배경 설명

단백질 정제는 실험 샘플의 총 단백질에서 표적 단백질을 분리하는 과정으로, 표적 단백질의 생물학적 활성과 화학적 무결성을 유지합니다. 벡터를 구성하는 동안, 몇 가지 필수적인 발현 요소 외에도 코돈 최적화와 태그 선택도 고려해야 합니다. 올바른 태그를 선택하는 것은 단백질 정제와 단백질 용해도 증진에 유익할 뿐만 아니라 단백질의 구조와 기능과 하류 응용 분야에 영향을 미쳐서는 안 됩니다. 이 섹션에서는 His와 GST 태그를 소개하는 데 중점을 둡니다.

표 1. His 및 GST 태그 소개

꼬리표	크기 kDa	순서	청정	용해도	태그 제거	태그 절단 효소
그의	~0.84	하하하하하	+	+	필요하지 않음	TEV 프로테아제
상품세금(GST)	26	211개로 구성됨 아미노산	++	++	필수의	3C 프로테아제/PSP

His 태그 단백질 친화 정제

HisSep Ni-NTA 아가로스 레진은 매트릭스로서 고도로 가교된 아가로스 겔을 기반으로 하며, 리간드로서 4배위 니트릴로트리아세트산(NTA)과 화학적으로 결합되고, 니켈 이온(Ni ²⁺ )을 킬레이트한 후, 팔면체 중심에 니켈 이온이 있는 매우 안정적인 팔면체 구조를 형성합니다. 이 구조는 니켈 이온을 소분자 공격으로부터 보호할 수 있습니다. Ni-IDA 레진과 비교할 때, 더 안정적이며 혹독한 조건에서 특정 농도의 환원제, 변성제 또는 커플링제를 견딜 수 있습니다. Ni-TED 레진과 비교할 때, 표적 단백질에 대한 흡착 용량이 더 큽니다. 실험실에서 His-태그된 단백질을 정제하는 데 없어서는 안 될 레진 중 하나가 되었습니다.

그림 1. His 수지의 제품 원리도.

표 2. Yeasen His 정화 제품 선택 가이드

제품 번호	20502ES	20503ES	20504ES/20505ES	20561ES
제품 이름	HisSep Ni-NTA 아가로스 수지	HisSep Ni-NTA 아가로스 수지 6FF	HisSep Ni-NTA 6FF 크로마토그래피 컬럼, 5mL/1mL	HisSep Ni-NTA 맥비즈
행렬	가교된 6% 아가로스 겔	고도로 가교된 6% 아가로스 겔	고도로 가교된 6% 아가로스 겔	자기 아가로스 마이크로스피어
압력 저항	0.1MPa, 1바	0.3MPa, 3바	0.3MPa, 3바	없음
용량	>40 mg 6×His 태그 단백질/mL 매트릭스	>40 mg 6×His 태그 단백질/mL 매트릭스		> 40 mg 6×His 태그 단백질/mL 자기 비드
정화 제안	평균 압력 저항성을 갖는 매트릭스로 배양법, 중력 컬럼 소규모 정제에 적합함	고압 저항성이 있는 매트릭스는 단백질 정제 장비를 이용한 산업적 대규모 단백질 정제에 사용 가능		자기분리를 통한 빠르고 편리한 단백질 정제
용인	8 M 요소, 6 M 염산, 0.5-1 mM DTT, 1 mM EDTA 등
애플리케이션	His-tagged 단백질 정제는 첫 번째 선택이며, 높은 부하, 중간 내성을 가지고 있으며 특히 원핵생물 발현 정제 시스템에 적합합니다.

부록: HisSep Ni-NTA MagBeads(Cat#20561ES) 제품 특징

1. 기존의 사전 충전 컬럼과 수지와 비교해 샘플을 여러 번 원심분리할 필요가 없고 샘플 유속을 제어할 필요가 없어 정제 시간이 크게 단축됩니다.
2. 1단계 정제로 목표 단백질의 순도를 95% 이상 달성할 수 있습니다.
3. 높은 목표 단백질 수율: 수율은 70-80%에 도달할 수 있습니다.
4. 최대 5번까지 재사용이 가능합니다.
5. 표적 단백질의 농도 및 부피를 쉽게 조절할 수 있습니다.
6. 단백질 손실이 적고 단백질 변성이나 침전의 위험이 없습니다.

