아프리카돼지열병(ASF)은 아프리카돼지열병 바이러스(ASFV)가 가축돼지나 야생멧돼지를 감염시켜 발생하는 급성, 중증, 고도로 전염성이 강한 전염병입니다. 이 병의 이환율과 사망률은 100%에 달할 수 있으며, 세계 돼지 산업을 심각하게 위협하고 헤아릴 수 없는 경제적 손실을 초래합니다. 세계동물보건기구(OIE)는 이를 보고해야 할 동물 질병으로 분류합니다.

현재 아프리카돼지열병에 대한 백신이나 효과적인 치료법은 없습니다. 실험실 진단 방법을 통한 아프리카돼지열병의 신속하고 정확한 진단은 질병 확산을 막는 데 중요합니다. OIE는 ASF의 일상적 진단을 위한 주요 도구로서 qPCR을 권장합니다.

Yeasen은 IVD 원료 R&D에 풍부한 경험을 가진 제조업체입니다. 아프리카 돼지 열병에 직면하여 Yeasen은 긍정적으로 대응하고 고객과 협력하여 아프리카 돼지 열병 바이러스 추출에서 검출까지 세 가지 전체 프로세스 솔루션을 개발합니다. 그러면 세 가지 솔루션은 무엇일까요? 그리고 이러한 솔루션의 응용 분야는 무엇일까요? 계속 읽기...

그림 1. Yeasen 아프리카돼지열병 감지 솔루션

솔루션 I: TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus) （ 문의 ）

제품 특징

👍UDG 오염방지 시스템으로 에어로졸 오염 위험을 효과적으로 방지

👍사전 혼합 PCR 용액(마스터 믹스 + 프라이머 + 프로브)은 실온에서 장기간 안정성을 유지하여 검출의 어려움을 크게 단순화합니다.

👍높은 증폭 효율과 좋은 반복성

👍다중 플랫폼 및 다중 시스템에 적합

케이스 쇼

👉사전 혼합 PCR 용액의 장기 안정성
Cat#13171은 ASF 플라스미드 시스템의 증폭에서 37°C에서 7일 동안 보관할 수 있는 사전 혼합 PCR 용액을 구성하고 15회 반복 동결 및 해동했습니다. 결과에 따르면 PCR 용액의 Ct 값과 민감도는 37°C에서 7일 보관한 후에도 크게 다르지 않았고, Ct 값은 15회 반복 동결 및 해동한 후에도 크게 변하지 않았습니다.

그림 2. Cat#13171 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)( 문의 )는 ASF 플라스미드 시스템 증폭에서 장기 안정성을 갖는 사전 혼합 PCR 용액에 사용됩니다. 2A-0일 및 7일 동안 37℃에서의 Ct 값 2B-0일 및 7일 동안 37℃에서의 민감도 2C-15회 동결-해동 후 안정성

👉안정적이고 재현 가능한 시약
Cat#13171의 4개의 다른 배치를 선택하여 ASFV 플라스미드 시스템 증폭 실험을 20회 반복했습니다. Ct 값에는 유의미한 차이가 없었고 CV는 1% 미만이었습니다.

그림 3. Yeasen Cat#13171의 반복성 테스트

👉다중 플랫폼 다중 시스템 적용 가능
Yeasen Cat#13171은 Bio-Rad CFX96, ABI Q5 및 Slan 플랫폼에서 각각 아프리카돼지열병 ASFV/ACT 이중 플라스미드를 증폭하는 데 사용되었습니다. Yeasen Cat#13171은 다양한 유형의 기기에 적합하며 데이터가 신뢰할 수 있고 안정적임을 알 수 있습니다.

