आणविक जीव विज्ञान में सबसे मौलिक प्रयोगों में से एक के रूप में न्यूक्लिक एसिड क्वांटिफिकेशन, सीधे डाउनस्ट्रीम प्रयोगों के परिणाम को प्रभावित करता है। न्यूक्लिक एसिड क्वांटिफिकेशन की सटीकता महत्वपूर्ण है। वर्तमान में, एनजीएस लाइब्रेरी क्वांटिफिकेशन के दो मुख्य तरीके हैं, पराबैंगनी अवशोषण विधि और फ्लोरोसेंट डाई विधि।

पराबैंगनी अवशोषण विधि डीएनए और आरएनए के लिए 260 एनएम पर अवशोषण को मापने के लिए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करती है। यह OD260/OD280 अनुपात की गणना करके न्यूक्लिक एसिड की शुद्धता का भी अनुमान लगाता है। हालाँकि, पता लगाए गए मान अन्य संदूषकों जैसे मुक्त न्यूक्लियोटाइड, लवण और कार्बनिक यौगिकों से हस्तक्षेप के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं।

क्यूबिट फ्लोरोमेट्रिक क्वांटिटेशन फ्लोरोसेंट रंगों का उपयोग करता है जो विशेष रूप से डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए, सिंगल-स्ट्रैंडेड डीएनए, आरएनए या प्रोटीन से जुड़ते हैं। एक विशिष्ट तरंग दैर्ध्य प्रकाश स्रोत द्वारा उत्तेजित होने पर, रंग प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करते हैं, जो नमूने में मौजूद अन्य अशुद्धता अणुओं से प्रभावित नहीं होता है। प्रतिदीप्ति तीव्रता नमूने में लक्ष्य अणुओं की सांद्रता के समानुपाती होती है।

तालिका 1. मुख्यधारा के न्यूक्लिक एसिड परिमाणीकरण विधियों की तुलना

लक्ष्य	यूवी एब्स (नैनोड्रॉप)	क्यूबिट डीएनए एचएस	क्यूबिट डीएनए बीआर	क्यूबिट आरएनए	क्यूबिट एसएसडीएनए
न्यूक्लिक एसिड का प्रकार	डीएनए、आरएनए	डीएसडीएनए	डीएसडीएनए	शाही सेना	एसएसडीएनए、ओलिगो
नमूना एकाग्रता (ng/μL)	2 एनजी/μL-15 μg/μL	10 पीजी/µएल-100 एनजी/µएल	0.1 एनजी/µL-1000 एनजी/µL	250 पीजी/µl-1000 एनजी/µl	50 पीजी/μL-200 एनजी/μL
फ़ायदा	परिमाणीकरण की उच्चतर सीमा	अच्छी विशिष्टता	परिमाणीकरण की व्यापक रेंज	आरएनए के लिए अत्यधिक चयनात्मक	अच्छी तरह सहन किया गया
सीमाएँ	ख़राब विशिष्टता	उपयोग के दौरान प्रकाश से बचाएं	उपयोग के दौरान प्रकाश से बचाएं	उपयोग के दौरान प्रकाश से बचाएं	ख़राब विशिष्टता और dsDNA को भी बांधता है

यूवी अवशोषण और क्यूबिट फ्लोरोमेट्रिक क्वांटिटेशन के अपने-अपने फायदे हैं और ये एक-दूसरे के पूरक हो सकते हैं। नियमित न्यूक्लिक एसिड नमूनों की सांद्रता, शुद्धता और संदूषकों की उपस्थिति निर्धारित करने के लिए प्रारंभिक मात्रा निर्धारण के लिए, अवशोषण मात्रा निर्धारण विधि को चुना जा सकता है। क्यूबिट क्वांटिफिकेशन कम सांद्रता वाले कीमती नमूनों या डाउनस्ट्रीम प्रयोगों के लिए आवश्यक सटीक क्वांटिफिकेशन के लिए अधिक उपयुक्त है, जैसे कि अगली पीढ़ी के अनुक्रमण और वास्तविक समय मात्रात्मक पीसीआर।

