1. आरएनए को विघटित होने से कैसे रोकें?

2. आरएनेज़ अवरोधक क्या हैं?

3. आरएनेज़ इनहिबिटर क्या करता है?

4. म्यूरिन आरएनेज अवरोधक की विशेषताएं क्या हैं?

5. संबंधित उत्पाद और प्रदर्शन

6. संबंधित उत्पाद

7. अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न

1. आरएनए को विघटित होने से कैसे रोकें?

RNase न्यूक्लिक एसिड मेटाबोलिज्म में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है और यह लगभग किसी भी प्रकार के प्रोकैरियोट और यूकेरियोट में पाया जा सकता है। सूक्ष्मजीवों के आक्रमण से बचाव के लिए RNase शरीर के तरल पदार्थों जैसे आँसू, लार और पसीने में स्रावित होता है, और RNase त्वचा के मलबे में भी मौजूद होता है। हालाँकि, अधिकांश वातावरणों में RNase का मुख्य स्रोत सूक्ष्मजीव, अर्थात् बैक्टीरिया और कवक हैं। RNase को निष्क्रिय करना बहुत कठिन है और यह उच्च स्थिरता, ताप प्रतिरोध, अम्ल प्रतिरोध और क्षार प्रतिरोध प्रदर्शित करता है। तापीय विकृतीकरण के बाद, यह जल्दी से अपनी मूल संरचना को पुनः प्राप्त कर सकता है। RNase आमतौर पर बहुत सक्रिय होता है और यूकेरियोटिक और प्रोकैरियोटिक कोशिकाओं और ऊतकों दोनों में व्यापक रूप से वितरित होता है। नमूने में RNA केवल RNase संदूषण की थोड़ी मात्रा के साथ पूरी तरह से विघटित हो सकता है। अध्ययनों में RNase संदूषण आंतरिक और बाहरी दोनों स्रोतों से आ सकता है। कोशिकाओं में RNase मुख्य रूप से संदूषण का एक अंतर्जात स्रोत है, जबकि बहिर्जात स्रोतों में प्रयोगात्मक आपूर्ति, प्रयोगशाला वातावरण और स्वयं प्रयोगकर्ता शामिल हैं। आरएनेज, खास तौर पर आरएनेज ए परिवार के सदस्य, छोटे, सघन प्रोटीन होते हैं जिनमें कुछ सिस्टीन अवशेष होते हैं जो कई इंट्रामोलिकुलर डाइसल्फ़ाइड बॉन्ड बनाने में सक्षम होते हैं। कमरे के तापमान पर लौटने के बाद, डिनेचुरिंग एजेंट की अनुपस्थिति में, डिनेचुरेटेड आरएनेज अपनी प्राकृतिक संरचना और कुछ कार्यों को बहाल कर देगा। इसलिए, ऑटोक्लेविंग के बाद भी, बार-बार फ्रीज-थॉ चक्रों के बाद भी आरएनेज काफी सक्रियता बनाए रखते हैं। इन एंजाइमों की स्थिर प्रकृति उन्हें कई डीकंटैमिनेशन विधियों के लिए प्रतिरोधी बनाती है, जिसके लिए आमतौर पर सतहों और घोलों से आरएनेज को खत्म करने के लिए आक्रामक रासायनिक तरीकों की आवश्यकता होती है।

