HEK293 कोशिकाओं में व्यक्त मानव Wnt3a ने उच्च गतिविधि को दर्शाया है जो ऑर्गेनोइड्स की खेती को बढ़ावा देता है

ऑर्गेनोइड्स इन विट्रो-निर्मित तीन-आयामी मॉडल हैं जो प्राकृतिक ऊतकों या अंगों से मिलते-जुलते हैं, और वे रोग मॉडलिंग, अंग कायाकल्प और व्यक्तिगत चिकित्सा देखभाल के क्षेत्र में महत्वपूर्ण महत्व रखते हैं। इन ऑर्गेनोइड्स की खेती के लिए साइटोकाइन्स की एक विविध सरणी के सावधानीपूर्वक प्रबंधन की आवश्यकता होती है, जिसमें Wnt3a एक अक्सर इस्तेमाल किए जाने वाले कारक के रूप में सामने आता है जो ऊतकों की एक विस्तृत श्रृंखला से प्राप्त ऑर्गेनोइड्स के पोषण में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है।

Wnt-3a क्या है?

Wnt-3a, Wnt परिवार से संबंधित है, जो स्रावित प्रोटीन का एक समूह है जिसमें 19 मानव वेरिएंट शामिल हैं, जिनमें Wnt1, Wnt2, Wnt2b (Wnt13), Wnt3, Wnt3a, Wnt4, Wnt5a, Wnt5b, Wnt6, Wnt7a, Wnt7b, Wnt8a, Wnt8b, Wnt9a (जिसे Wnt14 के रूप में भी जाना जाता है), Wnt9b (Wnt14b), Wnt10a, Wnt10b, Wnt11 और Wnt16 शामिल हैं। इस परिवार की विशेषता इसके संरक्षण और सिस्टीन-समृद्ध संरचना है। Wnt प्रोटीन सेल झिल्ली रिसेप्टर्स या पड़ोसी सेल झिल्ली रिसेप्टर्स से बंध कर Wnt सिग्नलिंग मार्ग को सुगम बनाते हैं। इस मार्ग को β-catenin द्वारा मध्यस्थता वाले विहित मार्ग में वर्गीकृत किया जा सकता है, जिसमें Wnt1, Wnt2, Wnt2b, Wnt3, Wnt3a, Wnt7a, Wnt8, Wnt8b और Wnt10a शामिल हैं, और गैर-विहित मार्ग, β-catenin से स्वतंत्र है, जिसमें Wnt4, Wnt5a, Wnt6 और Wnt11 शामिल हैं। Wnt3a, Wnt परिवार के सर्वोत्कृष्ट सदस्य के रूप में, सर्वत्र वितरित है और विभिन्न कोशिकीय कार्यों, जैसे कि स्व-नवीनीकरण, प्रसार, विभेदन और गतिशीलता को नियंत्रित करने में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है।

