एनजीएस लाइब्रेरी क्वांटिफिकेशन का सार न्यूक्लिक एसिड (डीएनए या आरएनए) क्वांटिटेशन है। उच्च गुणवत्ता वाले अनुक्रमण डेटा प्राप्त करने के लिए एनजीएस लाइब्रेरी क्वांटिफिकेशन का सटीक विश्लेषण महत्वपूर्ण है। यदि एनजीएस लाइब्रेरी की मात्रात्मक सांद्रता अधिक है, तो अपर्याप्त क्लस्टरिंग के कारण अनुक्रमण डेटा की उपज कम हो सकती है। हालांकि, कम मात्रात्मक सांद्रता कम गुणवत्ता वाले डेटा का उत्पादन करने के लिए क्लस्टर के बीच सिग्नल हस्तक्षेप का कारण बन सकती है, और यहां तक ​​​​कि अनुक्रमण विफलता भी हो सकती है। इसके अलावा, सीक्वेंसर के अनुक्रमण प्रवाह में वृद्धि के साथ, अनुक्रमण के लिए अक्सर कई एनजीएस लाइब्रेरी को मिलाया जाता है। अनुक्रमण डेटा के आकार की आवश्यकताओं के अनुसार, संबंधित दाढ़ मात्रा वाले एनजीएस लाइब्रेरी को प्रत्येक नमूना डेटा के आकार के आउटपुट को स्थिर करने के लिए मात्रात्मक परिणामों के आधार पर मिलाया जाता है। इसलिए, लाइब्रेरी का सटीक एनजीएस लाइब्रेरी क्वांटिफिकेशन महत्वपूर्ण है।

वर्तमान में, NGS लाइब्रेरी क्वांटिफिकेशन के दो मुख्य तरीके हैं, पराबैंगनी अवशोषण विधि और फ्लोरोसेंट डाई विधि। नैनोड्रॉप एक डीएनए क्वांटिफिकेशन उपकरण है जिसे पराबैंगनी अवशोषण के सिद्धांत के आधार पर डिज़ाइन किया गया है; क्यूबिट एक डीएनए क्वांटिफिकेशन उपकरण है जिसे फ्लोरोसेंट डाई के सिद्धांत के अनुसार विकसित किया गया है। इन दोनों विधियों की मात्रात्मक सटीकता और लागत अलग-अलग हैं। यहाँ मुख्य रूप से क्यूबिट विधि की सिफारिश की जाती है। तो हम आपको क्यूबिट की सलाह क्यों देते हैं? येसेन द्वारा आपूर्ति किए जाने वाले क्यूबिट उत्पादों की क्या विशेषताएँ हैं? कृपया पढ़ना जारी रखें...

1. हम आपको क्यूबिट की अनुशंसा क्यों करते हैं?

2. येसेन द्वारा आपूर्ति किये गए क्यूबिट उत्पादों की विशेषताएँ क्या हैं?

• क्यूबिट कैसे काम करता है?
• येसेन द्वारा आपूर्ति किया गया लोकप्रिय उत्पाद
• उत्पाद की विशेषताएँ

3. विभिन्न नमूनों के लिए क्यूबिट का चयन कैसे करें?

1. हम आपको क्यूबिट की अनुशंसा क्यों करते हैं?

इसमें कोई संदेह नहीं है कि क्यूबिट नैनोड्रॉप से ​​बेहतर है। तो क्यूबिट नैनोड्रॉप से ​​बेहतर क्यों है? क्यूबिट और नैनोड्रॉप में क्या अंतर है? सबसे पहले, जैसा कि पहले उल्लेख किया गया है, वे डीएनए परिमाणीकरण के सिद्धांत में भिन्न हैं, नैनोड्रॉप को पराबैंगनी अवशोषण के आधार पर डिज़ाइन किया गया है। पराबैंगनी अवशोषण विधि का सिद्धांत यह है कि न्यूक्लिक एसिड घटकों में प्यूरीन और पाइरीमिडीन बेस होते हैं, और इन बेस में संयुग्मित दोहरे बंधन होते हैं। यूवी क्षेत्र में 250-280nm पर मजबूत प्रकाश अवशोषण होता है, और अधिकतम अवशोषण मूल्य लगभग 260nm होता है। इसलिए, न्यूक्लिक एसिड के यूवी अवशोषण का उपयोग सांद्रता परिमाणीकरण के लिए किया जा सकता है। नैनोड्रॉप संचालित करने में सरल और त्वरित है, लेकिन यह डीएनए, आरएनए, खराब न्यूक्लिक एसिड, मुक्त न्यूक्लियोटाइड और अन्य अशुद्धियों के बीच अंतर नहीं कर सकता है। यह सटीक लाइब्रेरी मात्रात्मक डेटा प्राप्त करने के लिए उपयुक्त नहीं है। लेकिन, सटीक एनजीएस लाइब्रेरी परिमाणीकरण के लिए क्यूबिट परिमाणीकरण सबसे अच्छा विकल्प है, खासकर डीएनए परिमाणीकरण के लिए। तो क्यूबिट डीएनए क्वांटिफिकेशन की विशेषताएं क्या हैं? कृपया निम्न तालिका देखें:

2. येसेन द्वारा आपूर्ति किये गए क्यूबिट उत्पादों की विशेषताएँ क्या हैं?

