히프 NGS™ One Pot Flash DNA Library PrepKit은 빠른 효소 DNA 라이브러리 키트입니다 . DNA 단편화를 위한 고품질 효소를 함유하고 있으며 DNA 단편화, 말단 복구, dA-테일링을 하나의 단계로 결합하여 라이브러리 준비에 드는 시간과 비용을 크게 줄여줍니다.

이 라이브러리 준비 키트는 일반적인 동물, 식물, 미생물 등 100 pg~500 ng 샘플과 호환됩니다.

단일 튜브에서 DNA 단편화, 말단 복구 및 A-tail 추가 반응을 빠르게 실현합니다. 키트는 어댑터 및 프라이머와 일치해야 하며 Illumina와 호환됩니다. 그리고 MGI 고성능 시퀀싱 플랫폼.

특징

1) 100 pg-500 ng의 게놈 DNA 샘플에 적합합니다.

2 ) Illumina와 호환 가능 그리고 MGI 고성능 시퀀싱 플랫폼.

3 ) 파편화, 엔드리페어 및 A-테일링 반응 내부 5분.

4 ) 효율적인 라이브러리 변환율 및 증폭 효율.

명세서

구성 요소

참고: *는 이 시약이 이 키트에 포함되지 않으며 추가 시약이 필요하다는 것을 나타냅니다 . 이 키트는 Illumina & MGI 의 듀얼 플랫폼과 호환 되지만 추가 프라이머 믹스(MGI용 CAT # 13334 프라이머 믹스 및 Illumina용 Cat # 13335 프라이머 믹스)가 필요합니다.

저장

본 제품은 -25~-15 ℃ 에서 1일간 보관하시기 바랍니다. 년도.

그림

그림1. 10종의 미생물 DNA 검출

라이브러리는 Cat#12316 프로토콜 , ZymoBIOMICS 미생물 커뮤니티 DNA 표준(Zymo Research® #D6306) 10ng을 사용하여 준비되었습니다 . 라이브러리는 풀링되어 Illumina( SE75 )에서 시퀀싱되었습니다. 시퀀싱 데이터는 20M으로 균질화되었습니다. 그리고 두 입력 레벨에 대해 예상 및 감지된 구성을 비교했습니다. 특정 미생물 gDNA의 감지는 예상 구성과 일치했습니다. 예상 구성: Cryptococcus neoformans 2%, Saccharomyces cerevisiae 2%, Bacillus subtilis 12%, Escherichia coli 12%, Enterococcus faecalis 12%, Lactobacillus fermentum 12%, Listeria monocytogenes 12%, Pseudomonas aeruginosa 12%, Staphylococcus aureus 12%, Salmonella enterica 12%.

작업에 대하여

1. 안전을 위해 실험실 가운과 일회용 장갑을 착용하고 작업해 주시기 바랍니다 .

2. 구성품을 실온에서 해동합니다. 해동 후 , vortexing하여 완전히 섞고, 튜브를 잠깐 돌린 후 나중에 사용하기 위해 얼음 위에 두십시오.

3. 각 단계에서 반응 용액을 준비할 때는 피펫을 사용하여 고르게 불어 섞거나 가볍게 흔드는 것이 좋습니다. 격렬하게 흔들면 라이브러리 출력이 감소할 수 있습니다.

4. 샘플의 교차 오염을 피하기 위해 필터 요소가 있는 건 헤드를 사용하는 것이 좋습니다. 다른 샘플을 흡수할 때는 건 헤드를 교체하십시오.

5. 각 반응 단계는 뚜껑이 가열된 열 순환기에서 수행하는 것이 좋습니다. 열 순환기는 사용하기 전에 설정 온도로 예열해야 합니다.

6. 부적절한 조작은 에어로졸 오염을 일으킬 가능성이 매우 높으며, 결과의 정확도에 영향을 미칩니다. PCR 반응 혼합 영역과 PCR 생성물 정제 검정 영역의 의무적인 물리적 격리가 권장됩니다. 라이브러리 구축을 위한 특수 피펫과 같은 장비가 장착되어 있습니다.

7. 본 제품은 연구용으로만 사용됩니다.

