국가의약품감독관리총국 약물평가센터(CDE)는 유전자치료제에 대한 가이드라인에서 DNA 잔류량과 잔류 단편의 크기를 제어해야 한다고 명확히 밝혔으며, DNA 잔류 단편의 크기를 가능한 한 200bp 이하로 제어할 것을 권고했습니다. 따라서 생물의약품에서 잔류 핵산을 제거하는 것은 매우 중요합니다. 생산 공정이 점점 더 복잡해짐에 따라 고염 환경에서 잔류 핵산을 효과적으로 제거하는 것은 수많은 새로운 과제에 직면하게 되었습니다.
- AAV 바이러스의 정제 과정에서 바이러스 회수율을 높이기 위해 더 높은 염 농도(200-500 mM)의 완충액을 사용하는 경우가 많습니다. 그러나 기존의 뉴클레아제는 염 농도가 증가함에 따라 활성이 상당히 감소합니다. 효소의 양과 배양 시간을 늘려 정제 효과를 개선하려면 비용이 크게 증가합니다.
- 숙주 DNA는 일반적으로 크로마틴 형태로 존재하며 단백질에 의해 쉽게 캡슐화되어 DNA에 접근할 수 없게 만듭니다. 고염 환경에서 핵산과 단백질은 효과적으로 분리되어 잔류 핵산을 더 잘 제거할 수 있습니다.
- AAV와 같은 바이러스 벡터는 정전기적 상호작용으로 인해 응집될 수 있으며, 이러한 응집은 낮은 이온 강도와 잔류 DNA 조건에서 발생할 가능성이 더 높아 안정성이 감소하고 수율에 영향을 미칩니다. 염 농도를 증가시키면 AAV 바이러스 입자 응집을 효과적으로 줄여 AAV 바이러스 입자의 회수율을 개선할 수 있습니다.
Salt Active UltraNuclease(염분 내성 광범위 스펙트럼 뉴클레아제)는 해양 미생물에서 유래한 재조합 비특이적 엔도뉴클레아제입니다. UltraNuclease와 비교했을 때, 500 mM 염 농도에서 최적의 활성을 보이며 고염 환경에서도 핵산 오염을 효율적으로 제거할 수 있습니다.
제품 적용 시나리오
- 생물학적 제제의 잔류 핵산 제거: 바이러스, 백신, 단백질과 같은 생물학적 제제를 생산하는 동안 UltraNuclease를 첨가하여 잔류 핵산을 분해할 수 있습니다. 이 단계는 바이러스의 수율을 증가시킬 뿐만 아니라 잔류 핵산의 함량을 크게 줄여 약물의 안전성과 효능을 보장합니다.
- 점도 감소: 핵산을 분해하면 세포 용해물의 점도가 낮아져 바이러스, AAV 벡터, 봉입체와 같은 세포 유래 입자를 정제하는 동안 여과/초여과 공정이 용이해집니다.
- 향상된 분해능 및 회수율: ELISA, 2차원 전기영동, 면역 블로팅 분석에서 분해능 및 회수율이 향상되었습니다.
- 세포 응집 방지: UltraNuclease는 인간 말초혈 단핵세포(PBMC)의 응집을 효과적으로 방지할 수 있습니다.
제품 성능 테스트
고염도 환경이 효소 활성(Na+)에 미치는 영향
Salt Active UltraNuclease의 사용에 맞춰
이를 위해
Salt Active UltraNuclease ELISA 키트를 사용하여 잔류 Salt Active UltraNuclease를 검출하는 실험 과정.
UltraNuclease 및 Salt Active UltraNuclease ELISA 키트의 특징:
규정 준수: 규정 요구 사항에 따라 완벽하게 검증되었으며, 검증 보고서가 제공됩니다.
품질 보증: 키트의 모든 원자재는 독립적으로 개발되어 제어 가능한 품질을 보장합니다.
높은 감도: 정량 한계가 최소 23 pg/mL
높은 정밀도: 배치 내 반복성이 높고 배치 간 변동성이 낮습니다.