कमजोर आरएनए के क्षरण से बचने के लिए, आरएनए के साथ काम करते समय विशेष सावधानी बरतनी चाहिए। बहिर्जात आरएनेज को नियंत्रित करने के लिए, ऑपरेटर को प्रयोग के दौरान दस्ताने पहनने की आवश्यकता होती है, और त्वचा, दरवाज़े के हैंडल और सामान्य वस्तुओं की सतह को छूने के बाद दस्ताने बदलने चाहिए। और ऑपरेटर को आरएनए संचालन के लिए एक विशेष पिपेट गन का उपयोग करने की आवश्यकता होती है, और आरएनेज-मुक्त दीवार युक्तियों, अपकेंद्रित्र ट्यूबों, यौगिकों और अभिकर्मकों का उपयोग करना चाहिए। वेंटिलेशन छेद और खुली खिड़कियों से दूर रहें या उन्हें ढक दें, और कम-यात्रा वाले क्षेत्रों को आरएनेज-मुक्त क्षेत्रों के रूप में उपयोग करें। और आरएनए निष्कर्षण और विश्लेषण के दौरान, अन्य प्रयोग न करें जो आरएनेज संदूषण का कारण बन सकते हैं।
अंतर्जात RNase की गतिविधि को बाधित करने की विधि सबसे पहले नमूने को संरक्षित करना है। ऊतक का नमूना लेने के बाद, RNA को सीधे नहीं निकाला जाना चाहिए। इसके बजाय, इसे जल्दी से जमाया जाना चाहिए और समय पर तरल नाइट्रोजन के साथ -80 डिग्री सेल्सियस के वातावरण में संग्रहीत किया जाना चाहिए, और RNA के क्षरण को कम करने के लिए प्रयोग को जल्द से जल्द किया जाना चाहिए।कोशिकाओं को तोड़ने और RNase को निष्क्रिय करने के लिए कोशिका लाइसेट में RNase अवरोधकों को मिलाया जाता है, जिससे कोशिका टूटने के दौरान निकलने वाले RNase की गतिविधि न्यूनतम हो जाती है। सभी अभिकर्मकों और उपकरणों को उपयोग से पहले RNases को निष्क्रिय करने के लिए विशेष रूप से उपचारित किया जाना चाहिए।

इसके अतिरिक्त, आरएनए अवरोधकों का उपयोग आरएनएसे गतिविधि को बाधित करने और आरएनए के आरएनएसे क्षरण को रोकने के लिए किया जा सकता है। आरएनए अवरोधक कई प्रकार के होते हैं:

• डायथाइल पाइरोकार्बोनेट (डीईपीसी): यह एक मजबूत लेकिन पूर्ण आरएनेज अवरोधक नहीं है। यह आरएनेज के सक्रिय जीन समूह में हिस्टिडीन के इमिडाज़ोल रिंग के संयोजन के माध्यम से प्रोटीन को विकृत करता है, जिससे एंजाइम की गतिविधि बाधित होती है।
• गुआनिडीन आइसोथियोसाइनेट: वर्तमान में सबसे प्रभावी RNase अवरोधक माना जाता है, यह ऊतक को नष्ट करते समय RNase को निष्क्रिय भी कर सकता है, जो कोशिका संरचना को नष्ट कर सकता है और न्यूक्लियोप्रोटीन से न्यूक्लिक एसिड को अलग कर सकता है, और RNase पर एक निश्चित प्रभाव भी डालता है मजबूत विकृतीकरण प्रभाव।
• वैनाडिल राइबोन्यूक्लियोसाइड कॉम्प्लेक्स: वैनेडियम ऑक्साइड आयनों और न्यूक्लियोसाइडों द्वारा निर्मित एक कॉम्प्लेक्स, जो RNase के साथ मिलकर एक संक्रमणकालीन एनालॉग बना सकता है, जो RNase की गतिविधि को लगभग पूरी तरह से बाधित करता है।
• आरएनेज का प्रोटीन अवरोधक (आरएनएसिन): चूहे के यकृत या मानव ब्लास्टोडिस्क से निकाला गया एक अम्लीय ग्लाइकोप्रोटीन, आरएनएसिन आरएनेज का एक गैर-प्रतिस्पर्धी अवरोधक है, जो विभिन्न आरएनएज से बंध सकता है, जिससे यह निष्क्रिय हो जाता है।
• अन्य: एस.डी.एस., यूरिया, डायटोमेसियस अर्थ आदि का भी आर.एन.ए.एस. पर एक निश्चित निरोधात्मक प्रभाव होता है।

2. आरएनेज़ अवरोधक क्या हैं?

RNase अवरोधक पदार्थों का एक वर्ग है जो RNase गतिविधि को बाधित कर सकता है। आम RNase अवरोधकों में डायथाइल पाइरोकार्बोनेट (DEPC), गुआनिडीन आइसोथियोसाइनेट, राइबोन्यूक्लियोसाइड वैनाडिल कॉम्प्लेक्स (RVC) और RNase (RNasin) के प्रोटीन अवरोधक शामिल हैं। उनमें से, DEPC और गुआनिडीन आइसोथियोसाइनेट में कुछ विषाक्तता है, और RVC का PCR पॉलीमरेज़ पर निरोधात्मक प्रभाव है, जो बाद के प्रयोगों के लिए अनुकूल नहीं है। RNase विषाक्त नहीं है और RNase का एक गैर-प्रतिस्पर्धी अवरोधक है, जो उन्हें निष्क्रिय करने के लिए विभिन्न RNases से जुड़ सकता है।

3. आरएनेज़ इनहिबिटर क्या करता है?

