Rilevamento, prevenzione e rimozione del micoplasma: tutto in un unico passaggio!
Micoplasma
Il micoplasma, noto anche come micoplasma, è il procariote più piccolo e semplice scoperto fino ad oggi, con un diametro da 0,1 a 0,3 μm. Può passare attraverso i filtri e mostra un elevato pleomorfismo, apparendo in varie forme come sferica, a forma di bastoncino, filamentosa e ramificata. Nei laboratori e nella produzione biofarmaceutica, le colture cellulari sono soggette a contaminazione da micoplasma. Secondo la letteratura, l'incidenza della contaminazione da micoplasma nelle linee cellulari conservate è di circa il 15%-35% e nell'industria biofarmaceutica varia dallo 0,44% al 6,70% [1].
Figura 1: Morfologia del Mycoplasma
Impatto della contaminazione da micoplasma
La contaminazione batterica e fungina è relativamente facile da rilevare, prevenire e rimuovere, ma la contaminazione da micoplasma è difficile da notare. Anche a densità di crescita pari a 10^7-10^9 CFU/ml, potrebbero non esserci segni evidenti di contaminazione (come torbidità o variazioni di pH). La contaminazione da micoplasma può portare a vari cambiamenti nelle cellule (vedere Figura 2).
Figura 2: Cambiamenti negli stati cellulari dopo la contaminazione da micoplasma
Scenari applicativi per il rilevamento del micoplasma
Fonti tipiche di contaminazione da micoplasma
- Contaminazione incrociata tra cellule;
- Contaminazione dell'ambiente di lavoro o delle apparecchiature sperimentali;
- Scarsa tecnica asettica da parte dello sperimentatore;
- Contaminazione dei terreni di coltura o di altri reagenti;
- Contaminazione del tessuto o dell'organo originale utilizzato per la preparazione delle cellule.
Cosa fare quando le colture cellulari incontrano contaminazione da micoplasma
Figura 3: Soluzione totale per la contaminazione da micoplasma
Soluzione tre in uno alla contaminazione da micoplasma nelle cellule
1. Rilevamento del micoplasma
Rilevamento isotermico del micoplasma in un unico passaggio:
Il reagente di rilevamento isotermico del micoplasma in un unico passaggio di Yeasen utilizza una tecnologia di amplificazione isotermica unica, offrendo una discriminazione cromatica più forte, dal blu-viola (negativo) all'azzurro cielo (positivo), rendendo più semplice l'identificazione visiva. Include componenti anti-contaminazione per eliminare i falsi positivi.
Figura 4: Processo operativo di rilevamento del micoplasma in un unico passaggio
Rilevamento del micoplasma basato sulla PCR:
Il metodo di rilevamento del micoplasma tramite PCR di Yeasen differisce dalla PCR convenzionale in un unico passaggio perché utilizza tre coppie di primer anziché una, prendendo di mira le regioni conservate 16S e 23S del micoplasma per l'amplificazione PCR nidificata. Ciò migliora significativamente la sensibilità riducendo al contempo la non specificità, rilevando anche una sola copia di micoplasma.
Figura 5: Immagine di elettroforesi su gel dell'amplificazione PCR di campioni con diverse concentrazioni di micoplasma
Figura 6: Immagine di elettroforesi su gel dell'amplificazione PCR di campioni con diverse concentrazioni di micoplasma
Tabella 1: Tipi di micoplasma rilevabili dal reagente di rilevamento isotermico del micoplasma in un unico passaggio di Yeasen
Nota: la sezione blu indica i tipi di micoplasma rilevabili sia con il rilevamento isotermico in un unico passaggio sia con il metodo PCR.
2. Reagente di eliminazione del micoplasma MycAway (1000×)
MycAway Mycoplasma Elimination Reagent (1000×) è una formulazione mista che elimina efficacemente il micoplasma inibendo la sintesi del DNA e delle proteine essenziali necessarie per la crescita del micoplasma, senza danneggiare le cellule. Recupera al massimo le tue cellule e riduce le perdite dovute alla contaminazione da micoplasma.
Figura 7: Dimostrazione dell'effetto di eliminazione cellulare
Caratteristiche del reagente di eliminazione del micoplasma:
- Bassa tossicità: Citotossicità minima, non influenza i successivi esperimenti cellulari come test di vitalità cellulare e trasfezione;
- Alta stabilità: Può essere conservato a -20°C per lunghi periodi mantenendo l'efficacia;
- Facile da usare: Aggiungere semplicemente il prodotto al terreno di coltura contaminato dal micoplasma e incubare;
- Azione rapida: Risultati visibili in appena 3 giorni;
- Ampio spettro: Efficace contro la maggior parte dei tipi di micoplasmi da laboratorio.
Figura 8: Diagramma del test di citotossicità del reagente di eliminazione del micoplasma
3. Prevenzione del micoplasma
Prodotto Informazioni
| categoria | Nome del prodotto | Numero di gatto. | Specifiche |
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Rilevamento | MycAway™ - Kit di rilevamento del micoplasma in un unico passaggio a colori | 40612ES25/60 | 25/100 grammi |
| Kit di rilevamento qPCR in tempo reale MycAway™ Mycoplasma | 40618ES25/60 | 25/100 grammi | |
| 40601ES10/20 | 10/20 saggi | ||
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Rimozione | Spray MycAway™ (pronto all'uso) | 40605ES02/03 | 1/2×500 ml |
| Trattamento MycAway™ (1000×)-Reagente di eliminazione del micoplasma | 40607ES03/08 | 1/5×1 ml | |
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Prevenzione | MycAway™Prophylactic (2000×)-Reagente di prevenzione del micoplasma | 40608ES03/08 | 1/5×1 ml |
| 40609ES60 | 100 ml | ||
| 40610ES60 | 100 ml |