Cos'è un anticorpo secondario?
Un anticorpo secondario è un anticorpo che può legarsi a un anticorpo primario. Viene utilizzato principalmente per rilevare la presenza dell'anticorpo primario. L'anticorpo primario si lega specificamente all'antigene e l'anticorpo secondario si lega specificamente all'anticorpo primario. In altre parole, la regione Fc o il frammento Fab dell'anticorpo primario possono agire come un antigene per stimolare il corpo a produrre anticorpi. Vale a dire, l'anticorpo primario è principalmente immunoglobuline di classe IgG, quindi l'anticorpo secondario è un anticorpo anti-IgG.
Il ruolo degli anticorpi secondari
L'anticorpo primario si lega specificamente alla proteina bersaglio e l'anticorpo primario deve essere marcato con una sostanza luminescente o un gruppo cromogenico. Non è possibile vedere a occhio nudo se l'anticorpo primario legamento la proteina. Tuttavia, l'anticorpo primario è relativamente specifico e ciascuno è etichettato a un costo elevato. È comune usare un anticorpo secondario etichettato che può legarsi all'anticorpo primario e ha un'etichetta rilevabile (come un gruppo fluorescente, radioattivo, chemiluminescente o cromogenico). Quindi il design attuale generalmente ha l'anticorpo secondario con un'etichetta rilevabile per rilevare l'anticorpo primario, mentre l'anticorpo primario riconosce il substrato. In questo modo, quando l'anticorpo primario si lega al substrato, può essere rilevato tramite l'anticorpo secondario.
Ad esempio, il principio di luminescenza ECL: nel substrato ECL ci sono H2Lo2 e luminol (e suoi derivati), che emettono fluorescenza sotto l'azione dell'HRP (perossidasi di rafano).
Punti chiave per l'utilizzo di anticorpi secondari
L'anticorpo secondario è un anticorpo prodotto immunizzando i mammiferi (solitamente immunizzando capre, cavalli, asini, muli e porcellini d'India, ecc.) con l'immunoglobulina IgG di un certo sottotipo della specie di anticorpo primario (come conigli, topi), quindi l'anticorpo secondario si lega solo a una specie e a un sottotipo specifici dell'anticorpo primario. Ad esempio, l'anticorpo di pecora anti-topo (anticorpo secondario) si legherà specificamente al monoclonale di topo (anticorpo primario) e non si legherà al policlonale di coniglio o al monoclonale di ratto.
Segni di accoppiamento degli anticorpi secondari
Diversi metodi sperimentali produrranno diversi gruppi di accoppiamento per anticorpi secondari, che sono principalmente enzimi (perossidasi di rafano/HRP e fosfatasi alcalina/AP), gruppi fluorescenti (FITC, rodamina, PE, Dylight, Alexa Fluor, cy3, ecc.), biotina, particelle d'oro, ecc. In genere, gli anticorpi secondari marcati con HRP sono raccomandati per esperimenti come WB, ELISA, IHC, e gli anticorpi secondari marcati con biotina sono raccomandati per IHC, mentre le etichette fluorescenti come Alexa Fluor 488, FITC, PE sono utilizzate per IF, FC, ecc.
Come scegliere l'anticorpo secondario giusto
a. Immunoblotting (WB)
Selezionare un anticorpo secondario marcato con perossidasi di rafano o fosfatasi alcalina per il Western blotting tradizionale; scegliere un anticorpo secondario marcato con il fluoroforo corrispondente per il Western blotting fluorescente.
b.Immunoistochimica (IHC/ICC)
B. Per l'ICC (immunocitochimica), selezionare un anticorpo secondario marcato con biotina.
C. Immunofluorescenza (IHF/ICF)
L'immunoprecipitazione spesso consente la scelta di utilizzare un anticorpo secondario che sia specifico per Fc o Fab. Tali anticorpi secondari possono evitare l'interferenza della catena pesante (peso molecolare 55 kDa) o della catena leggera (peso molecolare 25 kDa).
Informazioni sui prodotti consigliati
| Gruppo di etichette | Numero di prodotto | Nome del prodotto |
| Non contrassegnato | 34850ES | Capra Anti-Coniglio lgG(H+L) |
| 34851ES | Capra Anti-Mosue lgG(H+L) | |
| 34847ES | Anti-IgG umana di asino (H+L) | |
| Gestione delle risorse umane | 33101ES | Perossidasi AffiniPure Capra Anti-Coniglio IgG (H+L) |
| 33201ES | Perossidasi AffiniPure Capra Anti-IgG di Topo (H+L) | |
| 33301ES | Perossidasi AffiniPure Capra Anti-Rat IgG (H+L) | |
| 33401ES | Perossidasi AffiniPure Capra Anti-Cavia IgG(H+L) | |
| 33501ES | Perossidasi di rafano Capra Anti-IgG umana (H+L) | |
