설명
UltraNuclease는 비제한적 엔도뉴클레아제, 광범위 스펙트럼 뉴클레아제로도 알려져 있으며, Serratia Marcescen에서 유래한 비특이적 엔도뉴클레아제로, 핵산의 모든 뉴클레오타이드 사이의 내부 인산디에스테르 결합을 가수분해하여 길이가 2-5개 염기인 5'-모노포스페이트 올리고뉴클레오타이드를 생성합니다. 매우 광범위한 조건(6 M 우레아, 0.1 M 구아니딘 HCl, 0.4% 트리톤 X-100, 0.1% SDS, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF)에서 다양한 형태(이중 가닥, 단일 가닥, 선형, 원형, 네이티브 또는 변성)의 DNA와 RNA를 분해할 수 있으며 생물학적 제품에서 핵산을 제거하는 데 널리 사용됩니다. UltraNuclease는 이후 해당 방법으로도 제거할 수 있습니다.
이 키트는 이중 항체 샌드위치 효소 결합 면역 흡착 검사(샌드위치 ELISA)의 원리를 사용하여 변성 및 비변성 UltraNuclease의 잔류물을 검출합니다. 먼저, 마이크로플레이트를 항-UltraNuclease 토끼 다클론 항체로 코팅하여 고체상 항체를 형성합니다. 둘째, UltraNuclease 표준 및 테스트 샘플을 고체상 항체 마이크로플레이트에 첨가한 다음, 바이오틴 표지된 항-UltraNuclease 다클론 항체를 첨가하고, 마지막으로 호스래디시 퍼옥시다제 표지된 스트렙타비딘(SA-HRP)을 첨가하여 항체 + 항원 + 항체-바이오틴 + SA-HRP 복합체를 형성합니다. 이어서, 복합체에 TMB 기질을 첨가하여 복합체를 세척한 후 색상 반응을 관찰합니다. TMB는 HRP 효소의 촉매 작용 하에서 파란색으로 전환되고, 마지막으로 산의 존재 하에서 노란색으로 전환되며, 색상의 음영은 샘플의 UltraNuclease 양과 양의 상관 관계가 있습니다.
이 키트의 검출 정량 범위는 0.047-3 ng/mL이고, 하한 검출 한도는 23.5 pg/mL입니다.
특징
- 높은 민감도: 진행 중 및 최종 생물학적 샘플에서 최소 23 pg/ml의 UltraNuclease 잔류물을 감지합니다.
- 정확성 보장: UltraNuclease 잔류물을 80%-110%의 회수율로 정확하게 검출할 수 있습니다.
- 특이성: YEASEN UltraNuclease와 함께 사용하면 잔류물을 정확하게 검출할 수 있습니다.
- 안정성: 로트 간 차이가 적고, 키트 특성은 6일 동안 37℃에서 영향을 받지 않습니다.
- 간편한 신호 수집: 바이오틴-스트렙타비딘 시스템을 사용하여 신호를 안정적으로 확대할 수 있습니다.
- 완전한 키트: 모든 주요 구성 요소가 키트에 제공되어 사용 시 비용 효율적입니다.
애플리케이션
- 생물학적 제품의 잔류 UltraNuclease 테스트
사양
감광도 | 23pg/mL(범위 0.047~3ng/mL) |
분석 시간 | <4시간 |
검정 원리 | 2부위 면역효소 검사 |
신호 증폭 | 비오틴-스트렙타비딘 시스템 |
검출파장 | 450nm |
구성 요소
구성품 번호 | 이름 | 36701ES59(96톤) |
36701-A | ELISA 마이크로플레이트 | 1 접시 |
36701-B | 검출 항체: 바이오틴-접합 토끼 항-UltraNuclease 항체 | 35 μL (0.2 mg/mL) |
36701-C | 표준: UltraNuclease | 1 바이알(500 ng/mL) |
36701-D | HRP-결합 스트렙타비딘 | 10 μL |
36701-E | 희석 완충액 1 | 45ml (45ml) |
36701-F | 20×워시 버퍼 | 50ml (50ml) |
36701-G | 희석 완충액 2 | 30ml (30ml) |
36701-H | 티엠비 | 15ml(15ml) |
36701-I | 해결책을 중단하다 | 10ml(10ml) |
36701-J | 밀봉 필름 | 5개 |
배송 및 보관
UltraNuclease ELISA 키트는 아이스팩과 함께 제공되며 2°C ~8°C에서 보관할 수 있습니다. 개봉하지 않은 제품은 1년 동안 유효합니다. 시약을 개봉하면 반년 동안 유효합니다. 이 제품을 절대 냉동하지 마십시오.