येसेन ने कई क्यूबिट क्वांटिफिकेशन उत्पाद लॉन्च किए हैं: क्यूबिट के लिए dsDNA HS परख किट^® (कैट#12640), उपयोग के लिए तैयार: क्यूबिट के लिए 1× dsDNA HS परख किट^® (कैट#12642), क्यूबिट के लिए ssDNA परख किट^® (कैट#12645), और डीएसडीएनए बीआर परख किट (कैट#12643), जिनकी लॉन्चिंग के बाद से ही व्यापक रूप से प्रशंसा की गई है।

समाधान 1 dsDNA HS उच्च संवेदनशीलता परिमाणीकरण

उपयोग के लिए तैयार dsDNA क्वांटिफिकेशन प्रीमिक्स - 1× क्यूबिट के लिए dsDNA HS परख किट^®

^{आसान संचालन: उपयोग के लिए तैयार प्रीमिक्स, पूर्व मिश्रण की कोई आवश्यकता नहीं;}

^{उच्च संवेदनशीलता: 50 pg/μL जितनी कम सांद्रता का पता लगाया जा सकता है;}

^{अच्छी स्थिरता: प्रतिदीप्ति संकेत 3 घंटे तक रहता है, और 20 दिनों के लिए कमरे के तापमान पर भंडारण मात्रा निर्धारण की सटीकता को प्रभावित नहीं करता है;}

^{A.उत्कृष्ट स्थिरता: 2 सप्ताह तक कमरे के तापमान पर भंडारण करने पर भी स्थिरता बनी रहती है (मापा गया मान सैद्धांतिक मान से 10% से कम विचलित होता है)।}

तालिका 2. प्रतिस्पर्धियों की तुलना में 4°C और कमरे के तापमान पर विभिन्न नमूनों का स्थिरता परीक्षण

मात्रात्मक अभिकर्मक	दृढ़ निश्चय वाला एकाग्रता λDNA (एनजी/μL)
	0 दि		-1 डी		3डी	7 दिन			10दिन		14दिन
टी* 4℃	0.51		0.496		0.524	0.534			0.495		0.499
येसेन 4℃	0.51		0.508		0.513	0.475			0.48		0.495
येसेन कमरे का तापमान भंडारण	0.51		0.517		0.506	0.486			0.506		0.523
मात्रात्मक अभिकर्मक	दृढ़ निश्चय वाला एकाग्रता बछड़े का gDNA (ng/μL)
	0 दि	-1 डी		3डी			7 दिन	10दिन		14दिन
टी* 4℃	55.3	53.5		55.40			57.9	55.8		58
येसेन 4℃	59.4	55.4		57.8			56.1	56.3		59.8
येसेन कमरे का तापमान भंडारण	59	55.7		61.3			58	58.7		56.1

बी. उच्च संवेदनशीलता, अच्छा बैच-टू-बैच स्थिरता

टेबल तीन।विभिन्न बैचों का स्थिरता परीक्षण

बीअत्च	नमूना	एल*			येसेन			गलती
		सांद्रता1（एनजी/μL）	सांद्रता2（एनजी/μL）	औसत (एनजी/μL)	सांद्रता1（एनजी/μL）	सांद्रता2（एनजी/μL）	औसत (एनजी/μL)
डी9801060	डीएनए	0.3160	0.3250	0.3205	0.320	0.320	0.320	0.16%
डी8801050		0.3310	0.3320	0.3315	0.319	0.306	0.3125	5.73%
डी7813110		0.345	0.358	0.352	0.334	0.329	0.332	-6.03%

समाधान 2 dsDNA BR ब्रॉड रेंज क्वांटिफिकेशन

विस्तृत रेंज dsDNA परिमाणीकरण—dsDNA BR परख किट

उच्च संवेदनशीलता: 50 pg/μL जितनी कम सांद्रता का पता लगाया जा सकता है;

उत्कृष्ट रैखिकता: 2-1000 एनजी की सीमा के भीतर अच्छी रैखिकता;

