Introduzione
I kit di analisi del gene reporter della luciferasi, in quanto strumento fondamentale indispensabile nello sviluppo di farmaci, svolgono un ruolo cruciale in processi chiave quali screening ad alto rendimento, valutazione dell'efficacia e convalida del target, grazie alla loro capacità di monitorare l'espressione genica e la trasduzione del segnale in tempo reale. L'applicazione di questa tecnologia ha migliorato significativamente l'efficienza dello screening e della valutazione dei farmaci, accelerando la scoperta e lo sviluppo di nuovi farmaci.
Principio di rilevamento del gene reporter della luciferasi
La tecnologia di rilevamento del gene reporter della luciferasi consente l'analisi quantitativa dell'attività della luciferasi della lucciola catalizzando l'ossidazione della luciferina in ossiluciferina e generando bioluminescenza. Questa tecnologia ha un valore applicativo significativo nei campi della convalida del gene bersaglio del miRNA e della regolazione dell'attività trascrizionale del promotore. Inserendo elementi regolatori del gene bersaglio a monte e a valle del gene della luciferasi per costruire un plasmide reporter della luciferasi, le cellule possono essere trasfettate e sottoposte alla stimolazione o al trattamento corrispondenti. Successivamente, lisando le cellule e misurando l'attività della luciferasi, è possibile valutare i cambiamenti di attività degli elementi regolatori in diverse condizioni di stimolazione, ottenendo così una comprensione più approfondita dei meccanismi regolatori del gene espressione.
Le differenze tra le applicazioni di rilevamento della luciferasi singola e doppia
I saggi del gene reporter sono principalmente divisi in saggi del gene reporter a luciferasi singola e saggi del gene reporter a luciferasi doppia. In applicazioni specifiche, come si può determinare se l'esperimento utilizza un sistema di rilevamento a luciferasi singola o a luciferasi doppia? Diamo un'occhiata alle differenze.
Sistema di analisi del reporter della luciferasi singola
Numero di geni reporter: Un singolo gene reporter della luciferasi della lucciola;
Tipo di trasfezione: Un singolo plasmide del gene reporter, dopo la trasfezione, la selezione del farmaco viene utilizzata per costruire una linea cellulare stabile del gene reporter che esprime la luciferasi;
Processo di rilevamento: Deve essere rilevato solo il segnale della luciferasi della lucciola, funzionamento semplice, periodo di rilevamento breve, adatto per lo screening di farmaci ad alto rendimento;
Analisi dello scenario applicativo: Di solito avviene tramite la costruzione di una linea cellulare monoclonale sovraespressa stabile, poiché il livello di espressione di queste linee cellulari è relativamente stabile e uniforme, senza l'influenza di variazioni sperimentali dovute all'efficienza di trasfezione e alla vitalità cellulare. L'operazione è semplice e poiché viene rilevato solo il segnale della luciferasi della lucciola, l'analisi dei dati è più conveniente. Insieme ai vantaggi del breve tempo di rilevamento, è particolarmente adatto per lo screening di farmaci ad alto rendimento e soddisfa le esigenze di rilevamento di campioni su larga scala.
Sistema di rilevamento del gene reporter a doppia luciferasi
Quantità di geni segnalata: Doppi geni reporter della luciferasi della lucciola e della luciferasi della Renilla;
Tipo di trasfezione: Co-trasfezione di due plasmidi del gene reporter, principalmente tramite trasfezione transitoria;
Processo di rilevamento: È necessario rilevare prima il segnale della lucciola e poi il segnale di Renilla, e il rapporto tra i due (Lucciola/Renilla) viene utilizzato per il calcolo dei dati finali;
Analisi dello scenario applicativo: In genere avviene tramite transfezione transitoria, con la co-transfezione di un plasmide contenente il gene della luciferasi Renilla come riferimento interno, che fornisce un punto di riferimento per l'esperimento, riducendo così l'interferenza di fattori esterni come la vitalità cellulare e l'efficienza della transfezione. Tramite il calcolo del rapporto, è possibile correggere le variazioni nel numero di cellule, nell'efficienza della transfezione e nell'attività cellulare, migliorando l'accuratezza dei risultati sperimentali. È uno strumento importante nei campi della regolazione dell'espressione genica, delle vie di trasduzione del segnale e dello screening dei farmaci.
serie di prodotti
Sììì La serie di prodotti Luciferase Reporter Gene Detection fornisce una soluzione di rilevamento quantitativo comoda ed efficiente. Il design monocomponente semplifica il processo di utilizzo e la combinazione perfetta di elevata sensibilità con un'emivita del segnale super lunga di 5 ore soddisfa le esigenze di rilevamento di screening di farmaci su larga scala. Offriamo tre prodotti: Bio-One Step, Steady-One Step e Bright-One Step, per adattarsi a diversi requisiti di sensibilità e stabilità.
