1 Il meccanismo d'azione della blasticidina S
Blasticidina S è un antibiotico nucleosidico estratto da Streptomyces griseochromogenes, che inibisce specificamente la sintesi proteica nelle cellule procariotiche ed eucariotiche interferendo con la formazione di legami peptidici nel ribosoma. Il suo meccanismo d'azione include il blocco dell'idrolisi del peptidil-tRNA indotta dai fattori di rilascio e il potenziamento del legame del tRNA alla grande subunità ribosomiale, inibendo così in una certa misura la formazione di legami peptidici.
La blasticidina S ha una modalità di azione rapida e potente, e concentrazioni di antibiotici molto basse possono portare a una rapida morte cellulare. Non solo ha una significativa inibizione della sintesi proteica nei batteri e negli eucarioti, ma anche attività contro funghi, nematodi e cellule tumorali. La pltocidina S è spesso utilizzata per lo screening di cellule transfettate che trasportano geni bsr o BSD.
2 Applicazione di Blasticidina S
2.1 Colture cellulari e screening
- Cellule di mammiferi: blast S è spesso utilizzato per lo screening di cellule transfettate portatrici di geni bsr o BSD. Questi geni di resistenza, rispettivamente di B. cereus e Aspergillus, sono stati in grado di convertire la murancidina in derivati avirulenti, consentendo così l'uccisione selettiva di cellule senza portare geni di resistenza, con concentrazioni di lavoro di Blasticidina S nelle cellule di mammiferi che vanno da 1 a 50 μg/mL.
| Cella | Geno | Loorganizzazione | Cmezzo di coltura | Concentrazione di Blasticidina S (μg/mL) |
| CiaoLa | Umano | Utero | DMEM | 3-10 |
| HEK293 | Umano | Rene | DMEM | 3-10 |
| B16 | Topo | Melanoma | RPMI | 3-10 |
| PC1.0 | Criceto | Adenocarcinoma | RPMI | 10-30 |
| CHO | Criceto | Ovaio | DMEM | 5-15 |
- Selezione batterica: nella coltura batterica, la concentrazione consigliata di 25-100 µg/mL può causare rapidamente la morte delle cellule prive di geni di resistenza.
L'Escherichia coli è leggermente meno sensibile alla Blasticidina S, ma i trasformanti sono tolleranti alla Blasticidina S e possono essere sottoposti a screening con un terreno LB a basso contenuto di sale (pH 8) in un intervallo di concentrazione di 50-100 μg/mL di Blasticidina S, mentre un pH elevato migliora l'attività della Blasticidina S.
- Cellule vegetali: BSR e BSD sono comunemente utilizzati come marcatori di screening, applicabili anche agli esperimenti di trasferimento genico nelle cellule vegetali.
2.2 Ricerca sulla sintesi proteica
- I campioni di blasticidina sono stati utilizzati per studiare il processo di sintesi proteica a livello di formazione del legame peptidico, in particolare nelle cellule T HEK293 e nelle cellule HEK-D5 dei costrutti TLR-2.
2.3 Proprietà antifungine
- Ha anche una certa attività antimicotica, che può essere utilizzata per la prevenzione e il trattamento del brusone del riso. Il suo effetto battericida è principalmente quello di influenzare la sintesi proteica e può inibire la germinazione delle spore, lo sviluppo delle ife e la formazione delle spore.
2.4 Altre applicazioni
- La blasticidina è stata utilizzata anche per studiare l'effetto inibitorio delle cellule tumorali.
- Agisce anche come agente di selezione per le cellule trasformate contenenti il gene di resistenza bls, bsr o BSD.
3 Procedure sperimentali relative alla blasticidina S (screening di transfettanti stabili nei mammiferi)
1) La blasticidina S viene solitamente utilizzata a una concentrazione di 10 μg/mL. Le cellule vengono transfettate con plasmidi portatori del gene bsr o BSD e incubate in un normale mezzo di crescita contenente blasticidina S per selezionare i transfettanti stabili.
2) A 48 ore dalla trasfezione, passare le cellule in un mezzo fresco contenente una concentrazione appropriata di Blasticidina S (Nota: gli antibiotici funzionano meglio quando le cellule sono in una fase di divisione attiva. L'efficacia degli antibiotici diminuisce se la densità cellulare è troppo elevata. Quando si dividono le cellule, la confluenza non deve superare il 25%).
3) Ogni 3-4 giorni, rimuovere il terreno di coltura esaurito e aggiungere terreno fresco contenente l'antibiotico.
4) Dopo 7 giorni, controllare la formazione di colonie cellulari. A seconda del tipo di cellula ospite e dell'efficienza di transfezione/selezione, la formazione di colonie potrebbe richiedere un'ulteriore settimana o più.
5) Trasferire 5-10 cloni resistenti in piastre di coltura cellulare da 35 mm e mantenerli in terreno selettivo per 7 giorni. Successivamente, eseguire saggi di citotossicità per i test.
4 Raccomandazione del prodotto
La Yeasen Biotech Blasticidina S (60218ES) è disponibile in due forme: polvere (1 g) e soluzione (10 mg/mL).
| Nome del prodotto | Gatto# | Specificazione | Aspetto |
| Blasticidina S Numero CAS: 3513-03-9 | 60218ES10 | 10 mg | Soluzione (10 mg/mL, in HEPES) Tampone, pH 7,5) |
| 60218ES50 | 5×10 mg | ||
| 60218ES60 | 10×10 mg | ||
| 60218ES80 | 1 G | Polvere (preparare una soluzione madre di 5-10 mg/mL con acqua sterile o tampone quando si utilizza) |
5 Articoli pubblicati con i nostri reagenti
[1] Mo J, Tan K, Dong Y, Lu W, Liu F, Mei Y, Huang H, Zhao K, Lv Z, Ye Y, Tang Y. Targeting terapeutico del driver oncogenico EWSR1::FLI1 nel sarcoma di Ewing attraverso l'inibizione del complesso FACT. Oncogene. 2023 gennaio;42(1):11-25. doi: 10.1038/s41388-022-02533-1. Epub 2022 novembre 10. PMID: 36357572. (SE:8.0)
[2] Tan K, Mo J, Li M, Dong Y, Han Y, Sun X, Ma Y, Zhu K, Wu W, Lu L, Liu J, Zhao K, Zhang L, Tang Y, Lv Z. Il ciclo di feedback positivo SMAD9-MYCN rappresenta una dipendenza unica per il neuroblastoma amplificato da MYCN. J Exp Clin Cancer Res. 2022 20 dicembre;41(1):352. doi: 10.1186/s13046-022-02563-3. PMID: 36539767; PMCID: PMC9764568.(SE:11.3)
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| Blasticidina S (Blasticidina) | 60218ES10/60 | 10/10×10mg |
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