संदूषकों के प्रति प्रबल सहनशीलता: सामान्य संदूषकों को सहन कर सकता है।

तालिका 4. प्रतिस्पर्धियों की तुलना में संदूषकों के प्रति स्थिरता और सहनशीलता

येसेन बीआर						टी* बीआर
मानक	आरएफयू1	आरएफयू2	औसत	गलती		मानक	आरएफयू1	आरएफयू2	औसत	गलती
एस 1	159.63	160.71	160.17	1%		एस 1	216.17	211.56	213.865	-2%
एस 2	24497.0	25078.64	24787.82	2%		एस 2	20532.46	20452.26	20492.36	0%
क्षेत्रमिति						क्षेत्रमिति
दूषित पदार्थों	10-μL नमूने में सांद्रता	सांद्रता1	एकाग्रता2	औसत	परीक्षण/नियंत्रण हेतु	दूषित पदार्थों	10-μL नमूने में सांद्रता	सांद्रता1	एकाग्रता2	औसत	परीक्षण/नियंत्रण हेतु
नियंत्रण (एच2ओ)	/	49	48.6	48.8	0.0%	नियंत्रण (एच2ओ)	/	49.8	48	48.9	0.0%
बीएसए	1मिग्रा/एमएल	51.8	52	51.9	6.4%	बीएसए	1मिग्रा/एमएल	54	51.2	52.6	7.6%
इथेनॉल	20%	44.6	44	44.3	-9.2%	इथेनॉल	20%	44.8	43.4	44.1	-9.8%
क्लोरोफार्म	4.00%	49.0	49.8	49.4	1.2%	क्लोरोफार्म	4.00%	50.0	47	48.5	-0.8%
एसडीएस	0.2%	46.6	45.8	46.2	-5.3%	एसडीएस	0.2%	53.2	51.6	52.4	7.2%
ट्रिशन-X100	0.20%	41.6	40.6	41.1	-15.8%	ट्रिशन-X100	0.20%	53	51	52.0	6.3%
डीएनटीपी	2मिमी	44.2	45	44.6	-8.6%	डीएनटीपी	2मिमी	47.8	46.4	47.1	-3.7%

समाधान 3 ssDNA परिमाणीकरण

SsDNA परिमाणीकरण के लिए आदर्श विकल्प - क्यूबिट के लिए उच्च लागत-प्रदर्शन ssDNA परख किट^®

^{उच्च संवेदनशीलता: 50 pg/μL जितनी कम सांद्रता का पता लगाया जा सकता है;
उत्कृष्ट रैखिकता: 0-200 एनजी की सीमा के भीतर अच्छी रैखिकता;
स्थिर संकेत: उन्नत अनुकूलित बफर के साथ संयुक्त उत्कृष्ट डाई, कमरे के तापमान पर स्थिर प्रतिदीप्ति तीव्रता बनाए रख सकती है, और यह सामान्य प्रदूषण वातावरण जैसे कि लवण, मुक्त न्यूक्लियोटाइड, सॉल्वैंट्स, डिटर्जेंट या प्रोटीन में भी अत्यधिक लागू होती है, जिससे सटीक मात्रा का पता चलता है;
अच्छी स्थिरता: 4°C या 25°C पर 6 महीने के उपचार के बाद कोई महत्वपूर्ण प्रदर्शन परिवर्तन नहीं;
व्यापक अनुप्रयोग रेंज: सरल संचालन प्रक्रिया, ऑलिगोन्युक्लियोटाइड्स, प्राइमर्स, विकृत डीएनए, एकल-रज्जुक वृत्ताकार डीएनए आदि का तेजी से परिमाणीकरण करने में सक्षम।}

A.अच्छी पुनरावृत्ति: विभिन्न क्यूबिट उपकरणों में परिमाणीकरण, विभिन्न प्रकार के नमूनों का उपयोग करना येसेन Cat#12645 के कई बैचों का परीक्षण किया गया। 0-200 एनजी की सीमा के भीतर, विभिन्न क्यूबिट उपकरणों से माप में अच्छी पुनरावृत्ति।