설명
Hieff® Blood Advanced Direct PCR Kit는 DNA 정제나 샘플 전처리 없이 전혈 샘플을 직접 증폭할 수 있는 키트로, 신선한 혈액, 냉장(냉동) 혈액 및 EDTA, 헤파린, 구연산 등과 같은 기존 항응고제가 포함된 상업용 건조 혈액 얼룩과 호환됩니다. 이 키트는 높은 충실도와 PCR 억제제에 대한 내성을 가진 유전자 조작 DNA 중합효소 조합, 강력한 연장 인자, 증폭 향상 인자를 가진 2× Hieff® Blood Advanced PCR 완충액, 신속한 연장 조건에서 8kb의 게놈 단편을 효율적으로 증폭하고, 2kb 미만의 단편에 대해 3-5초/kb 연장 시간을 설정하여 혈액 샘플 식별 및 검사 시간을 크게 단축하는 최적화된 완충액 시스템을 포함합니다.
명세서
| 충실도(대 Taq) | 1 × |
| 핫 스타트 | 예 |
| 위에 걸리다 | 3'-A |
| 중합효소 | Taq DNA 중합효소(Cat: 10726) |
구성 요소
|
아니요. |
이름 |
10188ES20 |
10188ES60 |
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10188-A |
2× Hieff ® Blood Advanced PCR 버퍼 |
500 μL |
2.5ml (100ml) |
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10188-B |
Hieff ® 고급 고충실도 DNA 중합효소 혼합물 |
20 μL |
100 μL |
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10188-C |
양성 대조 프라이머 혼합물(각각 10 μM) |
100 μL |
200 μL |
|
10188-D |
10× DNA 로딩 버퍼 |
1ml(1ml) |
1ml(1ml) |
지침
추천하는 PCR 반응 시스템.
|
구성 요소 |
용량（μL） |
|
디디에이치 2 오 |
최대 50 μL |
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2× Hieff ® Blood Advanced PCR 버퍼 |
25 μL |
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전방 프라이머(10 μM) |
2 μL |
|
역방향 프라이머(10 μM) |
2 μL |
|
Hieff ® 고급 고충실도 DNA 중합효소 혼합물 |
1 μL |
|
혈액 샘플 |
엑스 |
2. 프라이머 당 0.4 μM의 최종 농도가 권장되며, 너무 높으면 비특이적 증폭이 발생합니다.
3. 최적의 전혈 템플릿 농도는 0.5%~20%이며, 권장 사용은 초기 시험 조건으로 10%입니다. 즉, 50 μL 반응 시스템에 템플릿으로 전혈 5 μL를 추가하고 혈전을 흡인하지 않도록 주의합니다. Whatman® 필터 카드에 저장된 건조 혈액 얼룩의 경우, 혈액 얼룩이 있는 둥근 종이 약 1 mm2를 취하여 전처리 없이 PCR 반응으로 직접 증폭할 수 있습니다.
반응 프로그램
|
사이클 단계 |
온도 |
시간 |
사이클 |
|
초기 변성 |
95℃ |
5분 |
1 |
|
변성 |
95℃ |
15초 |
30~35세 |
|
가열 냉각 |
60℃ |
15초 |
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|
확대 |
72℃ |
3-10초/kb |
|
|
최종 연장 |
72℃ |
5분 |
1 |
어닐링 온도는 프라이머 Tm 값보다 일반적인 Tm 값 또는 1-2°C 낮습니다. 증폭 산물이 덜 특이적이면 최적의 어닐링 조건을 찾기 위해 어닐링 온도 구배를 설정할 수 있습니다.
10초/kb의 연장 시간은 8kb 이하의 대부분의 표적 단편을 증폭할 수 있고, 3-5초/kb는 2kb 이하의 대부분의 단편을 증폭할 수 있습니다. 증폭 효율이 낮으면 시간을 적절히 20-30초/kb로 연장할 수 있으며, 60초/kb를 초과해서는 안 됩니다.
배송 및 보관
제품은 -15℃ ~ -25℃에서 1년간 보관 가능합니다.
그림
노트
1. 혈액 템플릿은 전체 반응 부피의 10%로 사용하는 것이 좋습니다. 즉, 50 μL 반응 시스템에 5 μL의 전혈을 템플릿으로 첨가하며, 혈전이 흡입되지 않도록 주의합니다.
2. 10초/kb의 연장 시간은 8KB 이하의 대부분의 대상 단편을 증폭할 수 있고, 3-5초/kb는 2KB 이하의 대부분의 단편을 증폭할 수 있습니다. 증폭 효율이 낮으면 시간을 30초/kb까지 연장할 수 있습니다.
3. PCR 반응 후 반응 생성물을 4000 rpm(1000× g)에서 1-3분 동안 원심 분리하여 혈액 세포 조각을 침전시키고 상층액을 취하여 후속 분석을 실시하는 것이 좋습니다.
4. 본 제품은 의학적 진단에 직접 사용할 수 없습니다.
5. 여러분의 안전과 건강을 위해 실험실 가운을 착용하고 일회용 장갑을 착용해 주세요.
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자주 묻는 질문
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