초고순도 UCF.ME™ 열안정성 RNase H: 더 효율적인 실험을 위한 정밀한 절단!

rRNA 제거 및 mRNA 캡핑 효율 검출에 이상적입니다!

뛰어난 내열성을 지닌 열안정성 RNase H는 특이성과 효율성 면에서 일반 RNase H보다 더 우수한 성능을 발휘합니다!

RNase H 소개

E. coli RNase H(E. coli Ribonuclease H)는 RNA-DNA 하이브리드 가닥의 RNA 구성 요소를 특별히 분해하는 효소입니다. DNA 복제, 복구 및 전사와 같은 프로세스에서 RNA 가닥을 절단하여 DNA 템플릿의 무결성과 안정성을 유지하는 데 중요한 역할을 합니다. 이로 인해 cDNA 합성, rRNA 제거 및 RNA 간섭 연구를 포함한 분자 생물학 실험에 널리 사용됩니다. 그러나 E. coli RNase H에는 몇 가지 제한 사항이 있습니다.

• 단일 가닥 RNA나 DNA의 비특이적 절단을 일으켜 실험 결과의 정확도를 떨어뜨릴 수 있습니다.
• 열 안정성이 낮아 고온에서 활성을 유지할 수 없으므로 고온 역전사 실험이나 높은 온도가 필요한 PCR 실험에는 적합하지 않습니다.

이러한 단점으로 인해 연구자들은 응용 분야를 확대하고 실험 효율성을 높이기 위해 열안정성이 높은 RNase H를 개발하게 되었습니다.

그림 1: RNase H 메커니즘

Thermus thermophilus의 열안정성 RNase H

Thermostable RNase H는 Thermus thermophilus에서 유래한 것으로, E. coli RNase H의 동족체이며 유사한 리보뉴클레아제 기능을 공유합니다. RNA:DNA 하이브리드에서 RNA 가닥의 인산디에스테르 결합을 정확하게 식별하고 효율적으로 절단하는 동시에 DNA 가닥의 무결성을 유지합니다. 심층적인 구조 분석 결과, 전반적인 안정성 분포는 E. coli RNase H와 유사하지만 T. thermophilus RNase H는 전반적인 안정성과 국소 잔류물 안정성 모두에서 상당한 개선을 보였습니다.

65°C 이상의 최적 활동 온도를 가진 Thermostable RNase H는 더 높은 반응 온도에서 향상된 특이성과 효율성을 제공하여 비특이적 절단을 최소화합니다. 이 특성은 다음을 포함한 분자 생물학 실험에서 방대한 잠재력을 발휘합니다.

• rRNA 제거
• mRNA 캡핑율 검출
• Poly(dT)에 혼성화된 mRNA poly(A) 제거
• cDNA 2차 가닥 합성 중 mRNA 제거
• 고온 역전사, 등온 증폭 및 PCR 실험에서 향상된 증폭 효율

그림 2: 열안정 RNase H와 E. coli RNase H의 3차원 구조 비교 ^[1]

UCF.ME ™ 열안정성 RNase H (Cat14545)

Thermostable RNase H는 메타게놈 시퀀싱(mNGS) 및 병원체 표적 시퀀싱(tNGS)에서 rRNA 제거와 같은 병원체 검출 실험에 자주 사용됩니다. 효소에 잔류하는 숙주 또는 배경 박테리아 핵산은 검출 정확도를 크게 손상시킬 수 있습니다. 이를 해결하기 위해 Yeasen Bio tech는 독점적인 UCF.ME ™ 초청정 공정 기술을 사용하여 개발한 UCF.ME™ Thermostable RNase H(Cat14545)를 출시합니다. UCF.ME ™ 초청정 분자 효소 시설에서 생산된 이 제품은 재료 선택 및 환경 관리에서 공정 최적화 및 테스트에 이르기까지 엄격한 품질 관리를 거쳐 배경 박테리아 gDNA 및 뉴클레아제 잔류물을 최소화합니다. 이를 통해 정확하고 신뢰할 수 있으며 재현 가능한 실험 결과가 보장됩니다.

