विवरण
T7 RNA पॉलीमरेज़ T7 प्रमोटर अनुक्रम (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') युक्त डबल-स्ट्रैंडेड DNA को टेम्पलेट के रूप में और NTPs को सब्सट्रेट के रूप में उपयोग करता है ताकि प्रमोटर के डाउनस्ट्रीम DNA के रिवर्स स्ट्रैंड के पूरक RNA को संश्लेषित किया जा सके। कुंद सिरों या 5' ओवरहैंग वाले रैखिक डबल-स्ट्रैंडेड DNA दोनों T7 RNA पॉलीमरेज़ के लिए टेम्पलेट सब्सट्रेट के रूप में काम कर सकते हैं, जिसका अर्थ है कि रैखिक प्लास्मिड या PCR उत्पादों को इन विट्रो RNA संश्लेषण के लिए टेम्पलेट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।
यह किट अवशिष्ट T7 RNA पॉलीमरेज़ का पता लगाने के लिए सैंडविच एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (ELISA) सिद्धांत का उपयोग करती है। T7 RNA पॉलीमरेज़ मानकों और परीक्षण नमूनों को एंटी-T7 RNA पॉलीमरेज़ एंटीबॉडी (36705-A) के साथ पहले से लेपित माइक्रोप्लेट कुओं में जोड़ा जाता है। फिर पतला बायोटिन-लेबल T7 RNA पॉलीमरेज़ डिटेक्शन एंटीबॉडी (36705-C) मिलाया जाता है, उसके बाद स्ट्रेप्टाविडिन-HRP (SA-HRP) (36705-D) मिलाया जाता है, जिससे एंटीबॉडी + एंटीजन + एंटीबॉडी-बायोटिन + SA-HRP कॉम्प्लेक्स बनता है। धोने के बाद, रंग विकास के लिए TMB सब्सट्रेट (36705-H) मिलाया जाता है। स्टॉप सॉल्यूशन (36705-I) मिलाने पर HRP द्वारा TMB को रंगहीन से नीले और अंत में पीले रंग में परिवर्तित किया जाता है। पीले रंग की तीव्रता नमूने में पहचाने गए T7 RNA पॉलीमरेज़ की मात्रा के साथ सकारात्मक रूप से सहसंबंधित है।
अवयव
| नहीं। | नाम | 36705ES48 | 36705ES96 |
| 36705-ए | एंटी-टी7 आरएनए पॉलीमरेज़ लेपित माइक्रोटिटर स्ट्रिप्स | 48 टी | 96 टी |
| 36705-बी* | मानक: T7 आरएनए पॉलीमरेज़ | 1 शीशी | 2 शीशी |
| 36705-सी | खोज एंटीबॉडी:बायोटिन-संयुग्मित एंटीबॉडी | 60 μएल | 120 μएल |
| 36705-डी | Streptavidin-एचआरपी | 30 μएल | 60 μएल |
| 36705-ई | तनुकरण बफर 1 | 25 एमएल | 45 एमएल |
| 36705-एफ | वॉश बफर सांद्रतादर (20×) | 25 एमएल | 50 एमएल |
| 36705-जी | तनुकरण बफर 2 | 15 एमएल | 30 एमएल |
| 36705-एच | टीएमबी सब्सट्रेट | 8 एमएल | 15 एमएल |
| 36705-आई | समाधान रोकें | 5 एमएल | 10 एमएल |
| 36705-जे | प्लेट सीलर | 3 प्रत्येक | 5 प्रत्येक |
*मानक 36705-बी एक लाइओफिलाइज़्ड पाउडर है।
T7 आरएनए पोलीमरेज़ के साथ संगत: 10625, 10628 और 10629.
सत्यापन डेटा
तालिका 1. रैखिकता सीमा: 1 ~ 32 एनजी/एमएल ，आर2=0.999 ，सीवी≤5%।
| कक्षा | चिंता（ एनजी/एमएल） | औसत（ एनजी/एमएल） | वसूली（%） | सीवी% |
| मानक1 | 32 | 31.965 | 99.9% | 2.2% |
| मानक2 | 16 | 16.070 | 100.5% | 5.0% |
| मानक3 | 8 | 7.812 | 97.7% | 2.1% |
| मानक4 | 4 | 4.192 | 104.8% | 0.8% |
| मानक5 | 2 | 2.020 | 101.8% | 3.5% |
| मानक 6 | 1 | 1.173 | 117.3% | 0.0% |
| एनसी | 0 | / | / | / |
तालिका 2. उच्च विशिष्टता
| प्रोटीन का नाम | चिंता | पता चला या नहीं |
| पीसकारात्मक सीनियंत्रण | 1 एनजी/एमएल | का पता चला |
| एनप्रतिगामी सीनियंत्रण | 0 एनजी/एमएल | रा |
| अल्ट्रान्यूक्लिअस | 10 μg/एमएल | रा |
| नमक सक्रिय अल्ट्रान्यूक्लिऐस | 10 μg/एमएल | रा |
| DNase मैं | 10 μg/एमएल | रा |
| म्यूरिन आरएनेज़ अवरोधक | 10 μg/एमएल | रा |
| वैक्सीनिया कैपिंग एंजाइम | 10 μg/एमएल | रा |
| अकार्बनिक पायरोफॉस्फेटेस | 10 μg/एमएल | रा |
| mRNA कैप 2 ´-O-मेथिलट्रांसफेरेज़ | 10 μg/एमएल | रा |
| 1%बीएसए | 10 एमग्राम/एमएल | रा |
तालिका 3. एलओक्यू: इस उत्पाद के लिए परिमाणीकरण की सीमा मानक वक्र के सबसे कम सांद्रता बिंदु को पतला करके निर्धारित की जाती है, जहाँ सबसे कम सांद्रता पर भिन्नता का गुणांक (CV) 20% से कम होता है। इसे परिमाणीकरण की सीमा के रूप में परिभाषित किया जाता है, जो 1 एनजी/एमएल है।
| एसटीडी6 सैद्धांतिक मूल्य (एनजी/एमएल) | मानक 6 परीक्षण औसत मूल्य (एनजी/एमएल) | टीअनुमानित पुनरावृत्तियाँ | सीवी% | वसूली |
| 1 | 0.858 | 24 | 12.6% | 85.8% |
तालिका 4. एलओडी: इस उत्पाद की पहचान सीमा को नकारात्मक नियंत्रण (एनसी) के औसत पहचान मूल्य के अनुरूप मानक सांद्रता और मानक विचलन के दो गुना के रूप में परिभाषित किया गया है। 24 एनसी मानकों को मापने, औसत और मानक विचलन की गणना करके, पहचान सीमा 0.318 एनजी / एमएल निर्धारित की जाती है।
| औसत मूल्य（आयुध डिपो） | एसडी（आयुध डिपो） | औसत मान +2एसडी (ओडी) | औसत मान +2एसडी (एनजी/एमएल) |
| 0.0527 | 0.0038 | 0.0604 | 0.3176 |
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