| nome del prodotto | Bio-Un Passo | Costante-Un passo | Luminoso-Un passo |
| Codice prodotto | |||
| Scenari applicativi e Caratteristiche | Questo kit raggiunge un equilibrio relativo tra intensità e stabilità del segnale. Mantiene un'intensità del segnale relativamente alta, mantenendo al contempo l'intensità del segnale relativamente stabile per un certo periodo di tempo. | L'emivita può durare più di 5 ore. Soprattutto nelle prime 2 ore, le variazioni del valore di luminescenza sono minime. È adatto per saggi a produttività ultra elevata o a piastre da 384 pozzetti. | Alta sensibilità e alta intensità del segnale. Adatto per esperimenti che richiedono alta sensibilità. |
| Emivita del segnale | 60 minuti | 5 ore | 30 minuti |
| Caratteristiche operative | Un passo | Un passo | Un passo |
Vantaggi del prodotto
Lunga emivita del segnale: L'emivita del segnale può raggiungere fino a 5 ore, soddisfacendo le esigenze degli esperimenti ad alto rendimento ed evitando differenze di segnale causate dalla differenza di tempo tra il primo e l'ultimo pozzetto dovuta a un gran numero di campioni, garantendo risultati più stabili e affidabili.
Segnale di fluorescenza forte: Il valore del segnale può raggiungere 8 ordini di grandezza, fornendo un'ampia finestra di rilevamento e un solido supporto di dati per lo screening precoce dei farmaci e la valutazione dell'efficacia.
Facile da usare: Il funzionamento in un unico passaggio evita complicate procedure sperimentali. Basta aggiungere il reagente di rilevamento e attendere 5 minuti prima di avviare la macchina per il rilevamento.
Scelte multiple: A seconda dei diversi scenari applicativi, sono disponibili 3 diversi prodotti, che possono essere selezionati in base ai requisiti sperimentali relativi al valore del segnale e alla stabilità del segnale.
Dati del prodotto
01 Confronto delle prestazioni per Yeasen Gene reporter diverso Kit di analisi
La verifica di tre tipi di kit di analisi è stato condotto su linee cellulari che esprimono stabilmente la luciferasi di lucciola e i risultati hanno mostrato che il prodotto Bright-One Step ha valori di segnale più elevati; il prodotto Steady-One Step ha un'emivita del segnale più lunga e segnali più stabili; il prodotto Bio-One Step non solo ha valori di segnale elevati, ma mantiene anche un'emivita del segnale più lunga.
Figura 1. Confronto delle prestazioni per diversi kit di analisi del gene reporter Yeasen
02 Confronto tra il reagente di rilevamento del gene reporter della luciferasi Yeasen Bio-One Step e i prodotti concorrenti
Utilizzando Yeasen Bio-One Step, il competitor P e il competitor V su una linea cellulare che sovraesprime stabilmente la luciferasi di lucciola, i risultati mostrano che il valore del segnale e l'emivita del segnale di Yeasen Bio-One Step sono essenzialmente coerenti con quelli del competitor P e che l'emivita del segnale è superiore a quella del competitor V.
Figura 2. Confronto del reagente di rilevamento del gene reporter della luciferasi Yeasen Bio-One Step con i concorrenti
03 Yeasen Bio-One Step Luciferase Reporter Gene Detection Reagent Test di stabilità al congelamento-scongelamento
Il reagente per la rilevazione del gene reporter della luciferasi Yeasen Bio-One Step è stato sottoposto a ripetuti esperimenti di congelamento-scongelamento e i risultati mostrano che anche dopo 5 cicli di congelamento-scongelamento, le prestazioni del prodotto rimangono stabili senza cambiamenti significativi.
Figura 3.Test di congelamento-scongelamento ripetuto del reagente di rilevamento del gene reporter della luciferasi Yeasen Bio-One Step
Procedura operativa
01 Trasfezione cellulare
Aggiungere direttamente il reagente alla sospensione cellulare, quindi pipettare su e giù 5 volte per garantire una miscelazione completa, attendere 5 minuti per consentire la completa lisi cellulare.
02 Caricamento del campione
Pipettare 100 μL della miscela (reagente di rilevamento + terreno di coltura cellulare) in ciascun pozzetto della piastra di rilevamento.
03 Rilevamento della fluorescenza
Impostare i parametri sul lettore di piastre. Posizionare la piastra di rilevamento nel lettore di piastre, farla vibrare per alcuni secondi, quindi procedere con il rilevamento.
Elenco prodotti
| Categoria di prodotto
| Nome del prodotto | Codice prodotto | Specifiche del prodotto |
| Kit di analisi del gene reporter della luciferasi | 11411ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | |
| 11413ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| 11412ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| Kit di analisi del gene reporter della luciferasi doppia
| 11402ES60/80 | 100T/1000T | |
| 11405ES60/80 | 100T/1000T |