रैखिक PEI 40000, एक अधिक कुशल अभिकर्मक अभिकर्मक
आम तौर पर, ट्रांसफ़ेक्शन यूकेरियोटिक कोशिकाओं में कृत्रिम रूप से न्यूक्लिक एसिड (डीएनए या आरएनए) को पेश करने की प्रक्रिया है। ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक, जैसा कि इसके नाम से पता चलता है, ट्रांसफ़ेक्शन में शामिल अभिकर्मकों की एक श्रृंखला है। ट्रांसफ़ेक्शन की प्रक्रिया के दौरान, हम अक्सर कम ट्रांसफ़ेक्शन दक्षता, संकीर्ण अनुप्रयोग सीमा, मजबूत विषाक्तता, बोझिल संचालन और ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मकों की महंगी कीमत से परेशान होते हैं। तो, क्या कोई ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक है जो इन समस्याओं को हल कर सकता है? हाँ, रैखिक PEI इन समस्याओं को हल करने के लिए सबसे अच्छा विकल्प है।
नोट: येसेन ने एक नया PEI लॉन्च किया है Hieff Trans™ अल्ट्रा PEI-AAV ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक विभिन्न वायरस वैक्टरों के बड़े पैमाने पर उत्पादन और अनुयाई और निलंबन प्रणालियों के लिए उपयुक्त प्रोटीन की क्षणिक अभिव्यक्ति के लिए।
1. कोशिका ट्रांसफ़ेक्शन के प्रकार क्या हैं?
2. रैखिक PEI MW 40000 क्या है?
3. लीनियर PEI MW 40000 कैसे काम करता है?
4. पीईआई मेगावाट 40000 की विशेषताएं क्या हैं?
5. येसेन से अन्य ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक
6. सम्मानपूर्वक पढें
1. कोशिका ट्रांसफ़ेक्शन के प्रकार क्या हैं?
रैखिक PEI MW 40000 को पेश करने से पहले, आइए पहले सेल ट्रांसफ़ेक्शन के प्रकारों को संक्षेप में समझें। सेल ट्रांसफ़ेक्शन आनुवंशिक अनुसंधान, प्रोटीन अनुसंधान और कोशिका विज्ञान अनुसंधान के लिए बहुत महत्वपूर्ण है, जो गैर-वायरल संक्रमण साधनों का उपयोग करके कोशिकाओं में न्यूक्लिक एसिड (डीएनए या आरएनए) को कृत्रिम रूप से पेश करने की प्रक्रिया को संदर्भित करता है। ट्रांसफ़ेक्शन का मुख्य उद्देश्य कोशिकाओं में विशिष्ट जीन अभिव्यक्ति को बढ़ाकर या बाधित करके जीन या जीन उत्पादों के कार्य का अध्ययन करना या पुनः संयोजक प्रोटीन का उत्पादन करना है। बहिर्जात न्यूक्लिक एसिड की शुरूआत कोशिकाओं की विशेषताओं को बदल देगी, ताकि ट्रांसफ़ेक्शन के उद्देश्य को प्राप्त किया जा सके, जो जीन विनियमन और प्रोटीन अभिव्यक्ति के अध्ययन के साथ-साथ प्रोटीन के संश्लेषण और उत्पादन के लिए सहायक है।
कोशिका संक्रमण को रासायनिक, जैविक और भौतिक तरीकों या कोशिका में किसी विदेशी जीन के निवास समय के आधार पर विभाजित किया जा सकता है। क्षणिक संक्रमण में, पेश किया गया न्यूक्लिक एसिड बिना प्रतिकृति के सीमित समय के लिए कोशिका में मौजूद रह सकता है, जबकि स्थिर संक्रमण के साथ, पेश किया गया न्यूक्लिक एसिड मेजबान जीनोम में एकीकृत होता है और संक्रमित कोशिका की संतान में व्यक्त किया जा सकता है।
कोशिका अभिकर्मण के इतने सारे विभिन्न तरीकों के बावजूद, सही तरीका कैसे चुनें?