| 33701ES | Perossidasi AffiniPure Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) | |
| 33801ES | Perossidasi AffiniPure Rabbit Anti-Sheep IgG (H+L) | |
| 34201ES | Perossidasi AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) | |
| 34101ES | Perossidasi AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) | |
| 34301ES | Perossidasi AffiniPure Asino Anti-Capra IgG (H+L) | |
| 33101ES | Perossidasi AffiniPure Capra Anti-Coniglio IgG (H+L) | |
| Fluorescenza verde | 33106ES | YSFluor™ 488 IgG anti-coniglio di capra (H+L) |
| 33126ES | YSFluor™ 488 IgG anti-umana di capra (H+L) | |
| 33206ES | YSFluor™488 Capra Anti-IgG di Topo (H+L) | |
| 33306ES | YSFluor™ 488 IgG anti-bovina di capra (H+L) | |
| 33406ES | YSFluor™ 488 IgG anti-porcellino d'India di capra (H+L) | |
| 33706ES | YSFluor™488 Anti-Capra IgG di coniglio (H+L) | |
| 33906ES | YSFluor™ 488 Anti-topo IgG di coniglio (H+L) | |
| 34906ES | YSFluor™488 Anti-pecora IgG (H+L) | |
| 34106ES | YSFluor™488 Anti-topo IgG asino (H+L) | |
| 34206ES | YSFluor™488 Asino Anti-Coniglio IgG (H+L) | |
| 34306ES | YSFluor™ 488 Asino Anti-Capra IgG (H+L) | |
| 34406ES | YSFluor™ 488 Asino Anti-Ratto IgG (H+L) | |
| 34506ES | YSFluor™488 Asino Anti-Cavia IgG (H+L) | |
| 34606ES | YSFluor™488 Asino Anti-IgG di pollo (H+L) | |
| 34706ES | YSFluor™488 IgY anti-pollo di coniglio (H+L) | |
| 34806ES | YSFluor™488 Anti-IgG umana di asino (H+L) | |
| 34856ES | FITC AffiniPure Capra Anti-IgG Umana (H+L) | |
| 33107ES | FITC-AffiniPure Capra Anti-Coniglio IgG (H+L) | |
| 33207ES | FITC-AffiniPure Capra Anti-IgG di Topo (H+L) | |
| 33307ES | FITC-AffiniPure Capra Anti-Ratto IgG (H+L) | |
| 33707ES | FITC-AffiniPure Coniglio Anti-Capra IgG (H+L) | |
| 33807ES | FITC-AffiniPure Coniglio Anti-Pecora IgG (H+L) | |
| Rodamina | 33109ES | Rodamina (TRITC) Capra Anti-Coniglio IgG (H+L) |
| 33209ES | Rodamina (TRITC) Capra Anti-IgG di topo (H+L) | |
| 33709ES | Rodamina (TRITC) AffiniPure Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) | |
| 33210ES | Rodamina rossa-X (RRX) Capra Anti-IgG di topo (H+L) | |
| Fluorescenza arancione | 33112ES | YSFluor™594 AffiniPure Capra Anti-Coniglio IgG (H+L) |
| 33212ES | YSFluor™ 594 IgG anti-topo di capra (H+L) | |
| 33222ES | YSFluor™ 594 IgG anti-umana di capra (H+L) | |
| 33412ES | YSFluor™594 IgG anti-porcellino d'India di capra (H+L) | |
| 33312ES | YSFluor™ 594 IgG anti-bovina di capra (H+L) | |
| 33712ES | YSFluor™594 Anti-Capra IgG di coniglio (H+L) | |
| 33812ES | YSFluor™ 594 Coniglio Anti-Pecora IgG (H+L) | |
| 33912ES | YSFluor™594 Anti-topo IgG di coniglio (H+L) | |
| 34712ES | YSFluor™594 IgY anti-pollo di coniglio (H+L) | |
| 34112ES | YSFluor™ 594 Anti-topo IgG asino (H+L) | |
| 34212ES | YSFluor™594 Asino Anti-Coniglio IgG (H+L) | |
| 34312ES | YSFluor™ 594 Asino Anti-Capra IgG (H+L) | |
| 34412ES | YSFluor™ 594 Anti-Ratto IgG (H+L) di asino | |
| 34512ES | YSFluor™594 Asino Anti-Cavia IgG (H+L) | |
| 34612ES | YSFluor™594 Asino Anti-IgG di pollo (H+L) | |
| 34812ES | YSFluor™594 Anti-IgG umana di asino (H+L) | |
| 34912ES | YSFluor™594 Anti-pecora IgG (H+L) | |
| 33208ES | Cy3-AffiniPure Capra Anti-IgG di Topo (H+L) | |
| 33308ES | Cy3-AffiniPure Capra Anti-Ratto IgG (H+L) | |
| 33708ES | Cy3-AffiniPure Coniglio Anti-Capra IgG (H+L) | |
| 33808ES | Cy3-AffiniPure Coniglio Anti-Pecora IgG (H+L) | |
| 34855ES | Cy3-AffiniPure Asino Anti-Capra IgG(H+L) | |
| Fluorescenza rossa | 33113ES | YSFluor™647 Capra Anti-Coniglio IgG (H+L) |
| 33213ES | YSFluor™ 647 IgG anti-topo di capra (H+L) | |
| 33223ES | YSFluor™647 Capra Anti-IgG Umana (H+L) | |
| 33313ES | YSFluor™ 647 Capra Anti-Bovino IgG (H+L) | |
| 33413ES | YSFluor™ 647 IgG anti-porcellino d'India di capra (H+L) | |
| 33713ES | YSFluor™ 647 Anti-Capra IgG di coniglio (H+L) | |
| 33813ES | YSFluor™647 Coniglio Anti-Pecora IgG (H+L) | |
| 33913ES | YSFluor™ 647 Anti-topo IgG di coniglio (H+L) | |
| 34713ES | YSFluor™647 IgY anti-pollo di coniglio (H+L) | |
| 34113ES | YSFluor™ 647 Asino Anti-Mouse IgG (H+L) | |
| 34213ES | YSFluor™ 647 Asino Anti-Coniglio IgG (H+L) | |
| 34413ES | YSFluor™ 647 Asino Anti-Ratto IgG (H+L) | |
| 34813ES | YSFluor™647 Anti-IgG umana di asino (H+L) | |
| 34913ES | YSFluor™647 Asino Anti-Pecora IgG (H+L) |
Riferimenti
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