マイコプラズマの検出、予防、除去 - すべてワンステップで！
マイコプラズマ
マイコプラズマは、マイコプラズマとも呼ばれ、直径0.1～0.3μmで、これまでに発見された原核生物の中で最も小さく、最も単純なものです。フィルターを通過でき、球状、棒状、糸状、枝分かれした形状など、さまざまな形状をとる高い多形性を示します。研究室やバイオ医薬品製造では、細胞培養がマイコプラズマに汚染されやすい傾向があります。文献によると、保存された細胞株のマイコプラズマ汚染の発生率は約15％～35％で、バイオ医薬品業界では0.44％～6.70％の範囲です[1] 。
図1: マイコプラズマの形態
マイコプラズマ汚染の影響
細菌や真菌による汚染は比較的簡単に検出、予防、除去できますが、マイコプラズマによる汚染は気づきにくいものです。増殖密度が 10^7-10^9 CFU/ml と高い場合でも、明らかな汚染の兆候 (濁度や pH の変化など) が見られない場合もあります。マイコプラズマによる汚染は、細胞にさまざまな変化を引き起こす可能性があります (図 2 を参照)。
図2: マイコプラズマ汚染後の細胞状態の変化
マイコプラズマ検出の応用シナリオ
マイコプラズマ汚染の典型的な発生源
- 細胞間の相互汚染;
- 作業環境や実験装置の汚染;
- 実験者の無菌技術が不十分であった。
- 培養培地やその他の試薬の汚染;
- 細胞調製に使用された元の組織または臓器の汚染。
細胞培養がマイコプラズマ汚染に遭遇した場合の対処法
図3: マイコプラズマ汚染に対するトータルソリューション
細胞内のマイコプラズマ汚染に対する3つのソリューション
1. マイコプラズマ検出
ワンステップ等温マイコプラズマ検出:
Yeasen のワンステップ等温マイコプラズマ検出試薬は、独自の等温増幅技術を使用して、青紫色 (陰性) から空色 (陽性) までより強力な色識別を実現し、視覚的な識別を容易にします。また、偽陽性を排除するための汚染防止成分も含まれています。
図4：ワンステップマイコプラズマ検出の操作プロセス
PCR によるマイコプラズマ検出:
Yeasen の PCR マイコプラズマ検出法は、従来のワンステップ PCR とは異なり、1 組ではなく 3 組のプライマーを使用し、ネストされた PCR 増幅のためにマイコプラズマの 16S および 23S 保存領域をターゲットとします。これにより、感度が大幅に向上し、非特異性が減少し、マイコプラズマのコピーが 1 つだけという低レベルでも検出できるようになります。
図5：マイコプラズマ濃度の異なるサンプルのPCR増幅のゲル電気泳動画像
図6：異なるマイコプラズマ濃度のサンプルのPCR増幅のゲル電気泳動画像
表1: イェーセンのワンステップ等温マイコプラズマ検出試薬で検出可能なマイコプラズマの種類
注: 青い部分は、ワンステップ等温検出法と PCR 法の両方で検出可能なマイコプラズマの種類を示しています。
2. MycAwayマイコプラズマ除去試薬（1000×）
MycAway マイコプラズマ除去試薬 (1000×) は、細胞に害を与えることなく、マイコプラズマの成長に必要な DNA と必須タンパク質の合成を阻害することで、マイコプラズマを効果的に除去する混合製剤です。細胞を最大限に救い、マイコプラズマ汚染による損失を減らします。
図7: 細胞除去効果の実証
マイコプラズマ除去試薬の特徴：
- 低毒性:細胞毒性が最小限で、細胞生存率試験やトランスフェクションなどのその後の細胞実験に影響を与えません。
- 高い安定性: 効果を維持しながら -20°C で長期間保存できます。
- 使い方は簡単：マイコプラズマに汚染された培養培地に製品を加えて培養するだけです。
- 即効性：わずか 3 日で目に見える結果が現れます。
- 広範囲スペクトラム: ほとんどの実験室マイコプラズマ型に対して有効です。
図8：マイコプラズマ除去試薬の細胞毒性試験図
3. マイコプラズマ予防
製品情報
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カテゴリ |
製品名 |
カタログNo. |
仕様 |
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検出 |
40612ES25/60 |
25/100 トン |
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MycAway™ マイコプラズマリアルタイムqPCR検出キット 人気 |
40618ES25/60 |
25/100 トン |
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40601ES10/20 |
10/20 アッセイ |
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除去 |
MycAway™ スプレー（そのまま使用可能） |
40605ES02/03 |
1/2×500mL |
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40607ES03/08 |
1/5×1mL |
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防止 |
40608ES03/08 |
1/5×1mL |
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40609ES60 |
100mL |
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40610ES60 |
100mL |