Bab 1: Teknologi PCR
1.1 Prinsip PCR
PCR (Polymerase Chain Reaction), atau reaksi berantai polimerase, mengacu pada reaksi DNA polimerase dikatalisis oleh untai induk DNA sebagai cetakan, dengan primer khusus untuk perpanjangan titik awal, penambahan dNTP, Mg2+ Dan faktor ekstensi, peningkatan amplifikasi Faktor. Melalui langkah denaturasi, annealing dan ekstensi, replikasi untai anak secara in vitro bersifat komplementer terhadap cetakan DNA untai induk, yang dapat secara cepat dan spesifik memperbanyak DNA target secara in vitro.
1.2 Klasifikasi DNA Polimerase
DNA pol adalah enzim penting untuk seluler replikasi DNA. Berdasarkan stabilitas termal, kemampuan sintesis, kecepatan, kesetiaan dan kekhususan, dapat diklasifikasikan sebagai DNA polimerase Taq, DNA polimerase fidelitas tinggi, DNA polimerase hot-start, DNA polimerase ekspansi langsung, DNA polimerase terfragmentasi panjang enzim, DNA polimerase cepat, DNA polimerase ganda dan lain sebagainya.
Yang paling umum adalah DNA polimerase Taq, yang memiliki aktivitas polimerase pada ujung 5'→3' dan aktivitas eksonuklease di ujung 5'→3', tapi tidak Aktivitas koreksi ujung 3'→5'. Fitur terpenting Taq adalah ketahanan panasnya yang baik, yang dapat menahan denaturasi termal melangkah dari PCR, sehingga tidak perlu menambahkan lebih banyak enzim di tengah proses. Namun, Taq memiliki fidelitas yang rendah karena tidak memiliki aktivitas proofreading. Fidelitasnya terutama dicapai oleh konsentrasi dan rasio ion magnesium dan dNTP.
DNA polimerase fidelitas tinggi mengandung pusat polimerisasi dan pusat pembelahan, pusat polimerisasi memiliki aktivitas DNA polimerase 5'→3', yang dapat mengkatalisis sintesis DNA sepanjang arah 5'→3'; pusat pembelahan memiliki aktivitas eksonuklease 3'→5', yang dapat melakukan perbaikan ketidakcocokan basa. Oleh karena itu, selain karakteristik DNA polimerase Taq, DNA polimerase dengan ketelitian tinggi juga memiliki aktivitas korektif, yang bertanggung jawab untuk pemotongan yang tidak cocok nukleotida, sehingga menjamin keakuratan produk.
Diagram di atas menunjukkan cara kerja DNA polimerase [1].
PCR Langsung (Direct PCR) adalah reaksi itu menggunakan sampel yang tidak dimurnikan untuk amplifikasi PCR dan hewan atau jaringan tanaman untuk amplifikasi langsung. Saat ini,
Gambar di atas menunjukkan teknik PCR Langsung.
A. Metode langsung: ambil sejumlah kecil sampel dan tambahkan langsung ke PCR Master Mix untuk identifikasi PCR;
B. Metode lisis: setelah sampel diambil, tambahkan ke larutan lisis untuk melepaskan genom, ambil sejumlah kecil supernatan lisis dan tambahkan ke PCR Master Mix untuk identifikasi PCR.
