Quando si utilizzano enzimi tradizionali ad alta fedeltà per la PCR, è inevitabile imbattersi in alcuni problemi spinosi. Ad esempio, la fedeltà potrebbe non essere sufficiente, portando a mutazioni o delezioni nelle basi target anche dopo il sequenziamento dei frammenti amplificati. Anche il tempo di amplificazione è relativamente lungo; a volte, amplificare un frammento da 5 kb può richiedere quasi 2 ore. Ora, XiaoYi introduce una PCR rapida ad alta fedeltà per risolvere i tuoi problemi! -- Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (premiscela PCR ultraveloce e ad alta fedeltà).
IL 2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (con colorante) contiene un indicatore di elettroforesi pre-aggiunto, che consente di utilizzare direttamente i prodotti PCR per l'elettroforesi. I prodotti amplificati hanno estremità smussate. Questa miscela enzimatica ad alta fedeltà offre i vantaggi di essere veloce, semplice, altamente sensibile, fortemente specifica e stabile. Nel sistema di reazione, è necessario aggiungere solo primer e template. Inoltre, il prodotto contiene anche uno specifico agente protettivo, che assicura che la premiscela PCR ad alta fedeltà mantenga un'attività stabile anche dopo ripetuti congelamenti e scongelamenti.
Caratteristiche del prodotto
- Alto Fedeltà: Basso disallineamento valutare, con UN base disallineamento rapporto Di 231/300.000 In alto GC incline alle mutazioni sequenze;
- Veloce Amplificazione Velocità: Estensione valutare COME veloce COME 5 secondi per chicco di caffè;
- Largo Applicabilità: Capace Di coprente geni con 20-80% GC contenuto, tollera topo lisati E 20% sangue;
- Bene Stabilità: Potere Essere immagazzinato A 37°C per 7 giorni senza che colpisce prodotto prestazione;
- Veloce E Conveniente: Semplicemente aggiungere primer E modello per amplificazione, viene con caricamento tintura per diretto elettroforesi.
Dimostrazione delle prestazioni del prodotto
Alta fedeltà, basso tasso di discordanza
Utilizzando i genomi di specie diverse come modelli, sono stati selezionati per l'amplificazione sei frammenti ricchi di GC che sono altamente inclini a mutazioni/perdite di basi. I rispettivi prodotti PCR sono stati clonati in vettori e 100 singoli cloni per ogni sequenza sono stati selezionati per il sequenziamento per confermare le occorrenze di incongruenze/mutazioni di basi. I risultati hanno mostrato che il master mix PCR rapido ad alta fedeltà (10164ES) aveva un tasso superiore di incongruenze/mutazioni di basi rispetto ai reagenti di marca nazionali e internazionali.
Il tempo di estensione può arrivare fino a 5 secondi/kb
Utilizzando il premix enzimatico rapido ad alta fedeltà (10164ES) e il Prodotto T, frammenti di diversa lunghezza (0,4-10 kb) sono stati amplificati da 100 ng di stampo di DNA genomico umano a una velocità di estensione di 5 sec/kb, con un tempo di estensione richiesto di 5 sec/kb. I risultati hanno mostrato che il premix enzimatico rapido ad alta fedeltà (10164ES) può amplificare frammenti entro 10 kb a una velocità di estensione di 5 sec/kb.
Può amplificare frammenti genici con diverso contenuto di GC
Utilizzo del premix enzimatico rapido ad alta fedeltà (10164ES) per amplificare frammenti genici con contenuto di GC pari al 23-76% da modelli di DNA genomico umano, con tempo di estensione impostato a 5 sec/kb. I risultati hanno mostrato che il prodotto ha una buona specificità di amplificazione ed è in grado di amplificare frammenti con diversi contenuti di GC.
In grado di amplificare frammenti genici con contenuto GC variabile
Utilizzo del premiscelato enzimatico rapido ad alta fedeltà (10164ES) per amplificare frammenti di lunghezze variabili da campioni diversi, con un tempo di estensione impostato su 5-10 secondi per kilobase. I risultati indicano che questo prodotto mostra un'eccellente specificità di amplificazione ed è compatibile con l'amplificazione di diversi frammenti da vari modelli.
