सेल ट्रांसफ़ेक्शन कोशिकाओं में बहिर्जात न्यूक्लिक एसिड (जैसे डीएनए, mRNA, siRNA, miRNA, आदि) को पेश करने की एक तकनीक है, और यह आधुनिक बायोमेडिकल अनुसंधान में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। जैसे-जैसे वैज्ञानिक अनुसंधान गहराई से आगे बढ़ रहा है, विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं की मांग भी तेजी से विविध होती जा रही है, जिसमें सामान्य HEK293 कोशिकाओं से लेकर विशेष प्रकार की ट्यूमर कोशिकाओं और प्राथमिक कोशिकाओं तक शामिल हैं, जिनमें से प्रत्येक की अपनी अनूठी विशेषताएं और आवश्यकताएं हैं। इसी तरह, विभिन्न प्रकार के न्यूक्लिक एसिड को भी कुशल और सुरक्षित जीन डिलीवरी सुनिश्चित करने के लिए विशिष्ट ट्रांसफ़ेक्शन रणनीतियों की आवश्यकता होती है। इसलिए, प्रयोग की सफलता के लिए सही ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक चुनना आवश्यक है।
रासायनिक अभिकर्मक अभिकर्मक कोशिका जीव विज्ञान अनुसंधान में अपरिहार्य उपकरण हैं, जो जीन अभिव्यक्ति, मौन या कार्यात्मक अध्ययन को प्राप्त करने के लिए विभिन्न तंत्रों के माध्यम से कोशिकाओं में डीएनए, mRNA, siRNA, miRNA आदि जैसे न्यूक्लिक एसिड पेश करते हैं। वर्तमान में, आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले रासायनिक अभिकर्मक अभिकर्मकों में मुख्य रूप से लिपोसोम अभिकर्मक अभिकर्मक, PEI अभिकर्मक अभिकर्मक और कैल्शियम फॉस्फेट अभिकर्मक अभिकर्मक शामिल हैं, जिनमें से प्रत्येक के अपने अनूठे फायदे और लागू परिदृश्य हैं।
तालिका 1: विभिन्न रासायनिक अभिकर्मकों के बीच क्या अंतर हैं
| उत्पाद श्रेणी | सिद्धांत | लाभ | नुकसान |
| लिपोसोम ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक | 1. लाइपोसोम ट्रांसफेक्शन अभिकर्मकों में धनात्मक आवेश वाले लिपिड होते हैं जो ऋणात्मक आवेश वाले न्यूक्लिक एसिड से बंध कर लिपिड-न्यूक्लिक एसिड कॉम्प्लेक्स बनाते हैं। 2. ये परिसर ऋणात्मक आवेशित कोशिका झिल्ली की ओर आकर्षित होते हैं। 3. कोशिका एंडोसाइटोसिस के माध्यम से कॉम्प्लेक्स को एंडोसोम्स में समाहित कर लेती है। 4. कॉम्प्लेक्स में लिपिड का "प्रोटॉन स्पंज" प्रभाव एंडोसोम अम्लीकरण को रोकता है, जिससे झिल्ली अस्थिर हो जाती है और टूट जाती है, जिससे कॉम्प्लेक्स कोशिका द्रव्य में मुक्त हो जाते हैं। 5. छोटे न्यूक्लिक अम्ल जैसे siRNA, miRNA, या mRNA कोशिका द्रव्य में कार्य कर सकते हैं, जबकि DNA को अभिव्यक्त होने के लिए नाभिक में प्रवेश करना पड़ता है। 6. एक बार नाभिक में पहुंचने के बाद, डीएनए को mRNA में लिपिबद्ध किया जाता है और प्रोटीन में अनुवादित किया जाता है, जो विदेशी जीन को व्यक्त करता है। | 1. लाइपोसोम ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक विभिन्न कोशिका रेखाओं के साथ उच्च दक्षता प्रदान करते हैं, जिनमें ट्रांसफेक्ट करने में कठिन प्राथमिक कोशिकाएं भी शामिल हैं। 2. वे बहुमुखी हैं, अनुयाई और निलंबन कोशिकाओं, तथा DNA, siRNA और miRNA जैसे विभिन्न न्यूक्लिक अम्लों के साथ संगत हैं। 