Quick T4 DNA Ligase는 NGS 라이브러리 구축 과정에서 DNA 단편과 어댑터의 연결에 사용할 수 있는 단일 효소 제품입니다. 이 제품은 고처리량 시퀀싱으로 검증되었으며 우수한 품질을 가지고 있습니다. 실험 시스템 조정이 필요 없는 고객의 경우 Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607)을 구매하는 것이 좋습니다.

제품 구성 요소

배송 및 보관

제품은 얼음팩과 함께 배송되며 -20°C에서 2년간 보관이 가능합니다.

단위 정의

20 μL 라이게이션 반응 시스템에서 6 μg의 λDNA-Hind III를 16℃에서 30분 동안 반응시켰을 때, DNA 단편의 50% 이상의 라이게이션을 일으키는 데 필요한 효소의 양을 1 유닛(U)으로 정의하였다.

주의사항

1. 완충액이 녹을 때 소량의 침전물이 생길 경우, 사용 전 뒤집어서 잘 섞어주세요.

2. 안전과 건강을 위해 작업 시에는 실험실 가운과 일회용 장갑을 착용해 주시기 바랍니다.

3. 이 제품은 연구용으로만 사용하세요!

지침

1. 현재 주류 DNA 라이브러리 구축 키트는 일반적으로 말단 수리 및 A-Tailing 처리 후 정제되지 않고 어댑터 라이게이션을 직접 수행합니다. 반응 시스템에 대한 다음 준비를 참조하십시오. 완전히 소용돌이치고, 잠깐 회전시키고, 20°C에서 15분 동안 배양합니다.

[주의사항]: *50% PEG 6000은 키트에 제공되지 않으므로 직접 준비해야 합니다.

**어댑터 수량은 다음 표를 참조하세요.

***필요에 따라 Quick T4 DNA Ligase의 양을 1-5 μL 추가할 수 있습니다.

2. 사용된 어댑터의 품질과 농도는 라이게이션 효율과 라이브러리 수율에 직접적인 영향을 미칩니다. 어댑터를 너무 많이 사용하면 어댑터 다이머가 더 많이 생성될 수 있고, 사용량이 적으면 라이게이션 효율과 라이브러리 수율에 영향을 미칠 수 있습니다. 다음 표는 이 키트를 사용하여 다양한 입력 DNA 상황에서 사용되는 어댑터의 권장량을 나열한 것입니다.

[참고]: 입력 DNA 몰(pmol)≈ 입력 DNA(ng)/[0.66 × 입력 DNA 평균 길이(bp)].

어댑터 결찰 계산 예: 입력 DNA가 100ng이고 길이가 300bp인 경우 얼마나 많은 어댑터를 추가해야 합니까?

1단계: 입력 DNA의 몰 수를 계산합니다. 공식: 입력 DNA 몰(pmol)≈ 입력 DNA(ng)/ [0.66 × 입력 DNA 평균 길이(bp)]; 입력 DNA 몰(pmol)=100 ÷ (0.66×300) = 0.5 pmol;

2단계: 위 표에 따라 추가된 어댑터의 몰 수를 계산합니다. 입력 DNA가 100ng인 경우 어댑터:입력 DNA의 몰 비율은 100:1이고 추가된 어댑터의 몰 수 = 100×0.5 pmol = 50 pmol입니다.

3단계: 어댑터 추가 볼륨을 계산합니다. 어댑터 농도 = 15 μmol/L(다른 회사의 어댑터를 사용하는 경우 해당 회사의 지침에 따라 농도를 결정해야 함); 추가된 어댑터 볼륨 = 추가된 어댑터의 몰 수(50 pmol) ÷ 어댑터 농도(15 μmol/L) = 3.34 μL(참고: 15 μmol/L = 15 pmol/ μL);

요약하자면, 어댑터에 추가할 수 있는 용량은 3.4 μL입니다. (주의: 어댑터의 최대 추가 용량은 5 μL를 초과하지 않습니다.)