रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस, जिसे आरएनए-निर्भर डीएनए पॉलीमरेज़ के रूप में भी जाना जाता है, एक डीएनए पॉलीमरेज़ एंजाइम है जो एकल-फंसे आरएनए को डीएनए में ट्रांसक्राइब करता है। रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का प्रदर्शन सीधे आणविक निदान अभिकर्मकों के अंतिम प्रदर्शन को प्रभावित करेगा। आणविक निदान अभिकर्मक निर्माताओं के दर्द बिंदुओं के जवाब में, येसेन ने रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस पर दिशात्मक परिवर्तन किया है। रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का प्रदर्शन उत्कृष्ट है और ग्राहकों द्वारा अच्छी तरह से प्राप्त किया गया है!

1. रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का कार्य क्या है?
2. रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का चयन कैसे करें?
3. येसेन का रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस क्यों चुनें?
4. संबंधित उत्पाद और प्रदर्शन
5. संबंधित उत्पाद

1. रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का कार्य क्या है?

रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस एक आरएनए-निर्भर डीएनए पॉलीमरेज़ है। यह टेम्पलेट आरएनए को ट्रांसक्राइब कर सकता है और पूरक डीएनए (सीडीएनए) बनाता है। डीएनए पॉलीमरेज़ का उपयोग करके सिंगल-स्ट्रैंडेड सीडीएनए को डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए में परिवर्तित किया जाता है। इसलिए रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का उपयोग आमतौर पर आरटी-पीसीआर नामक पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन तकनीक के साथ संयुक्त होने पर mRNA संश्लेषण के स्तर को मापने के लिए किया जाता है। मात्रात्मक आरटी-पीसीआर परख आमतौर पर रोग निदान में उपयोग की जाती है। इसलिए, रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस वैज्ञानिक अनुसंधान और व्यावहारिक अनुप्रयोग में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है।

2. रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का चयन कैसे करें?

आम रिवर्स ट्रांसक्रिप्टेस एम-एमएलवी और एएमवी हैं, जिनमें से एम-एमएलवी एएमवी से बेहतर है। लेकिन पारंपरिक आरटी एंजाइमों में दो सक्रिय साइटें होती हैं, एक पॉलीमरेज़ गतिविधियों को निष्पादित करती है और दूसरी राइबोन्यूक्लिअस एच गतिविधि को निष्पादित करती है। आरएनएएस एच एक एंडोन्यूक्लिअस है जो डीएनए-आरएनए हाइब्रिड, परिवार के आरएनए भाग को नष्ट करने में सक्षम है। इसलिए, आरएनएएस एच गतिविधि की कमी वाले रिवर्स ट्रांसक्रिप्टेस सीडीएनए संश्लेषण के लिए फायदेमंद है। इसके अलावा, आरटी के थर्मोस्टेबल संस्करण का उपयोग गैर-विशिष्ट न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन को कम करने और जटिल माध्यमिक संरचनाओं के प्रभाव को कम करने के लिए फायदेमंद है।

3. येसेन का रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस क्यों चुनें?

येसेन ने रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस पर दिशात्मक संशोधन किया है, जो RNase H गतिविधि को हटाता है, जिससे cDNA संश्लेषण की क्षमता में सुधार होता है। रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन की थर्मोस्टेबिलिटी को बेहतर बनाने के लिए प्रोटीन इवोल्यूशन तकनीक का उपयोग किया गया है।

येसेन के रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस में न केवल मजबूत संश्लेषण क्षमता है, बल्कि एक मजबूत सहनशीलता क्षमता भी है। इसके अलावा, येसेन की गुणवत्ता पर सख्त आवश्यकताएं हैं। यह रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस के लिए सबसे अच्छा विकल्प है।

4. संबंधित उत्पाद और प्रदर्शन

4.1 65°C के उच्च तापमान के प्रति प्रतिरोधी

293T सेल टोटल RNA के 500 ng को टेम्पलेट के रूप में इस्तेमाल करते हुए, 42°C-65°C पर Hifair™ Ⅲ रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का इस्तेमाल करके रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किया गया। TFRC जीन (4.4kb) को बढ़ाने के लिए टेम्पलेट के रूप में 1 μL cDNA लें।