3. ये अभिकर्मक सीरम युक्त मीडिया में अच्छी तरह से काम करते हैं, जिससे सीरम को हटाने की आवश्यकता नहीं होती और इस प्रकार कोशिका क्षति न्यूनतम हो जाती है। | 1. लाइपोसोम ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक कोशिकाओं के लिए विषैले हो सकते हैं, विशेष रूप से उच्च सांद्रता में या लम्बी अवधि तक, जिससे कोशिका का अस्तित्व और कार्य प्रभावित हो सकता है। 2. कैल्शियम फॉस्फेट ट्रांसफ़ेक्शन जैसी पारंपरिक विधियों की तुलना में वे अधिक महंगी हैं। 3. सीरम क्लीयरेंस, फेफड़े के ऊतकों में संचयन, तथा तीव्र सूजन प्रतिक्रिया और उच्च विषाक्तता उत्पन्न करने की क्षमता के कारण इनका इन विवो अनुप्रयोग सीमित है। |
| पी ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक | 1. PEI, एक धनात्मक आवेशित बहुलक, ऋणात्मक आवेशित DNA से बंध कर इलेक्ट्रोस्टेटिक अंतःक्रियाओं के माध्यम से PEI-DNA कॉम्प्लेक्स बनाता है। 2. ये कॉम्प्लेक्स ऋणात्मक रूप से आवेशित कोशिका झिल्ली से जुड़ जाते हैं। 3. कोशिकाएं एंडोसाइटोसिस के माध्यम से PEI-DNA कॉम्प्लेक्स को निगल लेती हैं, तथा एंडोसोम्स का निर्माण करती हैं। 4. PEI के "प्रोटॉन स्पंज" प्रभाव के कारण अम्लीय वातावरण में एंडोसोम्स फूल जाते हैं और फट जाते हैं, जिससे कॉम्प्लेक्स कोशिका द्रव्य में मुक्त हो जाते हैं। 5.कोशिका द्रव्य में, PEI-DNA बंध टूट जाते हैं, जिससे DNA नाभिक में प्रवेश कर जाता है, जहां इसका प्रतिलेखन होता है और प्रोटीन में परिवर्तित हो जाता है। | 1. पीईआई ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक डीएनए के साथ स्थिर परिसर बनाते हैं, जिससे ट्रांसफेक्शन दक्षता बढ़ जाती है। 2. अन्य धनायनिक पॉलिमरों की तुलना में इनमें कोशिका विषाक्तता कम होती है, जिससे कोशिका की व्यवहार्यता और कार्यक्षमता बनी रहती है। 3. पीईआई अभिकर्मक लागत प्रभावी समाधान प्रदान करते हैं, विशेष रूप से वायरल वेक्टर उत्पादन जैसे बड़े पैमाने पर संक्रमण के लिए। 4. पीईआई अभिकर्मक नैदानिक और वाणिज्यिक उत्पादन के लिए जीएमपी-ग्रेड में उपलब्ध हैं, जो गुणवत्ता और अनुपालन सुनिश्चित करते हैं। | 1. PEI ट्रांसफेक्शन अभिकर्मकों की बहुमुखी प्रतिभा सीमित है, इनका उपयोग मुख्य रूप से DNA के लिए किया जाता है तथा ये mRNA, siRNA, तथा miRNA जैसे अन्य न्यूक्लिक अम्लों के साथ कम प्रभावी होते हैं। 2. वे विशिष्ट कोशिका प्रकारों में, जैसे HEK293 कोशिकाओं में, वायरस पैकेजिंग और प्रोटीन अभिव्यक्ति के लिए उच्च दक्षता दिखाते हैं, लेकिन संक्रमण-में-कठिन कोशिकाओं के साथ खराब प्रदर्शन करते हैं। |
| कैल्शियम फॉस्फेट ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक | 1. डीएनए/कैल्शियम फॉस्फेट सह-अवक्षेप फॉस्फेट के साथ HEPES बफर में बनते हैं, जहां डीएनए का ऋणात्मक आवेश धनात्मक कैल्शियम आयनों से बंध जाता है। 2. कोशिकाएं इन सह-अवक्षेपों को ग्रहण कर लेती हैं, जो उनकी सतह पर एंडोसाइटोसिस के माध्यम से चिपक जाते हैं, जो कि अभिकर्मक दक्षता के लिए एक महत्वपूर्ण कदम है। 3. कोशिकाओं के अंदर, सह-अवक्षेप डीएनए मुक्त करते हैं, जिससे जीनोम में क्षणिक अभिव्यक्ति या स्थिर एकीकरण हो सकता है। | 1. कैल्शियम फॉस्फेट ट्रांसफ़ेक्शन लागत प्रभावी है, सीमित बजट वाली प्रयोगशालाओं के लिए उपयुक्त है। 