Introduzione al prodotto

La collagenasi è una classe di endonucleasi in grado di riconoscere specificamente la sequenza Pro-X-Gly-Pro (presente frequentemente nel collagene e raramente presente in altre proteine) e di scindere il legame peptidico tra l'amminoacido neutro (X) e la glicina (Gly) in questa sequenza, e di idrolizzare il collagene nel tessuto connettivo.

Molte proteasi sono in grado di idrolizzare peptidi di collagene a singolo filamento e denaturati, ma la collagenasi è l'unica proteasi in grado di degradare le fibre di collagene naturale con una struttura superavvolta a tre filamenti, ed è ampiamente presente nei tessuti connettivi; la più potente delle quali è la collagenasi "grezza" secreta dal batterio anaerobico Clostridium histolyticum.

La collagenasi Yeasen deriva dal Clostridium histolyticum, un estratto enzimatico "grossolano" che non solo contiene collagenasi in grado di degradare il collagene naturale e le fibre reticolari, ma contiene anche altre proteasi come polisaccaridasi, lipasi, ecc., che possono idrolizzare efficacemente altre proteine, polisaccaridi e lipidi nella matrice extracellulare del tessuto connettivo e del tessuto epiteliale, quindi è più adatto alla digestione dei tessuti.

Attualmente, la collagenasi batterica in commercio è suddivisa principalmente in cinque tipi, in base alla differenza nell'attività della collagenasi: collagenasi di tipo I, tipo II, tipo III, tipo IV e tipo V.

Scelta della collagenasi

Nome del prodotto	Aspetto	Attività enzimatica	Ambito di applicazione
Tipo I Collagenasi)	Polvere cristallina marrone o marrone chiaro	≥250 U/mg solido	Contiene attività (collagenasi, caseinasi, clostridi e tripsina) per l'isolamento delle cellule epiteliali, polmonari, adipose e del tessuto surrenale.
Tipo II Collagenasi)	Polvere cristallina marrone o marrone chiaro	≥125 U/mg solido	Contiene più attività clostridasica ed è adatto per l'isolamento di cellule tissutali di fegato, ossa, tiroide, cuore e ghiandole salivari
Tipo III Collagenasi)	Polvere cristallina marrone o marrone chiaro	≥100 U/mg solido	Contiene una bassa attività proteolitica, che è efficace per la parte di giunzione del tessuto digestivo, ed è spesso utilizzata per la dissociazione delle cellule dei tessuti dei mammiferi
Tipo IV Collagenasi)	Polvere cristallina marrone o marrone chiaro	≥125 CDU/mg solido*	Contiene una bassa attività di tripsina ed è comunemente utilizzato nella preparazione delle cellule per l'integrità degli isolotti e dei recettori
Tipo V Collagenasi)	Polvere cristallina marrone o marrone chiaro	≥125 CDU/mg solido*	Contiene almeno 7 componenti proteasici, che possono essere utilizzati per l'isolamento del tessuto delle isole pancreatiche e la separazione del tessuto connettivo in singole cellule

*CDU = unità di digestione del collagene

Caratteristiche del prodotto

1. Elevata efficienza di digestione: l'estratto enzimatico grezzo di Clostridium histolyticum presenta un'elevata efficienza di digestione dei tessuti.
2. Dipendente dagli attivatori: la collagenasi deve fare affidamento sull'attività di enzimi attivatori come cationi bivalenti come Ca²⁺e Zn²⁺.
3. Influenzato dagli inibitori: gli inibitori della collagenasi includono EDTA, EGTA, ecc.; il secondo sono gli ioni dei metalli pesanti (Hg²⁺, Piombo²⁺, CD²⁺); Esistono anche alcuni agenti chimici come la cisteina, l'istidina, il DTT, il 2-mercaptoetanolo, l'o-fenantrolina, ecc., che hanno effetti inibitori sulla collagenasi.
4. Forte resistenza alle interferenze: il collagene non verrà influenzato dal siero utilizzato per coltivare le cellule.

Precauzioni per l'uso

1. Utilizzo: sciogliere in soluzioni saline bilanciate di Hank, Earle o altre, la concentrazione di lavoro consigliata è 0,05% ~0,5% (p/v)
2. Temperatura di conservazione: 2-8°C
3. Suggerimenti per l'uso:

(1) Per lo studio della struttura e della biosintesi del collagene, vengono spesso utilizzate preparazioni di collagenasi ad elevata purezza e non vengono utilizzate altre attività proteolitiche.

(2) Per la dissociazione dei tessuti vengono spesso utilizzate preparazioni di collagenasi grezza, come elastasi, tripsina o papaina.

Domande frequenti

1. Cattiva digestione durante l'esperimento

(1) Se è causato da una debole attività enzimatica o da ioni calcio insufficienti, la collagenasi deve essere conservata a bassa temperatura e in condizioni asciutte e la soluzione di collagenasi deve essere congelata dopo l'aliquotazione

(2) Se è causato da ioni calcio insufficienti, la concentrazione di ioni calcio nella soluzione di collagenasi dovrebbe essere 5 mM

2. La morte cellulare avviene durante l'uso

(1) Se c'è un eccesso di proteasi, il tempo di contatto della proteasi deve essere ridotto o deve essere aggiunto albumina o siero inattivato

(2) Se il pH cambia, si dovrebbe usare un tampone (ad esempio, HBSS); controllare e regolare il pH frequentemente

(3) Se l'ossigeno è insufficiente, la soluzione digestiva deve essere ventilata con aria sterile

3. Le cellule sono state danneggiate durante l'esperimento

Se è causato da troppa proteasi, la quantità di proteasi deve essere ridotta o deve essere aggiunto albumina o siero inattivato

Ordinazione

Numero di catalogo	Nome del prodotto	Misurare
40507ES60	Collagenasi I	100 mg, 1 g
40508ES60	Collagenasi II	100 mg, 1 g
40509ES60	Collagenasi III	100 mg
40510ES60	Collagenasi IV	100 mg, 1 g
40511ES60	Collagenasi V	100 mg

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