चित्र 1. 42°C-65℃ पर रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन करें

4.2 जटिल टेम्पलेट्स के साथ संगत

55°C का प्रतिक्रिया तापमान पारंपरिक टेम्पलेट्स और द्वितीयक संरचना टेम्पलेट्स के रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन को संतुष्ट कर सकता है, और उच्च GC टेम्पलेट्स के प्रतिक्रिया तापमान को उचित रूप से 65°C तक बढ़ाया जा सकता है।

चित्र 2.जीसी-समृद्ध टेम्पलेट्स और द्वितीयक संरचना टेम्पलेट्स के लिए उपयुक्त

4.3 उत्कृष्ट विस्तार प्रदर्शन

293T कोशिकाओं के 500 ng कुल RNA को टेम्पलेट के रूप में और ओलिगो (dT) को प्राइमर के रूप में उपयोग करते हुए, हाईफ़ेयर™ Ⅲ रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का उपयोग करके cDNA को संश्लेषित किया गया। DY1C1N1 जीन (19.9kb) के 5' के 500bp को बढ़ाने के लिए टेम्पलेट के रूप में 1 μL cDNA लें। परिणामों से पता चला कि हाईफ़ेयर™ Ⅲ रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस 19.8kb तक cDNA को संश्लेषित कर सकता है।

चित्र 3. 19.8kb तक cDNA संश्लेषित किया जा सकता है

4.4 तीव्र संश्लेषण

293T कोशिकाओं के RNA को टेम्पलेट के रूप में उपयोग करते हुए, मैनुअल में मानक प्रक्रिया के अनुसार रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किया गया, और रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन समय क्रमशः 5, 10, 15, 30, 45 और 60 मिनट के अनुसार सेट किया गया। Hifair™ III रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस 5 मिनट के भीतर 6kb cDNA को संश्लेषित कर सकता है, और इसकी विशिष्टता और उपज V ब्रांड की तुलना में बेहतर है।

चित्र 4. 6kb cDNA को 5 मिनट के भीतर संश्लेषित किया जा सकता है

4.5 विस्तृत रेखीय रेंज

293T कोशिकाओं के 5pg-5μg कुल RNA को टेम्पलेट के रूप में इस्तेमाल करते हुए, हाईफ़ेयर™ III रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस का उपयोग करके cDNA को संश्लेषित किया गया। 1 μL cDNA को टेम्पलेट के रूप में इस्तेमाल किया गया और चारों जीनों पर qPCR किया गया, और परिणामों से पता चला कि प्रवर्धन क्षमताएँ सभी 98% और 100.10% के बीच थीं। यह दर्शाता है कि cDNA को टेम्पलेट्स की एक विस्तृत रैखिक श्रेणी में कुशलतापूर्वक संश्लेषित किया जा सकता है।

चित्र 5. सीडीएनए को विस्तृत टेम्पलेट रेंज में कुशलतापूर्वक संश्लेषित किया जा सकता है

4.6 सख्त गुणवत्ता नियंत्रण

येसेन के रिवर्स एंजाइम के स्थिर प्रदर्शन को सुनिश्चित करने के लिए, येसेन उत्पादन प्रक्रिया में आवश्यकताओं को सख्ती से लागू करता है ताकि उत्पादन प्रक्रिया को स्थिर किया जा सके और बैच स्थिरता सुनिश्चित की जा सके। साथ ही, एक्सोन्यूक्लिएज, निकेज, आरएनेज आदि अवशेषों का पता लगाने के लिए गुणवत्ता निरीक्षण को मजबूत किया जाता है। यह सुनिश्चित करें कि कोई अवशेष न हो, ताकि आगे के प्रयोगों पर कोई प्रभाव न पड़े।

चित्र 6. अवशेष का पता लगाना

5. संबंधित उत्पाद

येसेन द्वारा उपलब्ध कराए गए उत्पाद इस प्रकार हैं।

तालिका नंबर एक। संबंधित उत्पाद

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रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस चयन के दिशानिर्देश

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