일반적인 문제

가능한 이유

해결책

양성 대조군과 검사 대상 샘플에는 띠가 없었습니다.

PCR 반응 시스템이나 반응 조건이 적합하지 않았습니다.

그래디언트 PCR을 사용하여 PCR에 대한 최적의 반응 조건을 살펴보세요.

PCR 시약을 부적절하게 보관하면 활성이 상실됩니다.

2× Mouse Direct PCR Mix는 -20°C에서 보관해야 하며 사용 중 반복적인 동결 및 해동을 피하십시오. 자주 사용하는 경우 4°C에서 단기간 보관할 수 있습니다.

프라이머 설계 문제.

프라이머를 다시 설계해 확인해 보세요.

양성 대조군에는 관심대상 밴드가 나타나고, 검사할 샘플에는 밴드가 없거나 약한 밴드가 나타납니다.

부적절한 보관이나 장기간 보관은 시약 활동의 손실을 초래할 수 있습니다.

새로운 시약을 사용하세요.

조직 용해물을 추가로 첨가합니다.

반응 시스템을 늘리거나 용해물의 양을 줄이세요.

샘플 용해 혼합물이 부적절하게 보관되었거나 너무 오랫동안 보관되어 DNA 게놈이 분해되었습니다.

용해물 혼합물은 4°C에서 2~3일 동안 보관할 수 있습니다. PCR에는 신선하게 준비한 용해물 혼합물을 사용해 보세요.

추가된 템플릿의 양이 적합하지 않습니다.

템플릿의 첨가량은 반응계의 1-10% 범위 내에서 최적화되었습니다.

PCR 사이클 횟수가 부족합니다.

PCR 사이클 수를 늘리세요. 바람직하게는 35-40 사이클입니다. 템플릿의 복잡성 때문에 PCR 반응은 정제된 DNA 템플릿보다 5-10 사이클 더 수행해야 합니다.

비특이적 증폭

PCR 어닐링 온도가 너무 낮거나, 사이클 횟수, 프라이머 농도 또는 템플릿 농도가 너무 높습니다.

PCR 어닐링 온도를 높이고 PCR 사이클 횟수, 프라이머 농도 또는 템플릿 농도를 낮춥니다.

PCR 프라이머 불일치.

PCR 프라이머를 재설계합니다.

PCR 반응 시스템을 제조할 때 온도가 너무 높거나 제조가 완료된 후 시간이 너무 깁니다.

PCR 반응 시스템의 제조는 낮은 온도에서 수행되며, 제조가 완료된 후 가능한 한 빨리 PCR 증폭 반응을 수행합니다.

음성대조군에서 타겟밴드가 나타남

수술 도구나 시약의 오염.

실험에 사용되는 모든 시약이나 장비는 오토클레이브해야 합니다. 대상 시퀀스가 ​​샘플 건에 빨려 들어가거나 원심분리관 밖으로 흘러나오지 않도록 취급 시 조심하고 부드럽게 다루십시오.

샘플 간 교차 오염.

각 샘플러는 한 가지 샘플에만 사용합니다. 또는 샘플을 한 번 채취한 후 샘플러 가장자리를 2% 차아염소산나트륨 용액에 담그고 반복해서 헹군 후 깨끗한 종이 타월로 잔여물을 말립니다.