आरएनएएस अवरोधकों का उपयोग आमतौर पर ऐसे संदूषकों को रोकने और नियंत्रित करने के लिए आरएनए के एंजाइमेटिक हेरफेर में एहतियाती उपाय के रूप में किया जाता है। आरएनएएसिन चूहे के जिगर या मानव ब्लास्टोडर्म से निकाला गया एक अम्लीय ग्लाइकोप्रोटीन है, जो विशेष रूप से गैर-सहसंयोजक तरीके से आरएनएएस से बंध सकता है, जिससे एक जटिल संरचना बनती है, जिससे आरएनएएस निष्क्रियता होती है, जिससे आरएनए की अखंडता की रक्षा होती है। वर्तमान में, आरएनएएस अवरोधक सीडीएनए संश्लेषण, आरटी-पीसीआर, इन विट्रो ट्रांसक्रिप्शन/ट्रांसलेशन प्रतिक्रियाओं या आरएनए शुद्धिकरण जैसे अनुप्रयोगों में आरएनए क्षरण को रोकने में मदद करता है।

4. म्यूरिन आरएनेज अवरोधक की विशेषताएं क्या हैं?

पुनः संयोजक म्यूरिन आरएनेज अवरोधकों में 2 ऑक्सीकरण-संवेदनशील सिस्टीन नहीं होते हैं जो मानव-मूल आरएनेज अवरोधकों में होते हैं। इसलिए, म्यूरिन आरएनेज अवरोधक में उच्च एंटी-ऑक्सीडेशन गतिविधि होती है और यह कम डीटीटी प्रयोगों के लिए अधिक स्थिर होता है। इसके अलावा, येसेन के म्यूरिन आरएनेज अवरोधक में निम्नलिखित विशेषताएं हैं:
1) सम्पूर्ण RNase अवरोधन: YEASEN का म्यूरिन RNase अवरोधक विशेष रूप से RNase A, RNase B, RNase C, इत्यादि को बाधित करता है।
2) बहुमुखी प्रतिक्रिया की स्थिति: आरएनज़ अवरोधक पीएच 5.0-9.0 और 25 ℃ -55 ℃ पर सक्रिय है, जो थर्मोस्टेबल रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस के लिए उपयुक्त है।
3) एकाधिक डाउनस्ट्रीम प्रयोग संभव: जब RNase अवरोधक का उपयोग Taq DNA पॉलीमरेज़, AMV या M-MuLV रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस, या फेज RNA पॉलीमरेज़ (SP6, T7, या T3) के साथ किया जाता है, तो पॉलीमरेज़ गतिविधि का कोई अवरोध नहीं देखा जाता है।
4) बड़े पैमाने पर उत्पादित सामान: 2 बिलियन यू की एकल विनिर्माण क्षमता उत्पाद की एकरूपता, आपूर्ति स्थिरता और समयबद्धता सुनिश्चित करके लागत प्रबंधन में सहायक है।
5) बैच-टू-बैच स्थिरता: ISO13485 गुणवत्ता प्रबंधन प्रणाली द्वारा परिपक्व प्रोटीन अभिव्यक्ति और शुद्धिकरण मंच, बैचों के बीच उत्पाद स्थिरता को आश्वस्त करने के लिए गुणवत्ता आवश्यकताओं द्वारा गुणवत्ता नियंत्रण परीक्षण।

5. संबंधित उत्पाद और प्रदर्शन

A. RNase अवरोधक RNase गतिविधि को अवरुद्ध करता है

1μg HEK सेल कुल RNA, 1μL RNase अवरोधक 5ng RNase को प्रभावी रूप से बाधित कर सकता है।