제품의 장점:

• 높은 활성도와 뛰어난 배치 간 일관성
• 매우 낮은 호스트 gDNA 잔류물: <0.02 사본/U
• 엑소뉴클레아제, 엔도뉴클레아제 또는 RNase 잔류물 없음
• 뛰어난 안정성: 4°C에서 32일, 25°C에서 16일, 37°C에서 7일 후에도 효소 활성이 크게 손실되지 않음

UCF.ME™ Thermostable RNase H(Cat14545)의 성능 쇼케이스

1. 높은 활동성 및 배치 일관성

UCF.ME ™ Thermostable RNase H의 3개 배치를 RNA:DNA 기질과 함께 배양하고, 아가로스 겔 전기영동을 통해 밴드 변화를 분석했습니다. 결과에 따르면 이 효소의 0.05U만 20 pmol RNA:DNA 기질에서 RNA를 효과적으로 절단하고, 배치 간 일관성이 뛰어나 안정성과 신뢰성을 강조합니다.

그림 3: UCF.ME™ Thermostable RNase H 의 활동 검출 결과

참고: 반응 조건: 50°C 20분; RNA:DNA 기질 – 20 pmol

2. 낮은 호스트 gDNA 잔류물: <0.02 사본/U

여러 배치에 걸친 숙주(대장균) gDNA 잔류물 테스트를 실시한 결과, 세 배치의 UCF.ME ™ 열안정 RNase H 모두 잔류물 수준이 0.02 사본/U보다 훨씬 낮아 높은 순도와 실험 신뢰성이 보장됩니다.

그림 4: UCF.ME™ Thermostable RNase H 의 호스트 gDNA 잔류물 결과

3. 엑소뉴클레아제, 엔도뉴클레아제 또는 RNase 잔류물 없음

25 U의 UCF.ME ™ Thermostable RNase H를 핵산 기질과 함께 배양하고, 밴드 변화를 아가로스 겔 전기영동으로 평가했습니다. 세 배치 중 어느 곳에서도 엑소뉴클레아제, 엔도뉴클레아제 또는 RNase 잔류물이 감지되지 않아 결과의 정확성과 신뢰성에 대한 강력한 확신을 제공했습니다.

그림 5: UCF.ME™ Thermostable RNase H 의 엑소뉴클레아제, 엔도뉴클레아제 및 RNase 잔류물 검출 결과

4. 뛰어난 안정성

UCF.ME ™ Thermostable RNase H는 안정성 시험을 거쳤습니다: 4°C에서 32일, 25°C에서 16일, 37°C에서 7일. 효소 활성 측정 결과 유의미한 감소가 나타나지 않아 광범위한 온도 범위에서 뛰어난 안정성을 보이며 장기 보관 및 다양한 실험 조건에 적합하다는 것을 증명했습니다.

그림 6: UCF.ME™ 열안정 RNase H 의 가속 안정성 결과

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원천	제품 이름	고양이 번호
티.테르모필루스	UCF.ME ™ 열안정 RNase H	14545ES
대장균	RNase H	12906ES

 

참고문헌

1. Hollien J, Marqusee S. 호열성 효소의 안정성의 구조적 분포 [J]. 미국 국립과학원 회보, 1999, 96(24): 13674-13678.

2. Wolf EJ, Dai N, Chan SH. 부위 특이적 엔도리보핵산분해효소를 이용한 DNA 프로브 지향 농축을 통한 mRNA 5′말단 캡핑의 선택적 특성화 [J]. [2025-03-03].

3. Gu H, Sun YH, Li XZ. 조류 종을 위해 개발된 총 RNA 시퀀싱 및 리보솜 프로파일링을 위한 새로운 rRNA 고갈 방법 [J]. Poultry Science, 2021, 100(7): 101321. DOI:10.1016/j.psj.2021.101321.