2. इसे करना आसान है, इसके लिए सरल चरणों और न्यूनतम तकनीकी कौशल की आवश्यकता होती है। 3. इसका उपयोग क्षणिक प्रोटीन अभिव्यक्ति और स्थिर कोशिका रेखाएँ बनाने दोनों के लिए किया जा सकता है। | 1. कैल्शियम फॉस्फेट अभिकर्मक दक्षता परिवर्तनशील है और पीएच और डीएनए शुद्धता जैसे कारकों के प्रति संवेदनशील है, जिसके कारण अभिकर्मक विफल हो सकते हैं, विशेष रूप से अशुद्ध डीएनए के साथ। 2. यह सभी प्रकार की कोशिकाओं के लिए उपयुक्त नहीं है, मुख्य रूप से HEK293 कोशिकाओं के लिए उपयोग किया जाता है, और प्राथमिक कोशिकाओं और कुछ अन्य प्रकार की कोशिकाओं के लिए कम प्रभावी है। |
येसेन बायोटेक अपनी मजबूत आरएंडडी क्षमताओं और उत्पादन प्रौद्योगिकी टीम का लाभ उठाते हुए, डीएनए और आरएनए ट्रांसफेक्शन अभिकर्मकों के फॉर्मूलेशन को लगातार अनुकूलित करता है और उत्पादन प्रक्रियाओं में सुधार करता है। कंपनी ने ट्रांसफेक्शन अभिकर्मकों के क्षेत्र में अनुसंधान संस्थानों और उद्यमों की व्यापक जरूरतों को पूरा करने के लिए कैशनिक लिपोसोम और कैशनिक पॉलिमर पर आधारित एक विविध उत्पाद लाइन शुरू की है। ये उत्पाद ट्रांसफेक्शन अभिकर्मकों के विभिन्न अनुप्रयोगों को कवर करते हैं और इनके निम्नलिखित लाभ हैं:
व्यापक प्रयोज्यता: प्लास्मिड डीएनए, siRNA, miRNA, और mRNA को कुशलतापूर्वक ट्रांसफ़ेक्ट करने में सक्षम।
उच्च अभिकर्मक दक्षता: कोशिका अभिकर्मण दक्षता 90% से अधिक है, जो एकाधिक प्लाज्मिडों के सह-अभिकर्मण की आवश्यकताओं को पूरा करती है।
एकाधिक सेल लाइनों में सत्यापित: 40 से अधिक विभिन्न कोशिका रेखाओं में अच्छी अभिकर्मक दक्षता का प्रदर्शन किया गया।
अनुप्रयोगों की विस्तृत श्रृंखला: स्थिर सेल लाइन निर्माण, क्षणिक प्रोटीन अभिव्यक्ति, तथा AAV और LV वायरल पैकेजिंग के लिए उपयोग किया जाता है।
साहित्य में उच्च उद्धरण आवृत्ति: 400 से अधिक उच्च प्रभाव वाले प्रकाशनों में उद्धृत, कुल प्रभाव कारक 3000+ से अधिक।
अपनी आवश्यकताओं के अनुरूप ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक का चयन कैसे करें
विभिन्न कोशिका प्रकारों और न्यूक्लिक अम्लों (जैसे डीएनए, एमआरएनए, सीआरएनए, आदि) में अभिकर्मक दक्षता और स्थितियों के लिए विशेष आवश्यकताओं को देखते हुए, प्रयोग की सफलता के लिए सही अभिकर्मक अभिकर्मक का चयन करना महत्वपूर्ण है।प्रयोग की विशिष्ट आवश्यकताओं के आधार पर, एक ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक चुनें जो ट्रांसफ़ेक्शन दक्षता को अनुकूलित कर सके और प्रयोगात्मक डेटा की सटीकता और प्रयोगात्मक परिणामों की मजबूती सुनिश्चित करने के लिए साइटोटॉक्सिसिटी को कम कर सके। YEASEN Biotech विभिन्न अनुप्रयोग परिदृश्यों के लिए अनुकूलित उत्पादों की एक श्रृंखला प्रदान करता है, यह सुनिश्चित करता है कि आप अपने शोध उद्देश्यों के लिए सबसे उपयुक्त ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक पा सकें और अपनी विशिष्ट प्रयोगात्मक आवश्यकताओं को पूरा कर सकें।
केस प्रस्तुतिकरण