강력한 특이성: 다른 엔지니어링된 세포 단백질과 교차 반응성 없음
성능 매개변수
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제품 매개변수 |
콘텐츠 |
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시험 시간 |
3.5시간 |
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검정 원리 |
2부위 면역효소 검사 |
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신호 증폭 |
비오틴-스트렙타비딘 시스템 |
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검출파장 |
450nm 및 630nm |
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감광도 |
0.024ng/mL |
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감지 범위 |
0.047ng/mL~3ng/mL |
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검출 대상 |
솔트 액티브 울트라뉴클레아제 |
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적용 가능한 악기 |
분자 장치: M 및 i 시리즈 |
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애플리케이션 |
세포 및 유전자 치료 및 재조합 아데노 관련 바이러스 백신의 정제 과정에서 잔류 Nuclease 검출 |
제품 데이터:
시약 키트 표준 곡선:
특성
이 키트를 사용하여 7개 공정에서 첨가된 단백질을 검출함으로써 Salt Active UltraNuclease 항체와 키트의 7개 단백질 간의 교차 반응성을 평가했습니다. 양성 대조군(PC-0.047 ng/mL)과 음성 대조군(NC-0 ng/mL)이 설정되었습니다.
실험 결과, 7가지 공정에서 첨가한 단백질은 음성대조군(NC-0 ng/mL)에 가깝고, 검출농도는 본 키트의 정량한계(0.047 ng/mL)보다 낮았으며, 교차반응은 관찰되지 않았다.
S 파이크 회수율:
고객이 스파이크 회수 실험을 위해 제공한 두 샘플에 세 가지 농도 표준(즉, Std1 3 ng/mL, Std3 0.75 ng/mL, Std5 0.188 ng/mL)을 동일한 비율로 추가합니다. 결과에 따르면 스파이크 회수율은 모두 80%~120% 사이입니다. 스파이크 회수율 % = (스파이크 샘플의 측정값 - 스파이크되지 않은 샘플의 측정값) / 이론값(첨가된 표준의 양) * 100%.
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샘플 이름 |
Salt Active UltraNuclease의 시험 농도（ng/mL） |
표준품의 양(ng/mL) |
검사 결과 (ng/mL) |
스파이크 회복율(%) |
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TS1 |
0.04 |
3 |
1.71 |
114.00% |
|
0.75 |
0.347 |
92.53% |
||
|
0.188 |
0.085 |
90.43% |
||
|
TS2 |
0.08 |
3 |
1.772 |
118.13% |
|
0.75 |
0.405 |
108.00% |
||
|
0.188 |
0.104 |
110.64% |
정확성
1) 반복성
반복 실험을 위해 고농도, 중농도, 저농도의 Salt Active UltraNuclease 표준 제품 3개를 선택했습니다. 동일한 실험에서 각 농도의 샘플을 10회 테스트했고 CV%< 10%였습니다.
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배치 내 차이 |
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이론 농도(ng/mL) |
반복 횟수 |
평균(ng/mL) |
변동계수 CV(%) |
|
1.5 |
10 |
1.444 |
2.97% |
|
0.188 |
10 |
0.196 |
2.27% |
|
0.047 |
10 |
0.051 |
2.56% |
2) 중간 정밀도
3가지 실험에 다른 배치의 키트를 사용했고, 각 실험은 높음, 중간, 낮음의 3가지 농도로 수행했으며, 각 농도는 10번 반복했습니다. 각 농도 지점에서 총 30개의 데이터를 얻었고, 각 농도의 CV%는 15% 미만이었습니다.
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배치 차이 |
|||
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이론 농도(ng/mL) |
실험 횟수 |
평균(ng/mL) |
변동계수 CV(%) |
|
1.5 |
3 |
1.423 |
5.70% |
|
0.188 |
3 |
0.212 |
5.59% |
|
0.047 |
3 |
0.059 |
6.82% |
제품 정보
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제품 이름 |
제품번호 |
제품 사양 |
|
20159ES25/50/60/80/90 |
25KU/50KU/100KU/1MU/5MU |
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36703ES96 |
96티 |
기타 관련 제품
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제품 이름 |
제품번호 |
제품 사양 |
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20157ES25/50/60/80/90 |
25KU/50KU/100KU/1MU/5MU |
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36701ES59 |
96티 |