Nota: 1. DNA genomico di topo 1 kb; 2. DNA genomico di topo 2 kb; 3. DNA genomico di topo 6 kb; 4. DNA genomico di mais 1 kb; 5. DNA genomico di riso 2 kb-A; 6. DNA genomico di riso 2 kb-B; 7. cDNA umano a 293 cellule 1 kb; 8. cDNA umano a 293 cellule 2 kb; 9. cDNA umano a 293 cellule 3 kb; 10. cDNA umano a 293 cellule 12 kb; 11. Brodo di Escherichia coli 8 kb; 12. Brodo di Escherichia coli 16 kb; 13. DNA genomico di riso 10 kb-A; 14. DNA genomico di riso 10 kb-B; 15. DNA genomico di riso 10 kb-C; 16. DNA genomico del riso 20 kb-A; 17. DNA genomico del riso 20 kb-B; 18. Amplificazione diretta del sangue umano 3 kb.
Elevato tasso di rilevamento dell'amplificazione del modello in diverse specie
Utilizzando il premix enzimatico rapido ad alta fedeltà (10164ES), sono stati amplificati diversi frammenti di contenuto GC che vanno da 0,5 a 10 kb in Arabidopsis, colza e patata, con un tempo di estensione di 5 sec/kb. I risultati hanno mostrato che il premix enzimatico rapido ad alta fedeltà (10164ES) può garantire un'amplificazione di successo.
Utilizzando il premiscelato enzimatico rapido ad alta fedeltà (10164ES), sono state amplificate sequenze casuali (selezionate casualmente) da Arabidopsis, colza, moscerini della frutta, Caenorhabditis elegans e pesce zebra, con dimensioni dei frammenti comprese tra 0,5 e 10 kb e che coprono il 20-80% del contenuto di GC. Il tempo di estensione è stato impostato a 5 sec/kb. I risultati hanno mostrato che il premiscelato enzimatico rapido ad alta fedeltà (10164ES) ha un elevato tasso di rilevamento.
Buona stabilità
Utilizzando il premiscelato enzimatico rapido ad alta fedeltà (10164ES) che è stato accelerato termicamente e conservato a 37℃ per 3 giorni e 7 giorni, rispettivamente, per amplificare frammenti di DNA da 3 kb e 5 kb da 100 ng di DNA genomico umano, con un tempo di estensione impostato a 5 sec/kb. I risultati mostrano che il prodotto ha una buona stabilità.
Feedback sulla prova del cliente
Animale DNA-g-120bp-50%GC
Valutazione del cliente: il processo PCR è veloce, le bande sono appropriate e possono essere caricate direttamente nell'elettroforesi su gel di agarosio. Le bande del marchio N sono distorte verso l'alto, il che potrebbe essere dovuto all'influenza del suo stesso tampone e, poiché non è stato aggiunto alcun tampone di caricamento, questo prodotto può sostituire l'enzima ad alta fedeltà nel mio attuale protocollo sperimentale.
Pianta cDNA-729bp-45,13%GC
Valutazione del cliente: Rispetto al marchio T, le bande di clonazione sono più chiare e uniformi e l'intero processo PCR è più veloce. Non c'è bisogno di aggiungere colorante extra quando si esegue il gel, il che è molto comodo e fa risparmiare tempo.
Microbico gDNA-1158、1953bp-58,8%、52,9%GC
Valutazione del cliente: Rispetto al marchio V, l'effetto è paragonabile, ma personalmente lo trovo persino migliore.
Pianta cDNA-2000bp-40%GC
Valutazione del cliente: L'effetto è molto buono e la striscia è trasparente.
Guida alla selezione PCR ad alta fedeltà
| Posizionamento del prodotto | Nome del prodotto | Gatto# |
| 5s/kb, assicura fedeltà e velocità (con Tintura) | 10164ES | |
| 5s/kb, assicura fedeltà e velocità (senza colorante) | 2× Hieff Canace™ Miscela master PCR AdvanceFast | 10163ES |
| 83×Taq, alto tasso di rilevamento (con colorante) | 2×Hieff Canace™ Plus PCR Master Mix (con colorante) | 10154ES |
| 83×Taq singolo enzima + tampone separato | 10153ES |