6-वेल प्लेट सिस्टम में, GFP-एक्सप्रेसिंग प्लास्मिड को YEASEN 40802ES ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक और एक प्रतियोगी के ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक का उपयोग करके HEK293 कोशिकाओं में ट्रांसफ़ेक्ट किया गया। ट्रांसफ़ेक्टेड कोशिकाओं में GFP अभिव्यक्ति को ट्रांसफ़ेक्शन के 48 घंटे बाद माइक्रोस्कोप के नीचे देखा गया। YEASEN के ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक का प्रदर्शन बेहतर था।
12-वेल प्लेट में, HEK293 कोशिकाओं को कुल 1 μg प्लास्मिड डीएनए के साथ ट्रांसफ़ेक्ट किया गया; 3 μL ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक का उपयोग करके, दो प्लास्मिडों को सफलतापूर्वक सह-ट्रांसफ़ेक्ट करना संभव था।
ग्राहक मामला
अनुप्रयोगों की एक व्यापक श्रृंखला के साथ, एकाधिक सेल लाइनों में मान्य।
| प्रकोष्ठों | प्रकोष्ठों | प्रकोष्ठों | प्रकोष्ठों | प्रकोष्ठों |
| 293एफ | कैको2 | एचईके 293टी | एलएम3 | एनआईएच-3T3 |
| 293टी | चो K1 | HEK293 | एमसीएफ10ए | पीसी12 |
| 3त3 | क्योंकि -7 | हेला | एमसीएफ-7 | आरएw264.7 |
| 5-8एफ | डीएफ-1 | हेप 3बी | एमडीए MB-231 | आरकेओ |
| ए549 | एच520 | हेपा1-6 | एमईएफ | एसजीसी-7901 |
| बी.वी.-2 | एच9 | हेपजी2 | एमकेएन-28 | एसएमसीसी7721 |
| सी2सी12 | एच9सी2 | एचयूवीईसी | एन2ए | वेरो |
| सी 6 | हाकाटी | लेंटी एक्स-293टी | एनसीआई-एच1975 | एचसीटी116 |
| डब्ल्यूआरएल-68 | टीएचपी-1 | एमडीसीके | हेप2सी | अधिक… |
उत्पादों की सूची
| बिल्ली संख्या | प्रोडक्ट का नाम | न्यूक्लिक अम्ल | आवेदन |
| 40802ईएस | डीएनए | उच्च प्रदर्शन लिपोसोम ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक | |
| 40804ईएस | हिएफ़ ट्रांस®पॉलीब्रीन(हेक्साडीमेथरिन ब्रोमाइड) (10 मिलीग्राम/एमएल) | एल.वी. | लेंटिवायरल संक्रमण क्षमता को बढ़ाना। |
| 40806ईएस | siRNA, miRNA, ASO | उच्च नॉकडाउन दक्षता वाले siRNA और miRNA-विशिष्ट ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक। | |
| 40808ईएस | डीएनए, siRNA, miRNA | उन्नत लिपोसोम अभिकर्मक अभिकर्मक जो विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं में डीएनए और आरएनए अभिकर्मक कर सकता है, तथा अभिकर्मण में कठिनाई वाले कोशिकाओं पर भी अच्छा प्रभाव दिखा रहा है। | |
| 40809ईएस | एमआरएनए | विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं में उच्च अभिकर्मक दक्षता वाला mRNA-विशिष्ट अभिकर्मक। | |
| 40815ईएस | डीएनए | प्रोटीन अभिव्यक्ति और वायरल पैकेजिंग (पाउडर रूप) के लिए व्यापक रूप से लागू। | |
| 40816ईएस | हाईफ़ ट्रांस®पॉलीएथिलीनिमाइन लीनियर (पीईआई) एमW40000（तेज लिसिस） | डीएनए | |
| 40820ईएस | डीएनए | वायरल पैकेजिंग के लिए समर्पित ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक, जो AAV और LV वायरल पैकेजिंग के लिए उच्च पैदावार प्राप्त करने में सक्षम हैं | |
| 40821ईएस | डीएनए | ||
| 40823ईएस | डीएनए | उच्चतम ट्रांसफ़ेक्शन दक्षता। सस्पेंशन कल्चर में AAV के उत्पादन के लिए विशेष रूप से उपयुक्त, जिससे उच्च आउटपुट प्राप्त होता है। |
कई उच्च प्रभाव वाले प्रकाशनों में उद्धृत, गुणवत्ता सुनिश्चित करना (उद्धृत संदर्भों की आंशिक सूची)