GST 태그 단백질 친화 정제 매체

GST 태그 단백질 친화 크로마토그래피는 황 결합을 통해 GST 융합 단백질과 고정 글루타티온(GSH) 간의 공유 결합 친화성을 활용하고 GSH 교환 용출 원리에 따라 정제합니다. 이 정제에서 글루타티온은 황 결합을 통해 겔의 팔과 결합한 다음 글루타티온과 글루타티온 S-트랜스퍼라제(즉, GST 태그) 간의 특정 작용력을 사용하여 GST 태그가 있는 융합 단백질이 겔의 팔 글루타티온과 결합하여 표지된 단백질을 다른 단백질과 분리합니다. 글루타티온은 일반적으로 산화된 형태의 GSSG와 환원된 형태의 GSH를 갖습니다. GSH 용출을 사용하면 GSH가 겔의 글루타티온과 경쟁하여 융합 단백질과 결합하여 표적 단백질을 용출합니다.

GSTSep 글루타치온 아가로스 레진은 12원자 암을 통해 환원된 글루타치온을 6% 아가로스 겔과 매트릭스로 화학적으로 공유 결합시켜 구조적으로 만든 GST 태그 단백질 정제 레진입니다. 이 설계는 레진의 정제 효율을 크게 개선하여 배지 1밀리리터당 20mg 이상의 GST 융합 단백질을 운반할 수 있게 했습니다. 이 제품은 특이성과 비용 대비 성능이 우수하며, 다양한 글루타치온 S-트랜스퍼라제, 글루타치온 의존성 단백질 및 글루타치온 재조합 유도체를 한 단계로 정제하는 데 사용할 수 있습니다.

표 3. Yeasen GST 정화 제품 선택 가이드

제품 번호	20507ES	20508ES	20509ES/20510ES	20562ES
제품 이름	GSTSep 글루타치온 아가로스 수지	GSTSep 글루타치온 아가로스 레진 4FF	GSTSep 글루타치온 4FF 크로마토그래피 컬럼, 1 mL / 5 mL	GSTSep 글루타치온 맥비즈
행렬	가교된 6% 아가로스 겔	고도로 가교된 4% 아가로스 겔	고도로 가교된 4% 아가로스 겔	자기 아가로스 마이크로스피어
압력 저항	0.1MPa, 1바	0.3MPa, 3바	0.3MPa, 3바	없음
용량	>20 mg GST 단백질(40 kDa)/mL 매트릭스	>10 mg GST 단백질(40 kDa)/mL 매트릭스		5-10 mg GST 태그 융합 단백질/mL 자기 비드
애플리케이션	높은 하중, 평균 압력 저항성을 가진 매트릭스, 배양 방법, 중력 컬럼 소규모 정제에 적합, 실험실 규모 고객에게 권장	응용분야 낮은 부하, 높은 매트릭스 압력 저항성, 단백질 정제 장비를 이용한 산업적 대규모 단백질 정제에 사용 가능, 확장이 용이함		자기분리를 통한 최저 부하량, 빠르고 편리한 단백질 정제

부록: GSTSep 글루타치온 MagBeads(Cat#20562ES) 제품 특징

1. 한 단계의 자기 분리를 통해 생물학적 샘플에서 고순도 목표 단백질을 직접 정제하여 정제 공정을 크게 단순화하고 정제 효율을 향상시켜 과학 연구 및 산업 분야에서 편리한 GST 융합 단백질 정제에 적합합니다.
2. GST 풀다운 실험에 이 자기 비드를 사용하면 자기 분리에는 여러 번의 원심 분리나 긴 배양 시간이 필요하지 않기 때문에 기존 크로마토그래피 방법에 비해 작업이 더 간단하고 빠르며 자동화도 더 잘 됩니다.

제품 정보

제품 포지셔닝	제품 이름	제품 번호	사양
His 태그 단백질 정제	HisSep Ni-NTA 아가로스 수지	20502ES10/50/60	10ml/50ml/100ml
	HisSep Ni-NTA 아가로스 수지 6FF	20503ES10/50/60	10ml/50ml/100ml
	HisSep Ni-NTA 6FF 크로마토그래피 컬럼, 5mL	20504ES08/25	5ml/5x5ml
	HisSep Ni-NTA 6FF 크로마토그래피 컬럼, 1mL	20505ES03/08	1ml/5x1ml
	HisSep Ni-NTA 맥비즈	20561ES08/25	5ml/25ml 용량
GST 태그 단백질 정제	GSTSep 글루타치온 아가로스 수지	20507ES10/50/60	10ml/50ml/100ml
	GSTSep 글루타치온 아가로스 레진 4FF	20508ES10/50/60	10ml/50ml/100ml
	GSTSep 글루타치온 4FF 크로마토그래피 컬럼, 1 mL	20509ES03/08	1ml/5x1ml
	GSTSep 글루타치온 4FF 크로마토그래피 컬럼, 5 mL	20510ES08/25	5ml/5x5ml
	GSTSep 글루타치온 맥비즈	20561ES08/25	5ml/25ml 용량