설명
제품 설명
2×Hieff Canace ™ Plus PCR Master Mix(염료 포함)는 Hieff Canace ™ Plus High-Fidelity DNA Polymerase, dNTP 및 최적화된 완충액 시스템을 포함하는 바로 사용 가능한 2× 사전 혼합 용액입니다. 이 혼합물에는 실온에서 중합효소 활성과 3'→5' 엑소뉴클레아제 활성을 억제하는 두 개의 단일 클론 항체가 포함되어 있어 매우 특정적인 Hot Start PCR이 가능합니다. 연장 인자를 추가하면 최대 13kb의 표적 단편을 갖는 긴 단편 증폭이 가능합니다. 이 효소는 5'→3' DNA 중합효소 활성과 3'→5' 엑소뉴클레아제 활성을 나타내며, Taq DNA 중합효소의 83배, 일반 Pfu DNA 중합효소의 9배의 충실도를 보입니다. 복잡한 템플릿을 증폭하고 블런트 엔드 PCR 제품을 생성하는 데 적합합니다.
2×Hieff Canace ™ Plus PCR Master Mix(염료 포함)는 단순성, 높은 민감도, 강력한 특이성, 뛰어난 안정성과 같은 장점을 제공합니다. 반응 시스템은 프라이머와 템플릿만 추가하면 되고, 2단계 PCR 프로토콜을 사용하여 절차를 간소화하고 시간을 절약할 수 있습니다. 이 제품에는 전기영동 추적 염료가 포함되어 있어 겔 분석을 위해 PCR 제품을 직접 로딩할 수 있습니다. 또한 반복적인 동결-해동 사이클 후에도 안정적인 활동을 보장하는 특수 보호제가 포함되어 있습니다.
명세서
카탈로그 번호 |
10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08 / 10154ES60 |
크기 |
100 μL / 1 mL / 5×1 mL / 100×1 mL |
저장
본 제품은 -25~-15℃에서 1 년간 보관하시기 바랍니다 .
지침
1. 추천하는 PCR 반응 시스템.
구성 요소 |
용량 ( μL ) |
결정적인 집중 |
2× Hieff Canace™ Plus PCR 마스터 믹스(염료 포함)* |
25 |
1× |
템플릿** * |
엑스 |
- |
Forward Primer ( 10 μmol /L ) ** |
2 |
0.4 μmol /L |
리버스 프라이머 ( 10 μmol / L ) ** |
2 |
0.4 μmol /L |
디디에이치 2 오 |
최대 50개 |
- |
* 혼합물의 최종 농도의 1×에는 중합효소 1 U/50 μL, Mg 2+ 2 mmol/L , dNTP 200 μmol/L가 포함되어 있습니다 .
**PCR 반응에서 권장되는 최종 프라이머 농도는 0.2-1 μmol/L이며, 0.4 μmol/L가 선호됩니다 .
***25 μL 반응 시스템에 권장되는 템플릿 양:
템플릿 유형 |
조각 크기(1kb-10kb) |
게놈 DNA |
50ng~200ng |
플라스미드 또는 바이러스 DNA |
10pg-20ng |
씨디엔에이 |
1-2.5 μL (전체 PCR 용량의 1/10을 초과하지 않음) |
2. 반응 프로그램.
1) 2단계 프로토콜(권장):
주기 단계 |
온도 |
시간 |
사이클 |
초기 변성 |
98℃ |
3 분 |
1 |
변성 |
98 ℃ (섭씨 98도) |
10초 |
30~35세 |
확대 |
6~ 8 ℃ |
30 초/kb |
|
최종 확대 |
72 ℃ |
5 분 |
1 |
2) 3단계 프로토콜(기존):
주기 단계 |
온도 |
시간 |
사이클 |
초기 변성 * |
98℃ |
3 분 |
1 |
변성 |
98 ℃ (섭씨 98도) |
10초 |
30~35세 |
가열 냉각** |
6 0 ℃ |
20 초 |
|
확대*** |
72 ℃ |
30초/kb |
|
최종 확대 |
72 ℃ |
5 분 |
1 |
* 초기 변성: 98°C에서 3분 동안 권장(고 GC 템플릿의 경우 5~10분).
**어닐링: 60°C에서 20초 동안 권장(10-30초 사이에서 조정 가능). 장시간 어닐링은 젤에 번짐을 일으킬 수 있습니다.
***확장: 72°C에서 30초/kb(복잡한 템플릿의 경우 최대 60초/kb)를 권장합니다.
3) 그래디언트 어닐링 프로토콜(어려운 대상에 권장):
주기 단계 |
온도 |
시간 |
사이클 |
초기 변성 |
98℃ |
3 분 |
1 |
변성 |
98 ℃ (섭씨 98도) |
10초 |
15 (사이클당 1°C 감소) |
그래디언트 어닐링 |
70~55도 |
20 초 |
|
확대 |
72 ℃ |
30초/kb |
|
변성 |
98도 |
10초 |
20 |
가열 냉각 |
55°C |
20초 |
|
확대 |
72도 |
30초/kb |
|
최종 확대 |
72 ℃ |
5 분 |
1 |
4) 다양한 PCR 프로토콜의 특성:
프로토콜 유형 |
속도 |
특성 |
PCR 수율 |
감지율 |
투스텝 |
가장 빠른 |
높은 |
중간 |
높은 |
3단계 |
중간 |
중간 |
제일 높은 |
중간 |
그래디언트 어닐링 |
느린 |
높은 |
중간 |
높은 |
노트
1. 본 제품은 연구용으로만 사용됩니다.
2. 안전을 위해 실험실 가운과 일회용 장갑 을 착용하고 작업해 주시기 바랍니다.
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자주 묻는 질문
이 제품은 연구 목적으로만 사용되며 인간이나 동물의 치료 또는 진단용으로 의도되지 않았습니다. 제품과 콘텐츠는
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