- लिआंग एक्स, गोंग एम, वांग जेड, एट अल. एलएनसीआरएनए ट्यूबएआर कॉम्प्लेक्स TUBB4A और TUBA1A के साथ माइक्रोट्यूब्यूल असेंबली को बढ़ावा देने और माइलिनेशन को बनाए रखने के लिए। सेल डिस्कोव। 2024;10(1):54. 2024 मई 21 को प्रकाशित। doi:10.1038/s41421-024-00667-y. आईएफ=33.5(40808ईएस)
- वांग ए, चेन सी, मेई सी, एट अल. लाइसोसोमल डिसफंक्शन की सहज प्रतिरक्षा संवेदन कई लाइसोसोमल स्टोरेज विकारों को प्रेरित करती है। नेट सेल बायोल. 2024;26(2):219-234. doi:10.1038/s41556-023-01339-x.आईएफ=21.3(40802ईएस)
- लियू एच, जेन सी, ज़ी जे, एट अल. टीएफएएम एक ऑटोफैगी रिसेप्टर है जो साइटोप्लाज़मिक माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए से जुड़कर सूजन को सीमित करता है। नेट सेल बायोल. 2024;26(6):878-891. doi:10.1038/s41556-024-01419-6.आईएफ=21.3(40802ईएस)
- वांग डब्ल्यूडब्ल्यू, जी एसवाई, झांग डब्ल्यू, एट अल. नॉन-हाइपरट्रॉफिक एपेलिन रिसेप्टर मॉड्यूलेटर की संरचना-आधारित डिजाइन। सेल। 2024;187(6):1460-1475.e20. doi:10.1016/j.cell.2024.02.004.आईएफ=64.5(40802ईएस)
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- जियांग एल, ज़ी एक्स, सु एन, एट अल. जीवित कोशिकाओं में दोहरे उत्सर्जन प्रतिदीप्ति और बायोल्यूमिनेसेंस इमेजिंग के लिए बड़े स्टोक्स शिफ्ट फ्लोरोसेंट आरएनए। नेट मेथड्स। 2023;20(10):1563-1572. doi:10.1038/s41592-023-01997-7.आईएफ=48(40802)
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- लू वाई वाई, झू सी वाई, डिंग वाई एक्स, एट अल. सेफरैन्थिन, केएपी1-एनआरएफ2 का एक नियामक, ऑक्सीडेटिव तनाव और ऊर्जा चयापचय मार्ग के माध्यम से गैस्ट्रिक कैंसर के विकास को रोकता है। सेल डेथ डिस्कोव. 2023;9(1):450. प्रकाशित 2023 दिसंबर 12. doi:10.1038/s41420-023-01752-z.आईएफ=7(40806ईएस)
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- हुआंग वाई, मोट्टा ई, नानवुमा सी, एट अल. माइक्रोग्लिया/मैक्रोफेज-व्युत्पन्न मानव सीसीएल18 सीसीआर8-एसीपी5 अक्ष के माध्यम से ग्लियोमा प्रगति को बढ़ावा देता है जिसका विश्लेषण मानवकृत स्लाइस मॉडल में किया गया है। सेल रेप. 2022;39(2):110670. doi:10.1016/j.celrep.2022.110670.आईएफ=8.8(40804ईएस)
- चाई क्यू, यू एस, झोंग वाई, एट अल. एक बैक्टीरियल फॉस्फोलिपिड फॉस्फेटस यूबिक्विटिन को हाईजैक करके होस्ट पायरोप्टोसिस को रोकता है। विज्ञान। 2022;378(6616):eabq0132. doi:10.1126/science.abq0132.आईएफ=63.714(40802ईएस)
- लियू आर, यांग जे, याओ जे, एट अल. इंजीनियर्ड लाइट-स्विचेबल आरएनए-बाइंडिंग प्रोटीन का उपयोग करके आरएनए फ़ंक्शन और मेटाबोलिज़्म का ऑप्टोजेनेटिक नियंत्रण। नेट बायोटेक्नोलोजी। 2022;40(5):779-786. doi:10.1038/s41587-021-01112-1.आईएफ=54.908(40802ईएस)
- चेन एस, चेन जी, जू एफ, एट अल. इंजीनियर्ड आईएल-5-एंकर्ड काइमेरिक एंटीजन रिसेप्टर टी कोशिकाओं के माध्यम से एलर्जिक इओसिनोफिलिक अस्थमा का उपचार। सेल डिस्कोव। 2022;8(1):80. प्रकाशित 2022 अगस्त 16. doi:10.1038/s41421-022-00433-y.आईएफ=38.079(40804ईएस)