1.3 Pertanyaan yang Sering Diajukan dan Solusinya
| Masalah | Alasan | Larutan |
| Tanpa pita yang diperkuat | Masalah sistem elektroforesis | Memecahkan masalah pewarna asam nukleat, konsentrasi gel, dan penyangga elektroforesis. |
| Suhu denaturasi tidak akurat | Apakah suhu yang ditunjukkan pada instrumen PCR sesuai dengan suhu sebenarnya? Jika suhu terlalu tinggi, enzim akan cepat mati. dalam beberapa siklus pertama; jika terlalu rendah, denaturasi templat tidak lengkap. | |
| Kontaminasi protease dan nuklease dalam sistem reaksi | Sistem reaksi harus dipanaskan pada suhu 95°C selama 5-10 menit sebelum penambahan enzim Taq. | |
| Pkesalahan rimer | Periksa spesifisitas primer atau rancang ulang primer menggunakan BLAST. | |
| Template mengandung kotoran | Secara khusus, jaringan yang difiksasi formaldehida dan tertanam parafin sering kali mengandung asam format, yang menyebabkan depurinasi DNA dan memengaruhi hasil PCR. | |
| Kerusakan dan kegagalan primer | Pastikan primer sintetis tersebut benar, dimurnikan, atau dinonaktifkan karena kondisi penyimpanan yang tidak tepat. | |
| Jumlah produk PCR lebih sedikit | Suhu anil yang tidak tepat | Reaksi PCR gradien dirancang untuk mengoptimalkan suhu annealing dengan gradien 2 derajat. |
| Kehadiran inhibitor dalam cetakan DNA | Pastikan cetakan DNA bersih. | |
| Denaturasi berkepanjangan | Denaturasi yang berkepanjangan menyebabkan inaktivasi DNA polimerase. | |
| Ekstensi terlalu pendek | Waktu perpanjangan terlalu singkat. Atur waktu perpanjangan berdasarkan prinsip 1kb/menit. | |
| Jumlah cetakan DNA terlalu rendah | Meningkatkan jumlah cetakan DNA. | |
| Jumlah primer tidak mencukupi | Tingkatkan kandungan primer dalam sistem. | |
| Jumlah siklus PCR tidak mencukupi | Meningkatkan jumlah siklus reaksi. | |
| Beberapa band | Spesifisitas primer buruk | Perangkat lunak desain primer seperti BLAST dan Primer digunakan untuk memeriksa spesifisitas primer atau mendesain ulang primer. |
| Jumlah loop yang berlebihan | Tingkatkan jumlah templat dengan tepat, dan kurangi jumlah siklus. | |
| Kontaminasi DNA Eksogen | Pastikan pengoperasian yang bersih. | |
| Jumlah template yang berlebihan | Jumlah DNA plasmid harus <50ng, sedangkan DNA genom harus <200ng. | |
| Terlalu banyak primer | Kurangi jumlah primer dalam sistem reaksi. | |
| Larutan reaksi tidak tercampur dengan baik | Pastikan buffer reaksi telah meleleh sempurna dan tercampur merata. | |
| Tuhan Konsentrasi tinggi | Sesuaikan konsentrasi Mg yang digunakan dengan tepat. | |
| Dosis enzim tinggi atau kualitas enzim buruk | Kurangi jumlah enzim atau ganti dengan sumber lain. | |
| Suhu anil rendah, waktu anil dan ekstensi panjang | Tingkatkan suhu annealing untuk mengurangi waktu denaturasi dan perpanjangan, atau rancang reaksi PCR gradien untuk mengoptimalkan suhu annealing. | |
| Masalah dengan campuran PCR itu sendiri | Jika itu adalah PCR premix, mungkin kualitas reagennya sendiri yang bermasalah, disarankan untuk mengganti batch atau merek lain. | |
| Ukuran Salah | Ckontaminasi | Bersihkan bangku dengan reagen dan ujung yang baru. |
| Penggunaan template atau primer yang salah | Ganti primer dan templat. | |
| Genotipe | Analisis sekuens dan studi BLAST dilakukan pada gen yang dipelajari. |
Bab 2: Elektroforesis Asam Nukleat
2.1 Prinsip elektroforesis asam nukleat
Pergerakan partikel bermuatan di bawah pengaruh medan listrik menuju elektroda yang berlawanan dengan sifat listriknya disebut Elektroforesis. Menggunakan partikel bermuatan dalam medan listrik bergerak dengan kecepatan yang berbeda dan mencapai pemisahan teknologi tersebut disebut elektroforesis. Elektroforesis asam nukleat adalah alat penting untuk penelitian asam nukleat dan merupakan sebuah bagian integral dari teknik seperti probe asam nukleat, amplifikasi asam nukleat dan analisis sekuens. Elektroforesis asam nukleat biasanya dilakukan dalam agarosa atau gel poliakrilamid. Konsentrasi yang berbeda agarosa dan poliakrilamida dapat membentuk gel dengan ukuran saringan molekuler yang berbeda, yang dapat digunakan untuk memisahkan fragmen asam nukleat dengan berat molekul berbeda.