Wnt-3a सिग्नलिंग पाथवे ट्रांसडक्शन मैकेनिज्म

Wnt सिग्नलिंग मार्ग प्रोटीन इंटरैक्शन का एक बहुआयामी नेटवर्क है जो मुख्य रूप से भ्रूण के विकास और कैंसर से जुड़ा हुआ है। हालाँकि, यह वयस्क जीवों में सामान्य शारीरिक प्रक्रियाओं में भी भूमिका निभाता है। Wnt3a अपने रिसेप्टर, फ्रिज़ल्ड (Fz) प्रोटीन के साथ-साथ सह-रिसेप्टर लिपोप्रोटीन रिसेप्टर-संबंधित प्रोटीन (LRP5/6) से जुड़ता है, जिसके बाद स्कैफोल्डिंग प्रोटीन डिशेवेल्ड (Dvl) को सक्रिय करता है। यह सक्रियण "विनाश परिसर" के विघटन की ओर ले जाता है, जिसमें कैसिइन किनेज 1 (CK1), ग्लाइकोजन सिंथेस किनेज-3β (GSK-3β), और स्कैफोल्डिंग प्रोटीन एडेनोमेटस पॉलीपोसिस कोली (APC), एक्सिन1 और एक्सिन2 शामिल हैं। इस परिसर को भंग करने से साइटोप्लाज्म में मुक्त β-कैटेनिन प्रोटीन स्थिर हो जाता है। कोशिका द्रव्य में संचित β-कैटेनिन फिर नाभिक में स्थानांतरित हो जाता है, जहाँ यह TCF/LEF परिवार के प्रतिलेखन कारकों से जुड़ता है, अंततः c-myc और साइक्लिन D1 जैसे डाउनस्ट्रीम लक्ष्य जीन को सक्रिय करता है। यह कैस्केड बाद की सेलुलर प्रतिक्रियाओं को प्रेरित करता है। संक्षेप में, Wnt सिग्नलिंग मार्ग को इस प्रकार सरल बनाया जा सकता है: Wnt3a→FZD→DVL→जटिल विघटन→β-कैटेनिन नाभिक में प्रवेश करता है→TCF/LEF→डाउनस्ट्रीम जीन प्रतिलेखन। Wnt3a के बिना, β-कैटेनिन को सामान्य रूप से "विनाश परिसर" द्वारा कोशिका द्रव्य में विघटित किया जाता है, जो इसे प्रोटिओसोम में यूबिक्विटिनेशन और उसके बाद के क्षरण के लिए लक्षित करता है। परिणामस्वरूप, यह डाउनस्ट्रीम जीन के प्रतिलेखन को आरंभ करने के लिए नाभिक में प्रवेश नहीं कर सकता है। Wnt/β-catenin संकेतन मार्ग पूरे विकास के दौरान अत्यधिक संरक्षित रहता है और भ्रूण विकास, कोशिका वृद्धि, विभेदन, ध्रुवीयता निर्माण, तंत्रिका विकास और कार्सिनोजेनेसिस में एक मौलिक भूमिका निभाता है।

Wnt3a और ऑर्गेनोइड्स

Wnt3a ऑर्गेनॉइड उत्पादन के लिए सबसे अधिक बार उपयोग किए जाने वाले कल्चर कारकों में से एक के रूप में एक केंद्रीय स्थान रखता है। इसकी उच्च गतिविधि, बैचों के बीच स्थिरता, संदूषण की कमी और सीरम-मुक्त तैयारी ऑर्गेनॉइड प्रयोगों की सफलता में योगदान देने वाले प्रमुख कारक हैं।Wnt3a का आंत, पेट, अग्न्याशय, यकृत, थायरॉयड, ग्रासनली और तंत्रिका तंत्र सहित विभिन्न ऊतकों के ऑर्गेनोइड कल्चर में व्यापक उपयोग पाया गया है। ऑर्गेनोइड निर्माण और ट्यूमर अनुसंधान में Wnt3a के नैदानिक ​​अनुप्रयोग पर अपने अध्ययन में वैज्ञानिक शोधकर्ताओं और दवा कंपनियों की सहायता करने के प्रयास में, YEASEN ने ऑर्गेनोइड कल्चर को सुविधाजनक बनाने के लिए डिज़ाइन किया गया एक अत्यधिक सक्रिय Wnt3a प्रोटीन उत्पाद (कैटलॉग: 92276ES) पेश किया है।

चित्र तीन। HEK293T मानव भ्रूण गुर्दे की कोशिकाओं में टॉपफ्लैश रिपोर्टर गतिविधि को प्रेरित करने की इसकी क्षमता से मापा गया। इस प्रभाव के लिए ED50 25 ng/mL है।

ऑर्गेनोइड संस्कृति सत्यापन

येसेन साइटोकाइन्स को मानव ट्यूमर ऑर्गेनोइड्स जैसे कि फेफड़े का कैंसर, गर्भाशय ग्रीवा का कैंसर, डिम्बग्रंथि का कैंसर, अग्नाशय का कैंसर और आंत के कैंसर, और सामान्य ऑर्गेनोइड्स जैसे कि मानव और माउस छोटी आंत के ऑर्गेनोइड्स पर सत्यापित किया गया है।

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