चित्र 1. म्यूरिन आरएनेज अवरोधक का निरोधात्मक प्रभाव।

बी. आरएनेज इनहिबिटर ने क्यूपीसीआर परीक्षण में विदेशी उत्पादों को पीछे छोड़ दिया

येसेन और आर* कंपनी के माउस-व्युत्पन्न आरएनेज अवरोधकों (एमआरआई) के निरोधात्मक प्रभाव को समान प्रयोगात्मक परिस्थितियों में क्यूपीसीआर तकनीक का उपयोग करके मापा गया, और येसेन म्यूरिन स्रोत के आरएनेज अवरोधक ने सिस्टम में आरएनेज ए को कुशलतापूर्वक बाधित किया। अवरोध का प्रभाव प्रतिस्पर्धियों की तुलना में बेहतर था।

चित्र 2. आर* एमआरआई आरएनेज अवरोध परीक्षण

नोट: चित्र में बाएं से दाएं वक्र इस प्रकार हैं: सकारात्मक नियंत्रण (केवल आरएनए, कोई आरएनेज और एमआरआई नहीं), 40 यू एमआरआई, 30 यू एमआरआई, 20 यू एमआरआई, 10 यू एमआरआई, और नकारात्मक नियंत्रण (आरएनए + आरएनेज, कोई एमआरआई नहीं)।

चित्र 3. येसेन एमआरआई आरएनेज अवरोध परीक्षण

नोट: चित्र में बाएं से दाएं वक्र इस प्रकार हैं: सकारात्मक नियंत्रण (केवल आरएनए, कोई आरएनेज और एमआरआई नहीं), 80 यू एमआरआई, 60 यू एमआरआई, 40 यू एमआरआई, 30 यू एमआरआई, 20 यू एमआरआई, 10 यू एमआरआई, नकारात्मक नियंत्रण (आरएनए+आरएनेज, कोई एमआरआई नहीं)।

चित्र 4. येसेन एमआरआई और आर* एमआरआई के आरटी-क्यूपीसीआर परिणामों का सीटी

6. संबंधित उत्पाद

येसेन द्वारा उपलब्ध कराए जा सकने वाले संबंधित उत्पाद तालिका 1 में दर्शाए गए हैं:

तालिका नंबर एक।उत्पादों की सूची

7. अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न

प्रश्न 1: क्या म्यूरिन आरएनेज अवरोधक में आरएनेज होगा?
उत्तर: प्रत्येक अभिकर्मक RNase गतिविधि का पता लगाएगा ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि म्यूरिन RNase अवरोधक RNase संदूषण नहीं लाएगा।
प्रश्न 2: क्या म्यूरिन आरएनेज अवरोधकों का डाउनस्ट्रीम पीसीआर प्रयोगों पर प्रभाव पड़ेगा?
उत्तर: इसका कोई प्रभाव नहीं होगा। गुणवत्ता परीक्षण के बाद म्यूरिन आरएनेज अवरोधक का प्रत्येक बैच जीनोमिक संदूषण से मुक्त होता है और इसका उपयोग आरटी-पीसीआर और आरटी-क्यूपीसीआर अनुसंधान में किया जा सकता है।
प्रश्न 3: क्या म्यूरिन आरएनेज अवरोधक निष्क्रिय हो जाएगा?
उत्तर: 65°C से अधिक तापमान पर अवरोधक निष्क्रिय हो जाएंगे, तथा तीव्र गति से हिलाने से भी निष्क्रियता हो जाएगी।
प्रश्न 4: प्रतिक्रिया प्रणाली तैयार करने के लिए म्यूरिन आरएनेज अवरोधक का उपयोग करते समय क्या सावधानियां बरतनी चाहिए?
उत्तर: सिस्टम तैयार करते समय, RNase संदूषण स्रोतों को उत्पन्न करने वाले अन्य घटकों को जोड़ने से पहले RNase अवरोधक को जोड़ा जा सकता है।
प्रश्न 5: क्या म्यूरिन आरएनेज अवरोधक में एंडोन्यूक्लिऐस और एक्सोन्यूक्लिऐस गतिविधि होती है?
उत्तर: इसमें एंडोन्यूक्लिऐस और एक्सोन्यूक्लिऐस गतिविधि नहीं होती, जो उत्पाद की उपज को बेहतर बनाने में मदद करती है।

पढ़ने के संबंध में:

म्यूरिन आरएनेज अवरोधक - आरएनेज संदूषण को सफलतापूर्वक समाप्त करते हैं और आरएनए को संरक्षित करते हैं

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