2.2 Elektroforesis gel agarosa
Agarosa merupakan polimer linier yang diekstrak dari rumput laut. Agarosa dipanaskan dalam larutan penyangga dan dicairkan menjadi sol bening dan transparan, kemudian dituangkan ke dalam cetakan gelatin dan mengeras untuk membentuk matriks padat yang dikenal sebagai gel, yang kepadatannya bergantung pada konsentrasi agarosa.
Agarosa elektroforesis gel adalah salah satu jenis metode elektroforesis yang menggunakan agarosa sebagai media pendukung, dan perbedaan utama antara analitis prinsip dan pendukung elektroforesis lainnya adalah memiliki peran ganda dari "saringan molekular" dan "elektroforesis". gel ditempatkan di medan listrik, di bawah aksi dari medan listrik, muatan asam nukleat bermigrasi ke positif tiang melalui jaring dari itu gel. Itu tingkat migrasi dipengaruhi oleh ukuran molekul asam nukleat, konsentrasi agarosa, tegangan yang diberikan, medan listrik, penyangga elektroforesis, dan jumlah pewarna yang tertanam. Setelah waktu elektroforesis yang tepatSadalah di bawah kondisi yang berbeda, fragmen asam nukleat dengan ukuran dan konformasi yang berbeda akan berada pada posisi yang berbeda pada gel, sehingga tercapai tujuan pemisahan.Pemisahan gel agarosa memiliki jangkauan yang luas, umumnya digunakan dalam pemulihan gel pemotongan DNA, isolasi DNA dan digunakan untuk mendukung apakah DNA tersebut rekombinan, plasmid, dll. Apakah plasmid dipotong atau tidak, konsentrasi gel agarosa yang berbeda dapat dipisahkan dari panjangnya 200bp ke 50kb dari DNA fragmen.
2.3 Metode Eksperimen
Membuat lem
Ambil konsentrasi 1% sebagai contoh: timbang 1 g agarosa, tuang ke dalam labu erlenmeyer 250 ml, tambahkan 100 ml buffer elektroforesis 0,5×TBE dan aduk rata, rebus dalam oven microwave lalu keringkan udara hingga sekitar 60℃, tambahkan pewarna asam nukleat dalam jumlah yang sesuai dan kocok dengan baik lalu tuangkan ke dalam pelat gel bersih yang telah disiapkan, ambil sisir dengan kedua tangan untuk masukkan ke dalam larutan gel secara vertikal, dan tunggu gel menjadi didinginkan secara alami sampai benar-benar padat (25-30 menit).
Lepaskan sisir pembuat lem
Pindahkan gel dengan hati-hati ke tangki elektroforesis (baik dengan baki gel atau hanya gelnya)), letakkan sisi sumur sampel di kutub negatif, dan tambahkan 0,5× TBE penyangga elektroforesis sampai gel berada sekitar 1 mm di bawah.
Menambahkan mencicipi
Tambahkan buffer pemuatan 10× (memuat penyangga) ke sampel DNABahasa Indonesia: aduk rata, lalu masukkan campuran sampel secara perlahan ke dalam adonan.Bgel gabungan sumur dengan pistol pipet, menambahkan 5-10 μL sampel per sumur (tidak lebih dari 40 μL). Umumnya, sumur pertama harus diisi dengan penanda DNA, sumur kedua dengan kontrol positif (DNA yang ditentukan), Dan yang ketiga dengan kontrol negatif (reagen atau air), Dan Urutan sampel harus dicatat.
Elektroforesis
Tutupi tangki elektroforesis, hubungkan kabel, nyalakan daya, dan atur tegangan elektroforesis, arus dan waktu parameter. Umumnya, tegangan tidak boleh melebihi 5 v/cm (panjangnya mengacu pada jarak antara kutub positif dan negatif tangki elektroforesis), Dan waktu elektroforesis umumnya 15-30 menit.