कोई भी एकल अभिकर्मक विधि सभी कोशिका प्रकारों के लिए उपयुक्त नहीं है और सभी प्रयोगात्मक आवश्यकताओं को पूरा करती है। इष्टतम अभिकर्मक विधि का चयन कोशिका प्रकार और प्रयोगात्मक स्थितियों की आवश्यकताओं के अनुसार किया जाना चाहिए।
वर्तमान में, रासायनिक अभिकर्मक अभी भी मुख्यधारा के कोशिका अभिकर्मक विधियां हैं, क्योंकि इनका संचालन आसान है और ये विभिन्न कोशिका लाइनों के साथ अनुकूल हैं।
2. रैखिक PEI MW 40000 क्या है?
पॉलीइथिलीनिमाइन लीनियर(पीईआई) एमW40000 (रैपिड लिसिस) पॉलीइथिलीनमाइन पर आधारित एक क्षणिक अभिकर्मक अभिकर्मक है जिसका आणविक भार 40,000 (PEI 40000) है। PEI 40000 एक अत्यधिक आवेशित धनायनिक बहुलक है जो आसानी से ऋणात्मक आवेशित न्यूक्लिक एसिड अणुओं को बांधकर कॉम्प्लेक्स बना सकता है, जिससे कोशिकाओं में कॉम्प्लेक्स प्रवेश कर सकते हैं।
PEI 25000 ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक की तुलना में, PEI 40000 को घोलना आसान है और इसे सीधे पानी में घोला जा सकता है। इसके अतिरिक्त, PEI 25000 में 4-11% प्रोपियोनिल अवशेष होते हैं, जो पॉलिमर बैकबोन को डीएनए से बंधने से रोकते हैं।लेकिन पीईआई 40000 एक पूर्ण शेड निर्माण है, इसलिए इसका प्रदर्शन लगातार कुशल है।
3. लीनियर PEI MW 40000 कैसे काम करता है?
पॉलीइथिलीनमाइन (PEI) एक बेहतरीन बहुक्रियाशील गैर-वायरल वेक्टर है जिसमें अच्छे सेल आसंजन होते हैं और इसका उपयोग लाइसोसोमल अवरोधकों से स्वतंत्र रूप से कोशिकाओं को संक्रमित करने के लिए किया जा सकता है। PEI और DNA इलेक्ट्रोस्टैटिक बलों द्वारा बंधे होते हैं, जिससे DNA ढीली कुंडल जैसी संरचना से गोलाकार कण परिसरों में ढह जाता है। PEI-DNA परिसर आमतौर पर बाहरी सेलुलर झिल्ली के साथ इलेक्ट्रोस्टैटिक रूप से बातचीत करने और एंडोसाइटोसिस द्वारा अवशोषित होने के लिए सकारात्मक रूप से चार्ज होते हैं। एंडोसाइटोज्ड PEI-DNA परिसरों को तब एंडोसोम द्वारा अपघटन के लिए लाइसोसोम में स्थानांतरित करने के लिए कैप्चर किया जाता है। लगातार बढ़ते आंतरिक आयनिक दबाव के कारण एंडोसोम फूल जाता है और फट जाता है, जिससे साइटोप्लाज्म में विदेशी DNA निकल जाता है। इस संक्रमण तंत्र को "प्रोटॉन स्पंज" प्रभाव कहा जाता है।
अध्ययनों से पता चला है कि PEI अणु PEI-DNA कॉम्प्लेक्स की सतह को कोट कर सकते हैं ताकि साइटोप्लाज्म में न्यूक्लियस द्वारा डीएनए को खराब होने से पर्याप्त रूप से बचाया जा सके, जिससे साइटोप्लाज्म से नाभिक तक विदेशी डीएनए का पारगमन सुनिश्चित हो सके। इसके अलावा, PEI अणु फॉस्फोलिपिड झिल्लियों में प्रवेश कर सकते हैं और कोशिका नाभिक में डीएनए स्थानांतरित करने के लिए स्थिर चैनल बना सकते हैं। PEI अणु कोशिका नाभिक में प्रवेश नहीं करते हैं और डीएनए वेक्टर के रूप में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं।
स्तनधारी कोशिकाओं में बहिर्जात जीन के प्रवेश के 1-4 दिन बाद जीन अभिव्यक्ति का पता लगाया जा सकता है। यह अभिव्यक्ति इस तथ्य के कारण है कि पेश किए गए डीएनए का एक हिस्सा नाभिक में प्रवेश करने के बाद mRNA में स्थानांतरित हो जाता है, और फिर साइटोप्लाज्म में अनुवादित होता है। क्योंकि यह विधि अपेक्षाकृत सरल और लागू करने में आसान है, एक अच्छा अभिव्यक्ति वेक्टर और अभिकर्मक विधि का चयन करके, प्रोटीन अभिव्यक्ति की मात्रा उच्च स्तर तक पहुँच सकती है। पीईआई अभिकर्मक अभिकर्मकों का व्यापक रूप से वैज्ञानिक अनुसंधान और औद्योगिक अनुप्रयोगों में प्रोटीन संरचना और कार्य का अध्ययन करने के लिए एक सामान्य अभिकर्मक विधि के रूप में उपयोग किया गया है।
4. पीईआई मेगावाट 40000 की विशेषताएं क्या हैं?