준비된 시약의 보관:
1. 희석된 세척 완충액 및 희석 완충액은 2°C ~8°C에서 1주일 동안 보관 가능합니다.
2. 표준 36701-C는 액체이며 2°C ~8°C에서 1년간 보관 가능합니다.
3. 제조된 검출 항체 및 정지 완충액은 2°C ~8°C에서 1개월 동안 보관 가능합니다.
그림
- 특이성 시연
그림 1. UltraNuclease ELISA 키트의 특이성은 위 그림에 표시되어 있습니다.
키트에 있는 항체와의 비특이적 반응에 대해 8개의 모방 샘플을 추정했습니다. 8개 샘플과 음성 샘플 간에는 유의한 차이가 없었습니다. (*: 음성 샘플과 유의한 차이;NS: 음성 샘플과 유의한 차이 없음)
- 정밀 디스플레이
에이)
농도(ng/mL) | 동일한 플레이트에 중복된 데이터가 6개 있습니다. | 이력서 | |||||
3 | 2.412; | 2.390 | 2.323 | 2.367 | 2.476 | 2.291 | 2.53% |
1.5 | 1.780 | 1.883 | 1.884 | 1.908 | 1.876 | 1.883 | 2.19% |
0.75 | 1.123 | 1.215 | 1.166 | 1.18 | 1.140 | 1.109 | 3.12% |
0.375 | 0.691 | 0.706 | 0.708 | 0.722 | 0.722 | 0.679 | 2.21% |
0.1875 | 0.449 | 0.462 | 0.453 | 0.460 | 0.447 | 0.433 | 2.13% |
0.094 | 0.306 | 0.308 | 0.304 | 0.311 | 0.295 | 0.302 | 1.65% |
0.047 | 0.242 | 0.241 | 0.240 | 0.241 | 0.256 | 0.240 | 2.37% |
0 | 0.183 | 0.192 | 0.189 | 0.187 | 0.189 | 0.189 | 1.43% |
비)
중간 정밀도 | |||
콘셉트 | 1.5 ng/mL | 0.375 ng/mL | 0.094 ng/mL |
분석가 1 | 1.388 | 0.382 | 0.079 |
분석가 2 | 1.458 | 0.363 | 0.068 |
분석가 3 | 1.318 | 0.37 | 0.063 |
평균 | 1.388 | 0.372 | 0.07 |
에스디 | 0.070 | 0.010 | 0.008 |
이력서 | 5.04% | 2.59% | 11.69% |
그림 2. UCF.ME™ UltraNuclease ELISA의 정확도는 위의 계획에 따라 평가되었습니다.
각 농도에서 표준 곡선에 대해 6개의 중복된 샘플을 테스트했으며 모든 CV%가 5% 미만이었습니다(그림 2A). 3명의 분석가가 UCF.ME™ UltraNuclease ELISA 실험을 수행했으며 CV%가 15% 미만이었습니다(그림 2B).
- 정확도 검증
에이)
비)
집중 | 오디450 | 결과 | ||||
ng/ml당 | 반복 1 | 2번 반복 | 3번 반복 | 평균 | 콘셉트 | 회복% |
3 | 2.271 | 2.222 | 2.287 | 2.260 | 2.950 | 98% |
1.5 | 1.495 | 1.488 | 1.514 | 1.499 | 1.540 | 103% |
0.750 | 0.868 | 0.856 | 0.890 | 0.871 | 0.735 | 98% |
0.375 | 0.537 | 0.525 | 0.522 | 0.528 | 0.358 | 95% |
0.188 | 0.373 | 0.369 | 0.389 | 0.377 | 0.201 | 107% |
0.093 | 0.261 | 0.255 | 0.258 | 0.258 | 0.082 | 88% |
0 | 0.184 | 0.195 | 0.187 | 0.189 | 0 | 0 |
그림 3. UCF.ME™ UltraNuclease ELISA의 정확도는 다음과 같은 계획에 따라 평가되었습니다.
UltraNuclease는 5 μg/mL 세포 용해 용액(HEK293, E.coli, CHO 및 Vero)에 독립적으로 첨가되었으며 최종 첨가 농도는 1.5 ng/mL이었습니다. 다양한 세포 샘플에서의 정확도는 다른 공급업체보다 우수했습니다(그림 3A). UltraNuclease는 실제 샘플(클라이언트 제공)에 첨가되었으며 3ng/mL에서 0.093ng/mL로 2배씩 연속 희석되었습니다. 스파이크 회수율은 모두 80%~110%였습니다(그림 3B).
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