येसेन द्वारा आपूर्ति किए गए क्यूबिट उत्पादों की विशेषताओं को पेश करने से पहले, आइए समझते हैं कि यह कैसे काम करता है।

2.1 क्यूबिट कैसे काम करता है?

क्यूबिट का सिद्धांत फ्लोरोसेंट रंगों का उपयोग करके डीएनए अणुओं से जुड़कर प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करना है, और फिर न्यूक्लिक एसिड की सांद्रता प्राप्त करने के लिए प्रतिदीप्ति तीव्रता को मापना है। फ्लोरोसेंट रंग केवल डीएनए डबल-स्ट्रैंड से बंधने के बाद ही प्रतिदीप्ति करते हैं, और परिणामी प्रतिदीप्ति डीएनए सांद्रता के समानुपाती होती है।

2.2 येसेन द्वारा आपूर्ति किया गया लोकप्रिय उत्पाद

क्यूबिट® के लिए 1×dsDNA HS परख किट (कैट#: 12642ES), के आधार पर विकसित क्यूबिट® किट (कैट#: 12640ES) के लिए dsDNA HS परख किट, मूल किट में केंद्रित रंगों को एक कार्यशील घोल में पहले से पतला करने के लिए उपयोग के लिए तैयार क्यूबिट प्रीमिक्स समाधान है। संचालन करते समय, आपको केवल क्यूबिट® फ्लोरोमीटर द्वारा नमूना सांद्रता निर्धारित करने के लिए परीक्षण किए जाने वाले नमूने के साथ कार्यशील तरल को मिलाना होगा, जो उपयोग करने के लिए अधिक सुविधाजनक है।

2.3 उत्पाद विशेषताएँ

सरल और संचालित करने में आसान: उपयोग के लिए तैयार पूर्वमिश्रित तरल, कार्यशील तरल तैयार करने की कोई आवश्यकता नहीं, सरल संचालन, मात्रात्मक रूप से अधिक समय की बचत;

चित्र 1. क्यूबिट के लिए dsDNA HS परख किट की प्रक्रिया

अल्ट्रा-उच्च संवेदनशीलता: 64x ग्रेडिएंट कमजोर पड़ने सटीक मात्रा, 0.2-100 एनजी डीएसडीएनए में अच्छा रैखिक संबंध है;

सुपर विशिष्टता: विशिष्ट पहचान डीएसडीएनए, कुछ पारंपरिक प्रदूषकों के प्रति उत्कृष्ट सहनशीलता है;

डाई की तेज बंधन गति: संतृप्ति 2 मिनट के भीतर पहुंचा जा सकता है, इसलिए सटीक मात्रात्मक परिणामों के तेजी से पढ़ने के लिए इंतजार करने की कोई आवश्यकता नहीं है;

उच्च स्थिरता: प्रतिदीप्ति संकेत 3 घंटे तक चला, और कमरे के तापमान पर 20 दिनों के बाद मात्रात्मक सटीकता प्रभावित नहीं हुई।

चित्र 1. उत्पाद स्थिरता परीक्षण। परिणाम बताते हैं कि यह बना हुआ है 2 सप्ताह तक कमरे के तापमान पर संग्रहीत करने के बाद स्थिर (मापा मूल्य और सैद्धांतिक मूल्य के बीच विचलन <10% था)

नोट: dsDNA की दो सांद्रताओं का चयन किया गया, और 4℃ पर संग्रहीत थर्मो#Q33230, 4℃ पर संग्रहीत येसेन#12642, और कमरे के तापमान (लगभग 25℃) पर संग्रहीत येसेन#12642 का उपयोग विभिन्न समयों पर सांद्रता मान निर्धारित करने के लिए किया गया, और प्रत्येक माप और पहले माप (0d के रूप में चिह्नित) के बीच विचलन दर की गणना की गई।

चित्र 2. उत्पाद स्थिरता परीक्षण। सुपर स्थिरता, वैधता अवधि के भीतर परीक्षण परिणामों की उच्च प्रासंगिकता

3. विभिन्न नमूनों के लिए क्यूबिट का चयन कैसे करें?

क्यूबिट, तेज़ क्वांटिफिकेशन! लाइब्रेरी क्वांटिफिकेशन के लिए क्यूबिट का उपयोग करने के कई फायदे हैं। इसकी पहचान प्रक्रिया तेज़ और प्रभावी है।अनुक्रमण परिणाम एक ही नमूने के लिए कुछ सेकंड के भीतर प्राप्त किया जा सकता है और सांद्रता को सीधे आउटपुट किया जा सकता है, जो बहुत सहज है। साथ ही, यह बैच सैंपल क्वांटिफिकेशन के लिए अधिकांश एंजाइम लेबल इंस्ट्रूमेंट के साथ भी संगत हो सकता है, जो पारंपरिक लाइब्रेरी क्वांटिफिकेशन और डीएसडीएनए क्वांटिफिकेशन के लिए पहली पसंद है।