Akhir elektroforesis
Menghapus itu gel (tanpa baki gel) dan gambar di bawah sistem pencitraan UV untuk mendapatkan gambar elektroforesis yang jelas, lalu edit gambar elektroforesis dengan perangkat lunak pengeditan gambar dan beri label dengan informasi sampel, tanggal, dan operator.
2.4 Pertanyaan yang Sering Diajukan dan Solusinya
| Masalah | Alasan | Larutan |
| Target band hilang | DNA kecil kehabisan gel | Perpendek waktu elektroforesis, kurangi tegangan, tingkatkan konsentrasi gel. |
| Pita DNA dengan ukuran berat molekul yang sama tidak mudah dibedakan | Tingkatkan waktu elektroforesis untuk mencocokkan konsentrasi gel yang optimal. | |
| Fragmen target terlalu besar untuk elektroforesis konvensional. | Dianalisis pada elektroforesis gel berdenyut. | |
| Klip Tanpa Tujuan | Proses PCR salah dan tidak memperbanyak produk target. | |
| Pita DNA kabur | Penyangga elektroforesis basi | Bila buffer elektroforesis digunakan berkali-kali, kekuatan ionik akan berkurang, nilai PH akan naik perlahan, dan kemampuan pembilasan akan melemah, sehingga memengaruhi efek elektroforesis, jadi disarankan untuk mengganti buffer elektroforesis secara berkala. |
| degradasi DNA | Hindari kontaminasi nuklease. | |
| Kondisi elektroforesis yang digunakan tidak sesuai untuk elektroforesis | Tegangan elektroforesis tidak boleh melebihi 20V/cm dan suhunya harus <30°C; suhu elektroforesis untaian DNA yang besar harus <15°C; periksa apakah buffer elektroforesis yang digunakan memiliki kapasitas buffer yang cukup. | |
| Pengambilan sampel DNA yang berlebihan | Kurangi jumlah DNA yang diambil sampelnya dalam gel. | |
| Sampel DNA terlalu asin | Garam berlebih dihilangkan dengan presipitasi etanol sebelum elektroforesis. | |
| kontaminasi protein | Ekstraksi fenol sebelum elektroforesis menghilangkan protein. | |
| Konsentrasi sampel terlalu tinggi | Konsentrasi sampel atas harus kurang dari 500ng/sumur, konsentrasi yang terlalu tinggi akan mempengaruhi kecepatan elektroforesis, berjalan, mengakibatkan terseret dan kabur. | |
| Pita lemah atau tidak ada | Ukuran sampel DNA tidak mencukupi | Meningkatkan jumlah penyerapan DNA |
| degradasi DNA | Menghindari kontaminasi nuklease pada DNA | |
| Sumber cahaya yang tidak sesuai untuk pewarna asam nukleat | Pilih sumber cahaya dengan panjang gelombang yang tepat sesuai dengan petunjuk untuk pewarna asam nukleat. | |
| Band tidak terpisah | kekurangan waktu | Meningkatkan waktu elektroforesis |
| Konsentrasi gel salah | Konsentrasi lem terlalu tinggi, mengakibatkan terlalu besarnya hambatan terhadap pemisahan. | |
| Konsentrasi ion garam dalam sampel terlalu tinggi | Konsentrasi ion garam yang tinggi meningkatkan resistensi elektroforesis dan mencegah pemisahan pita, misalnya sampel yang dicerna yang mengandung penyangga endonuklease. | |
| Pita non-spesifik | Kontaminasi RNA | Persiapan ulang sampel |
| Kontaminasi antar sampel | Penggantian ujung selama pengisian; menghindari tumpahan sampel dengan volume >40 μl. |
2.5 Elektroforesis gel poliakrilamid
Gel poliakrilamid terbentuk melalui reaksi kimia antara monomer akrilamid, katalis polimerisasi rantai N,N,N',N'-tetrametil etilendiamin (TEMED) dan amonium persulfat, serta agen pengikat silang N,N'-metilenbisakrilamid. Monomer akrilamid berpolimerisasi dengan adanya katalis untuk membentuk rantai panjang rantai, yang saling terkait oleh agen pengikat silang untuk membentuk gel, ukuran pori-porinya ditentukan oleh panjang rantai dan tingkat ikatan silang. Ukuran pori-pori ditentukan oleh panjang rantai dan tingkat ikatan silang. Panjang rantai tergantung pada Konsentrasi akrilamida dan derajat ikatan silang polimer dapat diubah dengan mengatur rasio akrilamida terhadap agen pengikat silang..
