Descrizione
La T7 RNA polimerasi utilizza DNA a doppio filamento contenente la sequenza promotore T7 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') come stampo e NTP come substrati per sintetizzare RNA complementare al filamento inverso di DNA a valle del promotore. Sia il DNA lineare a doppio filamento con estremità smussate o sporgenze 5' possono fungere da substrati stampo per la T7 RNA polimerasi, il che significa che plasmidi linearizzati o prodotti PCR possono essere utilizzati come stampi per la sintesi di RNA in vitro.
Questo kit impiega un principio di saggio immunoenzimatico a sandwich (ELISA) per rilevare la RNA polimerasi T7 residua. Gli standard e i campioni di prova della RNA polimerasi T7 vengono aggiunti ai pozzetti della micropiastra pre-rivestiti con anticorpi anti-RNA polimerasi T7 (36705-A). Vengono quindi aggiunti anticorpi di rilevamento della RNA polimerasi T7 marcati con biotina diluiti (36705-C), seguiti da Streptavidina-HRP (SA-HRP) (36705-D), formando un complesso anticorpo + antigene + anticorpo-biotina + SA-HRP. Dopo il lavaggio, viene aggiunto il substrato TMB (36705-H) per lo sviluppo del colore. Il TMB è catalizzato da HRP per passare da incolore a blu e infine a giallo dopo l'aggiunta della soluzione di arresto (36705-I). L'intensità del colore giallo è correlata positivamente alla quantità di RNA polimerasi T7 rilevata nel campione.
Componenti
| NO. | Nome | 36705ES48 | 36705ES96 |
| 36705-A | Strisce di microtitolazione rivestite con anti-T7 RNA polimerasi | 48 T | 96 anni |
| 36705-B* | Standard: T7 RNA Polimerasi | 1 fiala | 2 fiala |
| 36705-C | Rilevamento Anticorpo：Biotina-coniugato Anticorpi | 60 microlitro | 120 microlitro |
| 36705-D | Streptavidina-HRP | 30 microlitro | 60 microlitro |
| 36705-E | Tampone di diluizione 1 | 25 ml. | 45 ml. |
| 36705-F | Tampone di lavaggio concentratotasso (20×) | 25 ml. | 50 ml. |
| 36705-G | Tampone di diluizione 2 | 15 ml. | 30 ml. |
| 36705-H | Substrato TMB | 8 ml. | 15 ml. |
| 36705-I | Soluzione di arresto | 5 ml. | 10 ml. |
| 36705-J | Sigillante per piastre | 3 ciascuno | 5 ciascuno |
*Lo standard 36705-B è una polvere liofilizzata.
Compatibile con T7 RNA Polimerasi: 10625, 10628 E 10629.
Dati di convalida
Tabella 1. Intervallo di linearità: 1～32 ng/mL ,R2=0,999 ,CV≤5%。
| Standardizzato | Conc.( ng/mL) | Media( ng/mL) | Recupero(%） | %di CV |
| Standard1 | 32 | 31.965 | 99,9% | 2,2% |
| Standard2 | 16 | 16.070 | 100,5% | 5,0% |
| Standard3 | 8 | 7.812 | 97,7% | 2,1% |
| Standard4 | 4 | 4.192 | 104,8% | 0,8% |
| Standard5 | 2 | 2.020 | 101,8% | 3,5% |
| Livello 6 | 1 | 1.173 | 117,3% | 0,0% |
| NC | 0 | / | / | / |
Tabella 2. Elevata specificità
| Nome della proteina | Conc. | Rilevato o no |
| Ppositivo Ccontrollo | 1 ng/ml | Rilevato |
| Nnegativo Ccontrollo | 0 ng/ml | e |
| Ultranucleasi | 10 μg/ml | e |
| Sale Ultranucleasi attiva | 10 μg/ml | e |
| DNasi IO | 10 μg/ml | e |
| Inibitore RNasi murino | 10 μg/ml | e |
| Enzima di capping del vaccino | 10 μg/ml | e |
| Pirofosfatasi inorganica | 10 μg/ml | e |
| mRNA Cap 2 ´-O-metiltransferasi | 10 μg/ml | e |
| 1% di BSA | 10 Mg/ml | e |
Tabella 3. LOQ: Il limite di quantificazione per questo prodotto è determinato diluendo il punto di concentrazione più basso della curva standard, dove il coefficiente di variazione (CV) alla concentrazione più bassa è inferiore al 20%. Questo è definito come limite di quantificazione, che è 1 ng/mL.
| Std6 valore teorico (ng/ml) | Valore medio del test Std 6 (ng/ml) | Tripetizioni est | %di CV | Recupero |
| 1 | 0,858 | 24 | 12,6% | 85,8% |
Tabella 4. LOD: Il limite di rilevamento di questo prodotto è definito come la concentrazione standard corrispondente al valore di rilevamento medio del controllo negativo (NC) più due volte la deviazione standard. Misurando 24 standard NC, calcolando la media e la deviazione standard, il limite di rilevamento è determinato essere 0,318 ng/mL.
| Valore medio(OD） | Deviazione standard(OD） | Valore medio +2SD (OD) | Valore medio +2SD (ng/ml) |
| 0,0527 | 0,0038 | 0,0604 | 0,3176 |
Spedizione e stoccaggio
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