कम साइटोटॉक्सिसिटी वाले क्षणिक ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक के रूप में, PEI 40000 में HEK293 और CHO जैसी कोशिकाओं में उच्च ट्रांसफ़ेक्शन दक्षता और उच्च जीन अभिव्यक्ति दक्षता है। रैखिक PEI ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक को HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, HepG2 और Hela कोशिकाओं सहित सेल लाइनों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए मान्य किया गया है। ट्रांसफ़ेक्शन दक्षता 80% ~ 90% जितनी अधिक है। प्रदर्शन डेटा देखना जारी रखें:
- उच्च अभिकर्मक दक्षता, आसंजक और निलंबन कोशिकाओं के लिए उपयुक्त
यह HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2, और हेला कोशिकाओं आदि सहित विभिन्न प्रकार की सेल लाइनों के लिए उपयुक्त है, अभिकर्मक दक्षता 80% ~ 90% जितनी अधिक है।
तालिका नंबर एक।मान्य सेल लाइनों की सूची
| आसंजक कोशिकाएं(1 μg डीएनए) | क्षमता | निलंबन कोशिकाएं(2 μg डीएनए) | क्षमता |
| एचईके-293 | 80%-90% | चो K1 | 85% |
| एसएफ9 | 80%-90% | एचईके-293टी | 70%-80% |
| हेपजी2 | 80%-90% | टीएचपी-1 | 70%-80% |
| हेला | 80%-90% |
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चित्र 2. PEI 40000 ने GFP प्लास्मिड को आसंजक कोशिकाओं HEK-293 में ट्रांसफ़ेक्ट किया, 72 घंटे के बाद ट्रांसफ़ेक्शन दक्षता 90% तक पहुँच गई (बाएं); PEI 40000 ने GFP प्लास्मिड को निलंबन कोशिकाओं CHO-K1 में स्थानांतरित किया, और 72 घंटे के बाद संक्रमण दक्षता 80% तक पहुंच गई (दाएं)
- कम विषाक्तता
यह कोशिका व्यवहार्यता सुनिश्चित करता है और ट्रांसफ़ेक्शन दक्षता में सुधार करता है।
चित्र 3. YEASEN द्वारा उपलब्ध कराए गए PEI 40000 में प्रतिस्पर्धी पॉली** की तुलना में बहुत कम साइटोटॉक्सिसिटी है
- ट्रांसफ़ेक्शन दक्षता PEI 25000 की तुलना में अधिक है, जो PEI 25000 को पूरी तरह से प्रतिस्थापित कर सकती है
PEI 25000 में 4-11% प्रोपियोनिल अवशेष होते हैं, जो पॉलिमर बैकबोन को DNA से बंधने से रोकते हैं। PEI 25000 की तुलना में, PEI 40000 एक पूर्ण शेड निर्माण है, इसलिए इसका प्रदर्शन लगातार कुशल है।
चित्र 4. HEK-293 कोशिकाओं को PEI 25000 और PEI 40000 ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मकों का उपयोग करके GFP प्लास्मिड के साथ अस्थायी रूप से ट्रांसफ़ेक्ट किया गया, और 72 घंटे के बाद प्रतिदीप्ति देखी गई। प्रायोगिक परिणाम: PEI 40000 अभिकर्मक दक्षता PEI25000 से बेहतर है।
- सरल विन्यास और लघु अभिकर्मन समय