Elektroforesis gel poliakrilamid dapat digunakan untuk memisahkan sampel berdasarkan perbedaan dalam mengenakan biaya, ukuran molekul dan bentuk sampel yang dielektroforesisIni menggabungkan penyaringan molekuler dan elektrostatik , dan memiliki daya pemisahan yang lebih tinggi daripada elektroforesis gel agarosa. Fragmen DNA berbeda hanya dengan satu nukleotida dapat dipisahkan.
Elektroforesis gel poliakrilamid digunakan untuk menganalisis dan menyiapkan fragmen DNA yang panjangnya kurang dari 1 kb. Tergantung pada Ukuran fragmen asam nukleat yang akan diisolasiBahasa Indonesia: gel dari berbeda dapat dipersiapkan.
Kisaran pemisahan efektif untuk berbagai konsentrasi akrilamida dan DNA ditunjukkan pada tabel di bawah ini:
| Kons. (%) | Rentang pemisahan efektif (bp) |
| 3.5 | 100 hingga 2000 |
| 5 | 80 hingga 500 |
| 8 | 60 sampai 400 |
| 12 | 40 sampai 200 |
| 15 | 25 sampai 150 |
| 20 | 10 sampai 100 |
2.4 Pedoman Pemilihan Produk Terkait
PCR konvensional | ||||
| Spesifikasi | 10167ES | 10102ES | 10103ES | 10108ES |
| Panjang Amplifikasi | ≤10-15 bahasa inggris | ≤5kb | ≤5kb | ≤4kb |
| Waktu Perpanjangan | 1-10 detik/kb | 30 detik/kb | 30 detik/kb | 30 detik/kb |
| Struktur Akhir Produk | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA |
| Suhu Anil | 60℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ |
| Rentang Kompatibilitas GC | 30-70% | 40-70% | 40-70% | 30-70% |
| Aktivitas Eksonuklease 5'-3' | Hadiah | Hadiah | Hadiah | Hadiah |
| PCR Koloni | Sesuai | Sesuai | Sesuai | Sesuai |
| Identifikasi Gen | Sesuai | Sesuai | Sesuai | Sesuai |
| PCR Multipleks | Tidak Cocok | Tidak Cocok | Tidak Cocok | PCR 3-4 plex |
| Indikator Elektroforesis | ungu-merah | Biru | Tanpa warna | Biru |
| Mulai Panas | Mulai Panas | Tidak Mulai Panas | Tidak Mulai Panas | Mulai Panas |
| Pra-campuran/Kit | pra-campuran | pra-campuran | pra-campuran | pra-campuran |
PCR langsung | ||||
| Spesifikasi | 10185ES | 10188ES | 10187ES | |
| Tipe Produk | Amplifikasi Langsung Tikus | Amplifikasi Langsung Darah | Amplifikasi Langsung Tanaman | |
| Panjang Amplifikasi | ≤1kb | ≤8kb | ≤1kb | |
| Waktu Perpanjangan | 30 detik/kb | 3-5 s/kb untuk ≤2 kb, | 60 detik/kb | |
| 10 s/kb untuk ≤8 kb | ||||
| Contoh waktu lisis | 15 menit | 0-3 menit | 0-10 menit | |
| Struktur Akhir Produk | Ujung Tumpul | Ujung Tumpul | Ujung Tumpul | |
| Suhu Anil | Tm-(2~5)℃ | Tm-(1~2)℃ | Tm-(2~5)℃ | |
| Rentang Kompatibilitas GC | 30-70% | 30-75% | 40-65% | |
| Aktivitas Eksonuklease 5'-3' | √ | √ | √ | |
| Identifikasi Gen | √ | √ | √ | |
| PCR Multipleks | 3-4 kompleks | |||
| Amplifikasi Sampel Langsung | √ | √ | √ | |
| Indikator Elektroforesis | Biru | Tanpa warna | Biru | |
| Mulai Panas | √ | √ | √ | |
