L'RNA circolare (circRNA) è una classe unica di molecole di RNA non codificanti. Si formano attraverso un meccanismo chiamato back splicing. I due esoni dell'mRNA precursore sono collegati in una struttura ad anello chiuso durante lo splicing. Ciò evita le comuni strutture 5' cap e 3' tail presenti nelle molecole di RNA lineari. Questa struttura circolare conferisce elevata stabilità al circRNA, rendendolo meno suscettibile alla degradazione da parte delle nucleasi all'interno della cellula. Pertanto, hanno un'emivita più lunga nelle cellule, il che consente loro di ottenere effetti a basso dosaggio e di lunga durata nelle applicazioni pratiche. Inoltre, il circRNA ha il vantaggio di un processo di produzione relativamente semplice perché non richiede IL nucleotidi modificati il capping o poliadenilazione, rendendo l'RNA circolare un punto caldo nello sviluppo dei farmaci.
Presenta vantaggi significativi nello sviluppo dei farmaci, i cui dettagli sono principalmente elencato nel seguente:
01 Maggiore stabilità
La struttura del circRNA lo rende resistente alla degradazione da parte delle nucleasi, quindi Ha un'emivita più lunga e una maggiore stabilità nelle cellule, il che è fondamentale per l'effetto prolungato dei farmaci.
02 Bassa immunogenicità
Rispetto all'RNA lineare, il circRNA ha una minore immunogenicità, il che riduce la possibilità di reazioni immunitarie, rendendo il circRNA più adatto come vettore di farmaci.
03 Espressione proteica efficiente
La ricerca dimostra che i circRNA ingegnerizzati possono esprimere in modo stabile ed efficiente le proteine nelle cellule eucariotiche, il che è particolarmente importante per la terapia sostitutiva proteica.
04 Potenziali applicazioni del trattamento delle malattie
Il circRNA ha dimostrato di avere potenzialità nel trattamento di varie malattie, tra cui malattie rare, nella terapia del cancro e come parte dello sviluppo di vaccini.
05 Sistema di consegna innovativo
I sistemi di somministrazione di recente sviluppo, come le nanoparticelle lipidiche (LNP), possono trasportare efficacemente il circRNA alle cellule bersaglio, il che è fondamentale per il targeting e l'efficacia dei farmaci.
06 Sviluppo del vaccino
I vaccini circRNA hanno dimostrato potenziale nello sviluppo di vaccini contro il COVID-19, in quanto sono in grado di indurre la produzione di più anticorpi neutralizzanti e risposte più efficaci delle cellule T e sono più stabili a temperatura ambiente rispetto all'mRNA lineare, il che aiuta a semplificare le condizioni di conservazione e trasporto.
07 Modifica genetica
Il circRNA mostra potenziale anche nel campo dell'editing genetico, potendo fungere da modello per i sistemi di editing genetico, garantendo un'espressione proteica più persistente e stabile.
Il processo di produzione del circRNA comprende: preparazione del modello, trascrizione in vitro, rimozione del modello di DNA, circolarizzazione e purificazione. Dopo la circolarizzazione dell'RNA, l'RNA non circolarizzato deve essere digerito con la Ribonucleasi R (RNasi R) per arricchire il circRNA.
SÌ ... ha un design razionale degli enzimi molecolari bidirezionali e una piattaforma di evoluzione diretta, nonché una base di produzione di enzimi molecolari specificamente progettata per prodotti di livello GMP. Sviluppare e produrre prodotti RNasi R di grado GMP con elevata purezza e forte attività digestiva, fornendo supporto per il lancio di nuovi vaccini/farmaci a RNA.
Figura 1: Diagramma del processo di produzione dell'RNA circolare
(Fonte:Front Immunol 2023 12 gennaio:13:1091797. doi: 10.3389/fimmu.2022.1091797. eCollection 2022.)
La RNasi R (Ribonucleasi R, RNasi R) è una esoribonucleasi 3'→5' dipendente da Mg2+ che origina da Escherichia coliPuò digerire tutto l'RNA lineare e ha difficoltà a digerire circRNA, Lasso RNA, o molecole di RNA a doppio filamento con meno di 7 nucleotidi sporgenti all'estremità 3'. L'RNasi R è comunemente utilizzata per rimuovere le molecole di RNA lineari, raggiungendo lo scopo di arricchire gli RNA non lineari come il circRNA e l'RNA lariat.
