Descrizione
Hifair™ Kit sonda Multiplex One Step RT-qPCR (UDG Più) è un kit di PCR quantitativa multiplex basato sull'RNA come stampo. Nel corso dell'esperimento, la trascrizione inversa e la PCR quantitativa sono state eseguite nella stessa provetta, il che ha semplificato l'operazione sperimentale e ridotto il rischio di contaminazione.
In questo kit, il primo filamento di cDNA è stato sintetizzato in modo efficiente da Hifair resistente al caloreTM V Trascrittasi inversa e amplificata quantitativamente da UNICON™ HotStart Taq DNA Polymerase. Il kit contiene principalmente tampone MP ottimizzato, mix di enzimi, ecc. La soluzione tampone contiene già Mg2+ e dNTP. Inoltre, vengono aggiunti i fattori che possono inibire efficacemente l'amplificazione PCR non specifica e migliorare l'efficienza di amplificazione di più reazioni qPCR, il che può garantire l'efficienza di amplificazione e portare a termine fino a più reazioni di amplificazione. Il sistema dUTP/UDG è stato aggiunto per prevenire efficacemente il rischio di contaminazione da aerosol.
Caratteristiche
1. GOttima versatilità: È adatto per l'amplificazione qPCR e il rilevamento di acidi nucleici di microrganismi patogeni, genomi umani, piante e altre specie.
2. Alta sensibilità: Il sistema tampone attentamente ottimizzato migliora la sensibilità di rilevamento dei modelli a bassa concentrazione fino a 250 copie/mL.
3. sistema dUP/UDG: Il sistema anti-inquinamento dUTP/UDG termolabile è stato introdotto per degradare efficacemente l'inquinamento da aerosol dei prodotti, ridurre i falsi positivi e garantire risultati autentici.
4. Supportoing programma veloce: compatibile con il programma veloce da 40 minuti.
5. Super stabilità: stabilee a 37℃ per 14 giorni, ripetendo il congelamento e lo scongelamento 10 volte.
Componenti
| Componenti | Nome | 16630ES60 (100 tonnellate) | 16630ES80 (1000 tonnellate) | 16630ES92 (10000 tonnellate) |
| 16630-A | 5×tampone MP Hifair | 500 microlitro | 5 ml. | 50 ml |
| 16630-B | Enzima Hifair Mescolare | 100 microlitro | 1 ml. | 10 ml. |
| 16630-C | Potenziatore GC | 500 microlitro | 5 ml. | 50 ml |
Nota: 1) 5×HifairTM Tampone MP è l'abbreviazione di HifairTM Tampone sonda RT-qPCR Multiplex One Step V, che include dNTP, dUTP, Mg2+, stabilizzatori, potenziatori e altro ancora.
2) Miscela di enzimi Hifair contiene principalmente Hifair resistente al caloreTM Trascrittasi inversa V, UNICONTM HotStart Taq DNA polymeras e Gas UD.
3) Il potenziatore GC è facoltativo. Si prega di trovare la versione gratuita del potenziatore GC: Gatto: 16901ES.
4) Il 16630-A e il 16630-B sono equivalenti al 16901-A e 16901-B, rispettivamente.
Specifiche
| Metodo PCR | RT-qPCR in un unico passaggio |
| Tipo di campione | RNA |
Magazzinaggio
TLui prodotto Dovrebbe Essere immagazzinato A -25°C~-15°C per 1 anno.
Cifre
Figura 1. Elevato tasso di rilevamento
Istruzioni
1. Reazione Composizione
| Componenti | Volume ((milioni di litri) | Concentrazione finale |
| 5×Hifair™ Tampone MP | 5 | 1 × |
| Miscela di enzimi Hifair | 1 | - |
| Potenziatore GC | Da 0 a 5 | - |
| Miscela di primer (10 μM) | 0,4 ogni | 0,16 μM |
| Miscela di sonda (10 μM) | 0,2 ogni | 0,08 μM |
| RNA | 1-5 | - |
| H2O senza RNasi | a 25 | - |
Nota：Assicurarsi di mescolare bene prima dell'uso, evitando la formazione di bolle eccessive causate da vibrazioni violente.
a) Concentrazione del primer: Primer miscela comprendente primer multiplex, a seconda della situazione, la concentrazione ottimale del primer può essere compresa tra 0,1 e 1,0 μM.
b) Concentrazione della sonda: miscela di sonde che include la differenza di marcatura della sonda multiplex del gruppo fluorescente; a seconda della situazione, la concentrazione ottimale della sonda può essere compresa tra 0,05 e 0.5 unità di misura.
c) Diluizione del template: la qPCR è altamente sensibile e si raccomanda di diluire il template. Il valore Ct di controllo è adatto tra 20 e 35.
D) Preparazione del sistema: testata con elemento filtrante. Evitare contaminazione incrociata e contaminazione da aerosol.
2. Protocollo di ciclismo ottimizzato
| Fase di reazione | Temperatura | Tempo | Ciclo | |
| 1 | Trascrizione inversa | 50°CUN | 15 minimo | 1 |
| 2 | Denaturazione iniziale | 95°C | 5 minuti | 1 |
| 3 | Reazione di amplificazione | 95°C | 15 secondi | 45 cicli |
| 60°CB | 30 secondiC |
Nota：a) L'trascrizione inversa: La temperatura può essere selezionata a 42°C o 50°C per 10-15 minuti.
b) Reazione di amplificazione: la temperatura viene regolata in base al valore Tm dei primer progettati.
C) Acquisizione del segnale di fluorescenza: Impostare la procedura sperimentale in base ai requisiti del manuale dello strumento.
Pagamento e sicurezza
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Indagine
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