| Pra-campuran/Kit | Kit (dengan Campuran) | Kit (dengan campuran + buffer) | Kit (dengan Campuran) | |
| Organisme yang Cocok | Tikus, Tikus | Manusia, Tikus, Kambing, Ayam, Babi, dll. | Beras, Jagung, Tembakau, Rapeseed, Gandum, Kedelai, dll. | |
| Jaringan/Bahan yang Cocok | Ekor, Telinga, Jari Kaki (dengan otot), dan organ lainnya | Darah segar dengan EDTA, Heparin, Sitrat, dll., darah beku, bercak darah kering komersial | Daun muda, daun tua, bibit, batang muda | |
| Contoh masukan | Jaringan: 5-10 mg; Ekor: 1-5 mm | Darah lengkap: 0,5%-20%, bercak darah kering: 1 mm² | Daun: 1-10 mm, Biji: 1-3 mm | |
PCR Fidelitas Tinggi | ||||
| Spesifikasi | 10164ES | 10153ES | 10154ES | |
| Panjang Amplifikasi | ≤10kb gDNA, ≤10kb cDNA, ≤16kb λDNA | ≤10 kb DNA-g, ≤10 kb DNA-c, ≤13 kb DNA-λ | ≤10 kb DNA-g, ≤10 kb DNA-c, ≤13 kb DNA-λ | |
| Waktu Perpanjangan | 5 detik/kb | 30 detik/kb | 30 detik/kb | |
| Kesetiaan (Taq) | 83 tahun | 83 tahun | 83 tahun | |
| Struktur Akhir Produk | Ujung Tumpul | Ujung Tumpul | Ujung Tumpul | |
| Suhu Anil | 60℃ | 68℃ | 68℃ | |
| Rentang Kompatibilitas GC | 20-80% | 30-60% | 30-60% | |
| Aktivitas Eksonuklease 5'-3' | Absen | Absen | Absen | |
| Indikator Elektroforesis | Biru | Tanpa warna | Biru | |
| Enzim Tunggal/Campuran Pra-campuran | pra-campuran | Enzim Tunggal | pra-campuran | |
| Toleransi | / | / | Darah, Lisat Jaringan Tikus | |
Elektroforesis Asam Nukleat | ||||
| Kategori Produk | Kucing NO. | Nama Produk | Aplikasi | |
| Agarosa | 10208ES | Agarosa | Elektroforesis asam nukleat rutin | |
| 10221ES | Agarose dengan Pengayakan Tinggi (Tingkat PCR) | Cocok untuk memisahkan fragmen DNA 20 bp-800 bp, sebanding dengan gel poliakrilamid | ||
| 10226ES | Tablet Agarosa (0.5 gram/tablet) | Nyaman untuk aplikasi agarosa rutin | ||
| Pewarna Asam Nukleat | 10202ES | Pewarna Gel Asam Nukleat YeaRed (10.000× dalam Air) | Larut dalam air, dengan sifat spektral mirip dengan EB, dapat tereksitasi pada cahaya UV 300 nm | |
| Penanda DNA | 10510ES | Tangga DNA GoldBand 1 kb | 250-12000 bp (13 pita) | |
| 10515ES | Tangga DNA GoldBand 50 bp | 50-1000 bp (14 pita) | ||
| 10507ES | Tangga DNA GoldBand 100bp | 100-1500 bp (12 pita) | ||
| 10516ES | GoldBand 100 bp ditambah DNA Ladder | 100-3000 bp (14 pita) | ||
| 10517ES | Tangga DNA GoldBand 200 bp | 200-5000 bp (12 pita) | ||
| 10518ES | Tangga DNA GoldBand 500 bp | 500-5000 bp (8 pita) | ||
| 10501ES | Penanda DNA GoldBand DL2000 | 100-2000 bp (6 pita) | ||
| 10504ES | Penanda DNA GoldBand DL5000 | 100-5000 bp (9 pita) | ||
| 10505ES | Penanda DNA GoldBand DL10.000 | 100-10000 bp (10 pita) | ||
| 10511ES | Tangga DNA Skala Penuh GoldBand | 100-12000 bp (20 pita) | ||
| 10512ES | Penanda DNA GoldBand DL15000 | 250-15000 bp (7 pita) |
2.5 Publikasi yang menggunakan Produk Elektroforesis Asam Nukleat (P(artikel)
