Introduzione al prodotto
La collagenasi è una classe di endonucleasi in grado di riconoscere specificamente la sequenza Pro-X-Gly-Pro (presente frequentemente nel collagene e raramente presente in altre proteine) e di scindere il legame peptidico tra l'amminoacido neutro (X) e la glicina (Gly) in questa sequenza, e di idrolizzare il collagene nel tessuto connettivo.
Molte proteasi sono in grado di idrolizzare peptidi di collagene a singolo filamento e denaturati, ma la collagenasi è l'unica proteasi in grado di degradare le fibre di collagene naturale con una struttura superavvolta a tre filamenti, ed è ampiamente presente nei tessuti connettivi; la più potente delle quali è la collagenasi "grezza" secreta dal batterio anaerobico Clostridium histolyticum.
La collagenasi Yeasen deriva dal Clostridium histolyticum, un estratto enzimatico "grossolano" che non solo contiene collagenasi in grado di degradare il collagene naturale e le fibre reticolari, ma contiene anche altre proteasi come polisaccaridasi, lipasi, ecc., che possono idrolizzare efficacemente altre proteine, polisaccaridi e lipidi nella matrice extracellulare del tessuto connettivo e del tessuto epiteliale, quindi è più adatto alla digestione dei tessuti.
Attualmente, la collagenasi batterica in commercio è suddivisa principalmente in cinque tipi, in base alla differenza nell'attività della collagenasi: collagenasi di tipo I, tipo II, tipo III, tipo IV e tipo V.
Scelta della collagenasi
Nome del prodotto | Aspetto | Attività enzimatica | Ambito di applicazione |
Tipo I Collagenasi) | Polvere cristallina marrone o marrone chiaro | ≥250 U/mg solido | Contiene attività (collagenasi, caseinasi, clostridi e tripsina) per l'isolamento delle cellule epiteliali, polmonari, adipose e del tessuto surrenale. |
Tipo II Collagenasi) | Polvere cristallina marrone o marrone chiaro | ≥125 U/mg solido | Contiene più attività clostridasica ed è adatto per l'isolamento di cellule tissutali di fegato, ossa, tiroide, cuore e ghiandole salivari |
Tipo III Collagenasi) | Polvere cristallina marrone o marrone chiaro | ≥100 U/mg solido | Contiene una bassa attività proteolitica, che è efficace per la parte di giunzione del tessuto digestivo, ed è spesso utilizzata per la dissociazione delle cellule dei tessuti dei mammiferi |
Tipo IV Collagenasi) | Polvere cristallina marrone o marrone chiaro | ≥125 CDU/mg solido* | Contiene una bassa attività di tripsina ed è comunemente utilizzato nella preparazione delle cellule per l'integrità degli isolotti e dei recettori |
Tipo V Collagenasi) | Polvere cristallina marrone o marrone chiaro | ≥125 CDU/mg solido* | Contiene almeno 7 componenti proteasici, che possono essere utilizzati per l'isolamento del tessuto delle isole pancreatiche e la separazione del tessuto connettivo in singole cellule |
*CDU = unità di digestione del collagene
Caratteristiche del prodotto
- Elevata efficienza di digestione: l'estratto enzimatico grezzo di Clostridium histolyticum presenta un'elevata efficienza di digestione dei tessuti.
- Dipendente dagli attivatori: la collagenasi deve fare affidamento sull'attività di enzimi attivatori come cationi bivalenti come Ca2+e Zn2+.
- Influenzato dagli inibitori: gli inibitori della collagenasi includono EDTA, EGTA, ecc.; il secondo sono gli ioni dei metalli pesanti (Hg2+, Piombo2+, CD2+); Esistono anche alcuni agenti chimici come la cisteina, l'istidina, il DTT, il 2-mercaptoetanolo, l'o-fenantrolina, ecc., che hanno effetti inibitori sulla collagenasi.
- Forte resistenza alle interferenze: il collagene non verrà influenzato dal siero utilizzato per coltivare le cellule.
Precauzioni per l'uso
- Utilizzo: sciogliere in soluzioni saline bilanciate di Hank, Earle o altre, la concentrazione di lavoro consigliata è 0,05% ~0,5% (p/v)
- Temperatura di conservazione: 2-8°C
- Suggerimenti per l'uso:
(1) Per lo studio della struttura e della biosintesi del collagene, vengono spesso utilizzate preparazioni di collagenasi ad elevata purezza e non vengono utilizzate altre attività proteolitiche.
(2) Per la dissociazione dei tessuti vengono spesso utilizzate preparazioni di collagenasi grezza, come elastasi, tripsina o papaina.
Domande frequenti
- Cattiva digestione durante l'esperimento
(1) Se è causato da una debole attività enzimatica o da ioni calcio insufficienti, la collagenasi deve essere conservata a bassa temperatura e in condizioni asciutte e la soluzione di collagenasi deve essere congelata dopo l'aliquotazione
(2) Se è causato da ioni calcio insufficienti, la concentrazione di ioni calcio nella soluzione di collagenasi dovrebbe essere 5 mM
- La morte cellulare avviene durante l'uso
(1) Se c'è un eccesso di proteasi, il tempo di contatto della proteasi deve essere ridotto o deve essere aggiunto albumina o siero inattivato
(2) Se il pH cambia, si dovrebbe usare un tampone (ad esempio, HBSS); controllare e regolare il pH frequentemente
(3) Se l'ossigeno è insufficiente, la soluzione digestiva deve essere ventilata con aria sterile
- Le cellule sono state danneggiate durante l'esperimento
Se è causato da troppa proteasi, la quantità di proteasi deve essere ridotta o deve essere aggiunto albumina o siero inattivato
Ordinazione
Numero di catalogo | Nome del prodotto | Misurare |
40507ES60 | Collagenasi I | 100 mg, 1 g |
40508ES60 | Collagenasi II | 100 mg, 1 g |
40509ES60 | Collagenasi III | 100 mg |
40510ES60 | Collagenasi IV | 100 mg, 1 g |
40511ES60 | Collagenasi V | 100 mg |
Raccomandazioni di prodotti correlati
Numero di catalogo | Nome del prodotto | Misurare |
40123ES60 | PerfCel™l Tripsina-EDTA (0,25%), Rosso fenolo | 100 ml |
40124ES60 | PerfCell™ Tripsina senza EDTA (0.25%), senza rosso fenolo | 100 ml |
40126ES60 | PerfCell™ Tripsina (0,25%), rosso fenolo | 100 ml |
40127ES60 | PerfCell™ Tripsina-EDTA (0,25%), Rosso fenolo | 100 ml |
40101ES25 | Tripsina 1:250 (polvere) | 25 grammi |
40512ES10/60 | PerfCell™ Tripsina ricombinante (polvere) | 10 mg/100 mg |
20416ES60 | Tripsina ricombinante (MS-SAFE) | 100 microgrammi |
40134ES60 | PerfCell Tryzyme™Express | 100 ml |
40135ES60 | PerfCell Tryzyme™Express | 100 ml |
40506ES60 | ACCURATEZZA | 100 ml |
40104ES60/80 | Dispersione II | 100 mg/1 g |