मा रोकथाम अभिकर्मक	40608ईएस	मायकअवेटीएम प्रोफिलैक्टिक (2000×) - माइकोप्लाज्मा रोकथाम अभिकर्मक	1एमएल/5×1एमएल
	40605ईएस	मायकअवेटीएम स्प्रे (उपयोग हेतु तैयार)	500 एमएल/2×500 एमएल/10×500 एमएल
	40609ईएस	माइकगार्डटीएम-1 घोल (100×), CO2 इनक्यूबेटर के जल स्नान को कीटाणुरहित करने के लिए	100 मिलीलीटर
	40610ईएस	माइकगार्डटीएम-2 समाधान (500×), साधारण पानी के स्नान को कीटाणुरहित करने के लिए	100 मिलीलीटर