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, dkk. TFPI adalah reseptor kripta kolon untuk TcdB dari klade 2 hipervirulen C. difficile. Sel. 2022;185(6):980-994. e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010 (IF:41.584)
[2] Huang N, Chen H, Gong H, et al. SeHed, sistem ekspresi gen baru dengan hidrogen peroksida yang ditimbulkan oleh stres properti eliminasi ide dan efek anti-penuaan. Transduksi Sinyal dan Terapi Terarah. 2022, 7, 235. doi: 10.1038/s41392-022-01047-2. (JIKA: 38.1)
[3] Zhang C, Zhou B, Gu F, et al. Penghambatan mikropeptida PACMP menimbulkan efek mematikan sintetis dengan mengurangi CtIP dan poli(ADP-ribosil)asi. mol Sel. 2022;82(7):1297-1312.e8. doi:10.1016/j.molcel.2022.01.020 (IF:(17.970)
[4] Zhu M, DaiX. Penekanan pertumbuhan oleh perubahan tingkat (p)ppGpp merupakan hasil dari alokasi sumber daya dalam Escherichia coli. Asam Nukleat Res. 2019;47(9):4684-4693. doi:10.1093/nar/gkz211 (JIKA:11.147)
[5] Rizwan HM, Zhimin L, Harsonowati W, et al. Identifikasi Patogen Jamur untuk Pengendalian Hama Pascapanen Analisis Jalur Perbandingan Peluruhan Buah Markisa (Passiflora edulis) dan Multi-Omik Mengungkapkan Ungu Lebih Tahan terhadap Patogen daripada Kultivar Kuning. j Fungi (Basel). 2021;7(10):879. Diterbitkan 19 Oktober 2021. doi:10.3390/jof 7100879 (JIKA:5.816)
[6] LiT, Zhou B, Luo Z, dkk. Karakterisasi Struktural dari Nanobody Penetral Dengan Aktivitas Luas Melawan Varian SARS-CoV-2. Front Microbiol. 2022;13:875840. Diterbitkan 2 Juni 2022. doi:10.3389/fmicb.2022.875840 (JIKA:5.640)
[7] Wang T, Ren D, Guo H, dkk. CgSCD1 Sangat Penting untuk Biosintesis Melanin dan Patogenisitas dari Colletotrichum gloeosporioides. patogen. 2020;9(2) :141. diterbitkan 20 Februari 2020. doi:10.3390/pathogens9020141(IF:3.018) :141. Diterbitkan 20 Februari 2020. doi:10.3390/patogen9020141 (IF:3.018)
[8] Lv Y, LiX, Zhang H, Zou F, Shen B. Profil ekspresi CircRNA pada pasien yang rentan dan resisten terhadap deltametrin
pipiens pallens (Diptera: Culicidae). Komp Biokimia Jurnal Fisiol B Biochem Mol Biol. 2022;261:110750. doi:10.1016 /j.cbpb.2022.110750 (JIKA:2.231)
[9] Hu M, DaiX. Penekanan pertumbuhan dengan mengubah (p) ppGpp tingkat hasil dari alokasi sumber daya yang tidak optimal di Escherichia coli[J]. Penelitian asam nukleat, 2019, 47(9): 4684-4693.(IF11.6)
[10] Guo L, Yang W, Huang Q, dkk. Spektrometri massa spesifik selenosistein mengungkapkan selenoprotein yang berbeda pada jaringan dan selenoprotein kandidat[J]. biologi, 2018, 25(11): 1380-1388.e4. (IF6.762)
2.6 Publikasi menggunakan Produk PCR (Sebagian)
[1] Wang Y, Apa Bahasa Indonesia: Z, LiX, dan Bahasa Indonesia. Sitoplasma Penginderaan DNA oleh KU kompleks di dalam berumur Sel T CD4+ sel meningkatkan potensi T sel aktif bahasa inggris Dan terkait penuaan autoimun peradangan. Kekebalan. 2021;54(4):632-647.e9. aku:10.1016/j.imun