L'applicazione principale regioni Sono:
- Ricerca sull'espressione genica;
- Ricerca sullo splicing alternativo;
- Arricchire il circRNA da campioni biologici;
- Identificare la struttura intronica del lazo dell'RNA;
- Identificare l'esone circRNA.
Caratteristiche del prodotto
- Purezza delle proteine (SDS-PAGE) ≥95%;
- Nessun residuo di esonucleasi;
- Rispetto ai concorrenti, il prodotto ha una capacità equivalente di digerire l'RNA lineare;
- Rispetto ai concorrenti, il prodotto ha un effetto simile sull'arricchimento del circRNA.
Dimostrazione delle prestazioni
Purezza proteica (SDS-PAGE) ≥95%
Figura 2: Test di purezza delle proteine: Da sinistra a destra, i risultati sono per volumi diversi (1 μL, 2 μL, 3 μL) della stessa concentrazione di prodotto. I risultati mostrano che la purezza proteica di YEASEN Il prodotto RNasi R è ≥95%.
Nessun residuo di esonucleasi
Figura 3: Rilevamento residuo dell'esonucleasi: aggiungere 20 U di YEASEN RNasi R a 0,5 μg di digestione λDNA-Hind III, incubare a 37°C per 4 ore, quindi eseguire elettroforesi su gel di agarosio. I risultati mostrano che le bande del DNA non sono cambiate, indicando che non vi è alcuna esonucleasi residua nello YEASEN Prodotto RNasi R.
Comparabile al prodotto RNase R di marca importata A nella digestione dell'RNA lineare
Figura 4: Confronto della capacità dei prodotti RNase R di YEASEN e dei prodotti RNase R di un produttore importato di digerire l'RNA lineare: quando YEASEN Il prodotto RNase R e il prodotto RNase R di un produttore importato A sono stati aggiunti a un sistema di reazione contenente substrati di RNA lineare, i risultati hanno mostrato che quando la quantità di prodotto RNase R aggiunta ha raggiunto 2-4 U, le bande di RNA si sono indebolite o addirittura sono scomparse, indicando che RNase R ha un effetto digestivo sulle molecole di RNA lineare. Inoltre, la capacità digestiva di YEASEN Il prodotto RNasi R e il prodotto RNasi R del produttore importato A sulle molecole di RNA lineare sono comparabili.
Equivalente all'effetto di arricchimento del circRNA del prodotto RNase R di marca importato da A
Figura 5: Confronto dell'effetto di arricchimento del circRNA da parte di YEASEN Prodotto RNase R e prodotto RNase R da un produttore importato A: Il sistema di reazione contenente substrati circRNA è stato sottoposto a reazioni con YEASEN prodotti e prodotti RNase R provenienti rispettivamente da un produttore importato A.I risultati hanno mostrato che non vi era alcuna differenza significativa nella luminosità delle bande di RNA dopo il trattamento con il prodotto RNase R di YEASEN e il prodotto RNase R del produttore importato A, indicando che il circRNA può resistere alla digestione da parte di RNase R. I risultati sopra riportati confermano che entrambi gli YEASEN I prodotti e i prodotti RNase R di un produttore importato possono essere utilizzati efficacemente per l'arricchimento del circRNA.
Feedback dei clienti
EFACILITARE Rispetto ad altri marchi, RNase R ha effetti di scissione migliori sull'RNA lineare.
Figura 6: Confronto degli effetti della digestione RNase R sulle molecole di mRNA lineare tra YEASEN prodotti e produttori A e B:La reazione è stata effettuata aggiungendo YEASEN Prodotto RNasi R e i prodotti RNasi R dei produttori A e B in un sistema di reazione contenente 1 μg di substrato mRNA lineare. I risultati hanno mostrato che YEASEN Il prodotto RNase R ha mostrato una migliore efficienza di digestione sull'RNA lineare rispetto ai prodotti RNase R dei produttori A e B.
Informazioni sul prodotto
| Nome del prodotto | Codice prodotto | Specifiche del prodotto |
| 14615ES | 500U/5000U/20KU/200KU | |
| 14616ES | 500 µl/1 mL/5 mL/10 mL/100 mL |
Riferimenti
1.Qu L, Yi Z, Shen Y, et al. Vaccini circolari a RNA contro SARS-CoV-2 e varianti emergenti. Cellula. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
2.Chen L, Wang C, Sun H, et al. La cassetta degli attrezzi bioinformatica per la scoperta e l'analisi del circRNA. Breve bioinformazione. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001