--Il kit di analisi TUNEL di Yeasen mostra una fluorescenza più bella
Il legame della fluoresceina-dUTP al DNA intaccato dalla TdT transferasi è uno dei metodi più comuni per rilevare l'apoptosi, ad esempio l'In Situ Cell Death Kit di Roche si basa su questo principio. L'attività della TdT transferasi nel prodotto influisce direttamente sull'efficienza dell'etichettatura. Yeasen Biologicals, basata sulla produzione di enzimi, si impegna a sviluppare prodotti di alta qualità basati sugli enzimi e ha lanciato tre saggi Tunel marcati con fluoresceina (Alexa Fluor 640, Alexa Fluor 488 e FITC) per soddisfare i requisiti di alta qualità dei nostri clienti.
Attualmente, più di 120 gruppi di ricerca utilizzano questo prodotto e hanno pubblicato numerosi articoli in inglese su riviste autorevoli, come Theranostics ed EMBO Molecular Medicine.
Meccanismo di rilevamento
Nella fase avanzata dell'apoptosi, le rotture del doppio filamento o del singolo filamento del DNA cromosomico producono un gran numero di estremità 3-OH appiccicose e, sotto l'azione del trasferimento terminale del desossiribonucleotide (TdT), il dUTP marcato con fluoresceina/enzima si lega all'estremità 3-terminale del DNA, cosicché il rilevamento dell'apoptosi può essere effettuato tramite il rilevamento della fluorescenza, che viene definita etichettatura dell'estremità nick mediata dalla desossiribonucleotide terminale transferasi. Questo metodo è chiamato etichettatura dell'estremità nick mediata dalla desossiribonucleotidil transferasi (TUNEL) e il principio è illustrato nella Figura 1.
Figura 1: Diagramma schematico dell'etichettatura delle estremità nick mediata dalla transferasi terminale-desossinucleotidil (TUNEL)
Caratteristiche del prodotto
- Ampia gamma di applicazioni
Può essere utilizzato per sezioni di tessuto incluse in paraffina, sezioni di tessuto congelate, cellule coltivate e cellule isolate dai tessuti.
- Elevata sensibilità di rilevamento
È possibile rilevare una quantità molto piccola di cellule apoptotiche.
- Bassa interferenza di fondo
Elevato rapporto segnale/rumore.
- Versatilità di osservazione
Osservazione al microscopio a fluorescenza, rilevamento del flusso passante.
Presentazione dei dati
1、Test di Tunel sui preadipociti del topo (3T3-L)
Figura 2: Rilevamento dell'apoptosi dei preadipociti 3T3-L del topo. La prima riga rappresenta il controllo negativo e la seconda riga rappresenta il controllo positivo. Reagente di rilevamento: Cat. n. 40306 Kit di rilevamento dell'apoptosi TUNEL (FITC)
2、Rilevamento Tunel di campioni di sezioni di paraffina
Figura 3: LY3009120 da solo o in combinazione con Vemurafenib e Obatoclax ha ritardato efficacemente il cancro alla tiroide in un modello di tumore sottoposto a trapianto sottocutaneo. IF=8,8. Tipo di campione: tessuto tumorale incluso in paraffina (prelevato da topi nudi). Reagente di rilevamento: Cat No. 40307 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 488).
3、Rilevamento del tunnel di celle striscianti
Figura 4: Effetto del solfato di zinco sull'apoptosi delle cellule endoteliali in diversi sottogruppi. Tipo di campione: HUVEC (cellule endoteliali della vena ombelicale umana). Reagente di rilevamento: Cat. n. 40308 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 640)
4、Citometria a flusso per rilevare l'apoptosi
Figura 5: Il trattamento con PA può ridurre efficacemente l'insorgenza di apoptosi durante la riprogrammazione. IF=3,7. Tipo di campione: cellule iPS. Reagente di rilevamento: Cat. n. 40307 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 488).
Citazione letteraria
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Domande frequenti
Q: Comparsa di marcature fluorescenti non specifiche?
1) I tessuti/le cellule stessi hanno alti livelli di attività nucleasica o polimerasica, che può facilmente portare alla comparsa di marcature fluorescenti non specifiche, come le cellule muscolari lisce. La soluzione è quella di fissare le cellule o i tessuti immediatamente dopo averli assunti e di fissarli a sufficienza per impedire a questi enzimi di causare falsi positivi.
2) L'uso di fissativi inappropriati, come alcuni fissativi acidi, porta a falsi positivi. Si raccomanda un fissativo di paraformaldeide neutra al 4% appena preparato.
3) La fluorescenza non specifica può verificarsi anche quando il tempo di reazione del test TUNEL è troppo lungo e la superficie cellulare o tissutale non può essere mantenuta umida. Prestare attenzione a controllare il tempo di reazione e assicurarsi che la soluzione di reazione del test TUNEL copra bene il campione.
Q: Lo sfondo di fluorescenza è molto elevato?
1) Le cellule che si dividono e proliferano ad alta velocità, con alti livelli di trascrizione, a volte presentano anche rotture del DNA nel nucleo.
2) L'esposizione prolungata alla luce di eccitazione porta a falsi positivi.
Q: Bassa efficienza di etichettatura?
1) La fissazione con etanolo o metanolo comporta una bassa efficienza di marcatura.
2) Il tempo di fissazione è troppo lungo, con conseguente grado di reticolazione troppo elevato. Si consiglia di ridurre il tempo di fissazione.
3) La sezione del tessuto è troppo spessa, il che rende insoddisfacente l'effetto di fissazione; è meglio controllare entro 10 μm.
(4) Spegnimento della fluorescenza: la fluorescenza verrà gravemente spenta in 10 minuti di luce normale. La soluzione è quella di evitare il funzionamento della luce.
Dettagli del prodotto
| Nome del prodotto | Articolo n. | Specificazione |
| Kit di rilevamento dell'apoptosi Annexin V-FITC/7-AAD | 40311ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40302ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit di rilevamento dell'apoptosi Annexin V-PE/7-AAD | 40310ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40303ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit di rilevamento dell'apoptosi Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD | 40313ES60 | 100T |
| 40305ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40304ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit di rilevamento dell'apoptosi Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD | 40312ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40306ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40307ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40308ES20/50/60 | 20T/50T/100T |