ni.2021.02.003(JIKA:31.745)
[2] Yang X, Gao F, Zhang W, dan Bahasa Indonesia. "Bintang" miR-34a Dan Bahasa Indonesia: CXCR4 antagonis berdasarkan nanoplex untuk binerkamu koperasi pengobatan migrasi melawanT metastasis dada kanker. J Kontrol Rilis. 2020;326:615-627. doi:10.1016/j. jconrel.2020.07.029(JIKA:7.727)
[3] QiaoY, Kamu J, Aku R, dan Sebuah Mencicipi Dan Deteksi jarum mikro Tambalan untuk Psoriasis MikroRNA Penanda biologis
Analisa di dalam Interstisial Cairan. Anal Kimia. 2022;94(14):5538-5545. doi:10.1021/acs.analchem.1c04401(JIKA:6.986)
[4] Lin Q, Kamu X, kuning Bahasa Indonesia: Z, dan Bahasa Indonesia. Grafena Berbasis Oksida Penekanan dari Tidak spesifik di dalam Dimediasi Loop Isoter malAmplifikasi Mengaktifkan Sensitif Deteksi dari Siklooksigenase-2 Bahasa Indonesia: di dalam Kolorektal Kanker. Anus Kimia. 2019;91(24):15694-15702. nomor:10.1021/acs.analchem.9b03861(JIKA:6.350)
[5] Lin Q, kuning Z, Kamu X, dan Bahasa Indonesia. Laboratorium di dalam A tabung: Isolasi, ekstraksi, Dan adalahyang lain amplifikasi deteksi dari eksosomal panjang tanpa pengkodean RNA dari lambung kanker. Talanta. 2021;225:122090.
doi:10.1016/j.tta.2021.122090(IF:6.057)
[6] Liu C, Zou G, dan al. 5-formilurasil sebagai A Multifungsional Bangunan Memblokir di dalam Sensor biologis Desain[J]. Angew Kimia Int Ed Inggris. 26 Juli 2018;57(31):9689-9693.（IF 11.992)
[7] Wang M, Zhang S, Zheng G, dan Bahasa Indonesia. Keuntungan Fungsi Mutasiion dari Kartu14 Mengarah ke Spontan Mirip psoriasis Kulit Peradangan melalui Ditingkatkan Keratinosit Respon terhadap Nomor seri IL-17A Kekebalan. 2018;49(1):66-79.e5.
doi:10.1016/j.immuni.2018.05.012(JIKA:19.734)
[8] Zhang Y, ding H, Wang X, dan Bahasa Indonesia. MK2 mempromosikan Tfcp2l1 degradasi melalui β-TrCP ada di mana-mana akuigase ke mengatur mouse batang embrio pembaruan diri sel. Sel Rep. 2021;37(5):109949. doi:10.1016/j.celrep.2021.109949 (JIKA:9.423)
[9] Lin Q, Kamu X, Yang B, dan Bahasa Indonesia. Waktu nyata fluoresensi dimediasi loop isotermal memperkuatasi pengujian untuk cepat Dan peka deteksi dari Streptococcus gallolyticus subsp. galolitakus berhubungan dengan kolorektal kanker[J].
Analitis Dan bioanalitis kimia, 2019, 411(26): 6877-6887.（IF6.35）
[10] Lin Q, Kamu X, kuning Bahasa Indonesia: Z, dan Bahasa Indonesia. Grafena Berbasis Oksida Penekanan dari Tidak spesifik di dalam Dimediasi Loop Isoter malAmplifikasi Mengaktifkan Sensitif Deteksi dari Siklooksigenase-2 Bahasa Indonesia: di dalam Berwarnabahasa inggris Kanker[J]. Analisis kaliber Kimia, 2019.（IF6.35）
Kutipan:
[1] Loeb LA, Jr R. DNA polimerase dan penyakit manusia[J]. Tinjauan Genetika Alam.