히프 카나세 ^TM Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase는 Pfu DNA polymerase를 기반으로 한 차세대 high-fidelity DNA polymerase입니다. Hieff Canace ^TM Uracil+ 고성능 DNA 중합효소는 복잡한 템플릿에 대한 빠르고 정확한 PCR 반응을 가능하게 합니다. 그 충실도는 상당히 개선되었으며, dUTP를 포함하는 프라이머/템플릿/dNTP를 사용함으로써 발생하는 증폭 실패를 완전히 피합니다. 이 제품은 최적화된 효소 완충액과 PCR 향상 성분을 추가하여 효소를 매우 효율적으로 만들고 광범위한 템플릿에 적응할 수 있어 복잡한 템플릿의 증폭에 적합합니다.

제품 구성 요소 

배송 및 보관

구성품은 얼음팩과 함께 배송되며 -20°C에서 1년간 보관할 수 있습니다.

제품 응용 프로그램

dUTP를 함유한 프라이머/템플릿/dNTP를 사용한 고성능 라이브러리 증폭.

주의사항

1. 안전과 건강을 위해 작업 시에는 실험실 가운과 일회용 장갑을 착용해 주시기 바랍니다.

2. 연구 목적으로만 사용하세요!

지침

히프 카나세 ^TM Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase는 기존의 high-fidelity 효소와는 약간 다른 방식으로 사용됩니다. 사용하기 전에 지침을 주의 깊게 읽어보세요.

1. 추천 반응 시스템

모든 작업은 얼음 위에서 수행해야 합니다. 2×Canace ^TM Uracil+ PCR 완충액은 해동 후 잘 섞어야 합니다. 시스템 구성 전에 PCR 기기를 예열하십시오. 구성 요소를 추가한 후 피펫으로 샘플을 잘 섞고 튜브 바닥까지 회전시킨 다음 예열된 PCR 기기에 넣어 증폭시킵니다. 사용 후 모든 구성 요소를 -20 °C로 돌려 보관합니다.

표 1. PCR 증폭 반응

[참고사항]:

1) 시약 : 사용 전 각 성분을 충분히 녹이십시오.

2) 템플릿: 정제된 고품질 DNA 템플릿을 사용하면 증폭의 효율성과 성공률을 크게 향상시킬 수 있습니다.

3)dNTP: 권장되는 최종 dNTP 농도는 200 μM입니다. 키트에 제공된 dNTP에는 dUTP가 포함되어 있지 않습니다. 특별한 상황으로 인해 dUTP가 포함된 템플릿을 준비해야 하는 경우 최종 농도가 400 μM이 되도록 추가 dUTP를 추가할 수 있습니다.

4) 중합효소 농도: 1 U/50 μL가 권장됩니다. 0.5-2 U/50 μL 사이에서 최적화할 수 있으며 2 U/50 μL을 초과하지 마십시오. 중합효소가 3'→5' 엑소뉴클리드 활성으로 인해 프라이머를 분해하는 것을 방지하기 위해 마지막 단계에서 반응 시스템에 중합효소를 추가하는 것이 좋습니다.

5) Mg2+ 최종 농도: 시스템의 최종 농도는 2 mM입니다. 특별한 요구 사항이 있는 경우 낮은 Mg2+ 농도 또는 Mg2+가 없는 버퍼를 제공해 달라고 회사에 요청하세요.

2. 추천 반응 절차

표 2. PCR 증폭 반응 절차

[참고]：

1) 초기 변성 온도 및 시간: 98℃가 권장됩니다. 플라스미드 DNA와 같은 간단한 템플릿의 경우 권장 시간은 30초, 라이브러리의 경우 1분, cDNA 및 게놈 DNA와 같은 복잡한 템플릿의 경우 3분, 높은 GC 함량 템플릿의 경우 5-10분입니다.

2) 어닐링 온도 및 시간: 60℃가 권장되거나 온도 구배를 설정하여 필요에 따라 프라이머 어닐링에 최적의 온도를 찾을 수 있습니다. 권장 어닐링 시간은 20초이며 10-30초 내에서 조정할 수 있습니다. 어닐링 시간이 너무 길면 증폭된 생성물이 젤에 분산될 수 있습니다.

3)연장 온도 및 시간: 72℃를 권장합니다. 연장 시간은 실제 필요에 따라 조정됩니다.