그림 4. Bio-Rad CFX96 실시간 PCR 시스템

그림 5. ABI Q5 실시간 PCR 시스템

그림 6. Slan 실시간 PCR 시스템

솔루션 II: Universal TaqMan 멀티플렉스 qPCR 마스터 믹스

Yeasen의 Universal TaqMan 멀티플렉스 qPCR 마스터 믹스(Cat#11211)는 항체 변형 Hot-Start Taq DNA 중합효소와 매칭된 멀티플렉스 버퍼를 사용하여 저농도 템플릿을 효율적으로 증폭하도록 심층적으로 최적화되었습니다. 이 제품은 단일 튜브에서 최대 4플렉스 PCR 반응을 지원하며 유전자형 분석 및 멀티플렉스 qPCR 분석에 이상적입니다.

제품 특징

👍혈액 불순물에 대한 강한 내성, Yeasen 핵산 추출 시약 Cat#13720 Nucleic Acid Release Reagent V2와 함께 사용 가능, 직접 qPCR에 이상적
👍반응당 3개 사본에 대한 초고감도로 검출 정확도가 크게 향상되었습니다.
👍사전 혼합 PCR 용액(마스터 믹스 + 프라이머 + 프로브)은 실온에서 장기간 안정성을 유지하여 검출의 어려움을 크게 단순화합니다.

케이스 쇼

👉혈액 불순물에 대한 강한 내성
다른 브랜드의 유사 제품과 비교했을 때, Yeasen Cat#11211은 혈액 샘플의 억제제에 대한 내성이 더 높습니다. 결과에 따르면 Yeasen Cat#11211은 EDTA와 구연산나트륨에 대한 내성이 높고 0.5% 전혈을 견딜 수 있습니다.

그림 7. Cat#11211 Universal TaqMan 멀티플렉스 qPCR 마스터 믹스 와 다양한 브랜드의 마스터 믹스는 각각 3 mM EDTA(3A), 6 mM 구연산나트륨(3B), 0.5% 혈액(3C)이 보충된 ASF qPCR 솔루션에 사용됩니다.

👉3개 사본/반응에 대한 초고감도

ASFV 플라스미드를 20회 반복하여 증폭하는 것은 다양한 브랜드의 제품을 기반으로 수행되었습니다. 실험 결과에 따르면 Yeasen 제품의 검출률이 더 높습니다.

그림 8. 다양한 브랜드의 유사 제품 간 검출률 비교 (최종 시스템에 3개 사본)

👉장기 안정성, 실온에서 7일간 안정

ASFV/ACT 이중 플라스미드 시스템의 PCR 용액은 4℃, 25℃ 및 37℃에서 7일 후에도 안정적인 성능을 유지할 수 있습니다. Ct 값과 형광 값이 크게 변하지 않았음을 알 수 있습니다.

그림 9. PCR 용액의 안정성

솔루션 III: 등온 증폭

Yeasen의 제품은 ASF 검출을 더 빠르고 효율적으로 수행하는 데 도움이 되는 등온 증폭 기술을 지원합니다. Cat# 14402 Hieff™ Bst Plus DNA Polymerase(40 U/μL) 는 5'-3' 엑소뉴클레아제 활성이 없는 Thermophilic Geobacillus sp DNA Polymerase I에서 파생되었습니다. 이 제품은 더 강한 5'-3' DNA 중합효소 활성, 스트랜드 변위 활성 및 dUTP 내성을 가지고 있어 LAMP, CPA 등과 같은 오염 방지 등온 증폭 반응에 더 적합합니다.

제품 특징

👍높은 증폭 효율

👍고수율 증폭

👍dUTP 내성, Cat#10303 Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG)와 함께 사용 가능( 문의 ), 열 불안정, 1 U/μL로 에어로졸 오염 위험 방지

케이스 쇼

👉수입 브랜드 N* 제품에 대한 우수한 대안

증폭 과정은 각각 Yeasen과 N* Company의 Bst DNA polymerase를 사용하여 수행되었습니다. 다른 브랜드 간에 Ct 값과 형광 강도에 유의한 차이는 없었습니다.

그림 10. 다양한 브랜드의 증폭 곡선

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