- अत्यधिक कुशल रिवर्स द्वारा संचालित RT-qPCR ट्रांसस्क्रिप्टेज
रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (आरटी एंजाइम) एक ऐसा एंजाइम है जो आरएनए टेम्प्लेट को पूरक डीएनए (सीडीएनए) में परिवर्तित करने में सक्षम है। आणविक जीव विज्ञान अनुसंधान में, रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, विशेष रूप से आणविक निदान के क्षेत्र में एक अपरिहार्य भूमिका निभाता है। रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस की प्रक्रिया के माध्यम से, वायरस के आरएनए जीनोम को सीडीएनए में परिवर्तित किया जा सकता है, जिसे फिर क्यूपीसीआर जैसी तकनीकों का उपयोग करके प्रवर्धित और पता लगाया जा सकता है। यह विशेषता एचआईवी, इन्फ्लूएंजा ए और इन्फ्लूएंजा बी जैसे आरएनए वायरस का सटीक निदान करने में सक्षम बनाती है।
चित्र 1. रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रक्रिया का योजनाबद्ध आरेख
RT-qPCR आणविक निदान अभिकर्मकों की खोज जो अधिक तेज़, अधिक संवेदनशील और संचालित करने में आसान हैं, विकास की वर्तमान प्रमुख प्रवृत्ति बन गई है। RT-qPCR प्रक्रिया में प्रमुख कच्चे माल में से एक के रूप में, रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस को तेज़ रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन गति, उच्च संश्लेषण उपज और बेहतर गर्मी प्रतिरोध की आवश्यकता होती है। RT-qPCR के लिए अधिक उपयुक्त रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस प्राप्त करने के लिए, येसेन हाईफेयर विकसित किया हैटीएम एम-एमएलवी पर आधारित आनुवंशिक संशोधन के माध्यम से रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस की श्रृंखला, जिसमें कम आरएनएसे एच गतिविधि, उच्च तापीय स्थिरता और मजबूत निरंतर संश्लेषण क्षमता शामिल है।
चित्र 2. रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन क्रिया का योजनाबद्ध
हाईफेयर™रिवर्स ट्रांस्क्रिप्टेज़
येसेन में हाईफेयर की एक किस्म हैटीएम रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस, और एंजाइम और प्रीमिक्स सहित कई प्रकार के उत्पाद रूप प्रदान कर सकता है, आप वास्तविक आवश्यकताओं के अनुसार चुन सकते हैं। निम्न तालिका विभिन्न येसेन रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस की विशेषताओं और अनुशंसित अनुप्रयोगों को सूचीबद्ध करती है।
तालिका 1 चयन संबंधी दिशानिर्देश हाईफेयर की™ रिवर्स ट्रांस्क्रिप्टेज़| उत्पाद का नाम (उत्पाद संख्या ) | उत्पाद की विशेषताएँ | अनुशंसित अनुप्रयोग |
| तापीय रूप से स्थिर (65°C तक), जटिल टेम्पलेट्स के लिए उपयुक्त | आरटी-लैंप | |
| मजबूत संगतता, तेज गति, और उच्च संश्लेषण उपज | एक कदम आरटी-पीसीआर/क्यूपीसीआर |
नोट: ऊपर बताए गए सभी एंजाइम उच्च सांद्रता या गैर-ग्लिसरॉल फॉर्मूलेशन में उपलब्ध हैं।
अब हम RT-qPCR आणविक नैदानिक अभिकर्मकों में उपयोग किए जाने वाले रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस पर प्रकाश डालते हैं: हाईफ़ेयरटीएम वी रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस। यह एंजाइम अपनी मजबूत संगतता, तीव्र गति और उच्च संश्लेषण उपज के कारण प्रतिष्ठित है, जो 58 डिग्री सेल्सियस तक प्रतिक्रिया तापमान को सहन करने में सक्षम है। यह विशेष रूप से RT-qPCR आणविक निदान अभिकर्मकों के विकास के लिए उपयुक्त है।
हाईफेयर का प्रदर्शन™ वी रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस
1. 58 डिग्री सेल्सियस के प्रतिक्रिया तापमान को सहन करने में सक्षम, यह जटिल आरएनए टेम्पलेट्स के रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के लिए उपयुक्त है.
चित्र 3. हाईफेयर का रिवर्स ट्रांसक्रिपटेसटीएम वी रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस और ब्रांड टी* को 30 मिनट के लिए क्रमशः 55 डिग्री सेल्सियस और 58 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया गया ताकि अवशिष्ट एंजाइम गतिविधि का पता लगाया जा सके। परिणामों से पता चला कि हाईफेयरटीएम वी रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस 58 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट तक इन्क्यूबेशन के बाद भी 70% सक्रियता बनाए रख सका, जो ब्रांड टी* की तुलना में काफी अधिक था।
2.आरटी-क्यूपीसीआर की पहचान दर अन्य ब्रांडों की तुलना में बेहतर थी,और टीपता लगाने की सीमा 1 pg-1 μg थी.
चित्र 4. 293T कोशिकाओं के 1 pg-1 μg (7 ग्रेडिएंट) कुल RNA को टेम्पलेट के रूप में उपयोग करते हुए, Hifair का उपयोग करके रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किया गयाटीएम वी वन-स्टेप आरटी-जीडीएनए पाचन सुपरमिक्स qPCR (कैट # 11142), वी *, टी * के लिए। प्राप्त सीडीएनए का qPCR द्वारा मात्रात्मक विश्लेषण किया गया। परिणामों से पता चला कि 11142ES की संवेदनशीलता 1 पीजी तक पहुंच सकती है, जो अन्य ब्रांडों की तुलना में बेहतर थी।
रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस म्यूटेंट लाइब्रेरी ऑफ येसेन
येसेन रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस के विकास को बढ़ावा देना जारी रखता है साथ इसका ZymeEditorटीएम मंच। अब तक, हमने विभिन्न अनुप्रयोगों में उत्कृष्ट प्रदर्शन के साथ विभिन्न प्रकार के रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस म्यूटेंट की जांच की है, जो विविध अनुप्रयोग क्षेत्रों में विभिन्न ग्राहक समूहों की जरूरतों को पूरी तरह से पूरा कर सकते हैं।तालिका 2. रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस उत्परिवर्ती चयन गाइड येसेन का
अनुशंसित उत्पाद
| उत्पाद वर्गीकरण | प्रोडक्ट का नाम | सूची क्रमांक. |
| उच्च प्रदर्शन पीसीआर एंजाइम श्रृंखला | 10726ईएस | |
| 11300ईएस | ||
| 14455ईएस | ||
| 10603ईएस | ||
| 10125ईएस |