यह उत्पाद एक त्वरित प्रकार है, जिसे पीएच समायोजन के बिना सीधे पानी में भंग किया जा सकता है। और सीरम और एंटीबायोटिक दवाओं के साथ संगत है, माध्यम को बदलने की कोई आवश्यकता नहीं है।
- लागत प्रभावी, बड़े पैमाने पर क्षणिक अभिकर्मन के लिए उपयुक्त
आयातित उत्पादों की तुलना में, येसेन पीईआई 40000 ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक की कीमत कम और बैच स्थिर है।
5. येसेन से अन्य ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक
येसेन के पास ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मकों की एक पूरी उत्पाद लाइन है, जिसमें वर्तमान मुख्यधारा के रासायनिक ट्रांसफ़ेक्शन तरीके, कैटायनिक लिपोसोम अभिकर्मक और कैटायनिक पॉलीमर अभिकर्मक शामिल हैं, जिन्हें विभिन्न उपयोग परिदृश्यों में लागू किया जा सकता है। इस अनुभाग में, हम येसेन के सभी ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मकों और उनके अनुप्रयोगों को निम्न तालिका में सूचीबद्ध करते हैं, आप अपने प्रयोग के लिए सबसे उपयुक्त चुन सकते हैं।
तालिका 2.येसेन ट्रांसफेक्शन अभिकर्मकों की सूची
| बिल्ली# | प्रोडक्ट का नाम | न्यूक्लिक एसिड प्रकार | कोशिका प्रकार |
| 40823ईएस | डीएनए | पक्षपाती और निलंबन कोशिकाएं | |
| 40816ईएस | डीएनए | पक्षपाती और निलंबन कोशिकाएं | |
| 40820ईएस | डीएनए | पक्षपाती और निलंबन कोशिकाएं | |
| 40821ईएस | डीएनए | पक्षपाती और निलंबन कोशिकाएं | |
| 40802ईएस | डीएनए (<10kb), shRNA | एअलग-अलग कोशिकाएं | |
| 40805ईएस | Hieff Trans™ सस्पेंशन सेल-फ्री लिपोसोमल ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक (पूछताछ) | डीएनए (<10kb) | निलंबन कोशिकाएं(के लिए निलंबित रक्त कोशिकाएं या प्रतिरक्षा कोशिकाओं, अभिकर्मक दक्षता वर्तमान रासायनिक अभिकर्मकों का है उच्च नहीं. इलेक्ट्रोपोरेशन या वायरस विधि अनुशंसित हैं।) |
| 40806ईएस | siRNA、मिरना、प्री-miRNA, मिमिक miRNA, एंटीmiRNA | आसंजक और निलंबन कोशिकाएं |
6. सम्मानपूर्वक पढें
ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक – हाईफ़ ट्रांस™ और पीईआई
इन विट्रो सेल ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक उत्पाद चयन गाइड
संदर्भ:
[1] लू, वाई., याओ, जे., और झोउ, जे. (एनडी)। पॉलीइथिलीनमाइन-डीएनए कॉम्प्लेक्स का गठन और एकत्रीकरण व्यवहार। फार्मास्यूटिक्स विभाग, नानजिंग 210009।
[2] सबिन, जे., एट अल. (2022)। पॉलीएथिलीनिमाइन ट्रांसफ़ेक्शन के तंत्र और जीन थेरेपी और डीएनए टीकों पर उनके निहितार्थ पर नई जानकारी। कोलाइड्स और सरफेस बी: बायोइंटरफेस, 210, 112219।
[3] पॉलीएथिलीनिमाइन (पीईआई) के साथ क्षणिक स्तनधारी कोशिका संक्रमण। लोंगो पीए, कावरन जेएम, किम एमएस, लेही डीजे