DNA 단편화에 대하여

1. 이 키트의 호환 범위는 100 pg – 500 ng 입력 DNA입니다. 가능한 한 A260/A280 = 1.8-2.0인 고품질 입력 DNA를 사용해야 합니다.

2. 입력 DNA에 고농도의 금속 이온 킬레이트제 또는 기타 염이 포함되어 있는 경우 후속 실험에 영향을 미칠 수 있습니다. DNA를 ddH2O 또는 Tebuffer(10 mm tris-HCl, pH 8.0-8.5; 0.1 mM EDTA)로 희석하는 것이 좋습니다.

3. 대부분 고품질 게놈 DNA의 경우 소화 시간은 표 1에 나와 있습니다. 이 키트는 선호도가 낮고 GC 함량이 있는 다양한 템플릿을 허용할 수 있습니다.

표 1. 기존 게놈 DNA 단편화의 권장 시간

어댑터 결찰

1. 어댑터의 농도는 라이게이션 효율과 라이브러리 수율에 직접적인 영향을 미칩니다. 어댑터를 과도하게 사용하면 어댑터 다이머가 더 많이 생성될 수 있습니다. 낮은 복용량은 라이게이션 효율과 라이브러리 수율에 영향을 미칠 수 있습니다. 결찰 효율성 및 라이브러리 수율. 표 2 및 3에는 권장되는 양이 나와 있습니다. 이 키트를 사용하면 다양한 입력 DNA 입력에 대한 어댑터를 사용할 수 있습니다.

표 2. 추천하는 Illumina 다양한 입력 DNA에 대한 어댑터 양

표 3. 추천 MGI 다양한 입력 DNA에 대한 어댑터 양

도서관 증폭

증폭 사이클 수는 엄격하게 제어해야 합니다. 증폭이 충분하지 않으면 라이브러리 수율이 낮아질 수 있습니다. 과증폭은 편향, 오류, 중복된 판독 및 키메라 생성물을 증가시킬 수 있습니다. 표 4 라이브러리 수율 1μg를 목표로 권장되는 사이클 번호를 나열 합니다 .

표 4. 100 pg-500 ng 입력 DNA의 권장 사이클

비드 기반 DNA 정화 및 크기 선택

1. 라이브러리 구축 과정에는 DNA 정제 자기 비드가 필요한 여러 단계가 있습니다. DNA 정제 및 크기 선택을 위해 Hieff NGS ™ DNA 선택 비드(Yeasen Cat#12601) 또는 AMPure ™ XP 자기 비드(Beckman Cat#A63880)를 권장합니다.

2. 자기 비드는 사용 전 실온에서 평형을 이루어야 합니다. 그렇지 않으면 수율이 감소하고 크기 선택 효과에 영향을 미칩니다 .

3. 자석 비드는 사용 전에 소용돌이 또는 피펫팅으로 잘 섞어야 합니다 .

4. 상층액을 옮길 때 구슬을 흡인하지 마십시오 . 구슬의 미량이라도 다음 반응에 영향을 미칠 수 있습니다.

5. 80 % 에탄올은 신선하게 제조해야 합니다. 그렇지 않으면 회수 효율에 영향을 미칩니다.

6. 자석 비드는 제품을 용출하기 전에 실온에서 건조해야 합니다. 건조가 충분하지 않으면 에탄올 잔류물이 후속 반응에 영향을 미치기 쉽고, 건조가 너무 심하면 자석 비드 가 갈라지고 정제 수율이 감소합니다. 일반적으로 실온에서 3~5분 동안 건조하면 비드가 완전히 건조되기에 충분합니다.

7. 필요한 경우 , 0.1 × TE 완충액 에서 용출된 정제 또는 크기 선택된 DNA 샘플은 4°C에서 1-2주 동안 또는 -20°C에서 1개월 동안 보관할 수 있습니다.

도서관 품질 분석

1. 구축된 라이브러리의 품질은 일반적으로 농도와 크기 분포를 측정하여 분석됩니다.

2. 라이브러리 농도는 Qubit 및 PicoGreen 또는 qPCR과 같은 형광 기반 방법을 통해 측정할 수 있습니다.

3. NanoDrop과 같은 흡광도 기반 정량화 방법을 사용하는 것은 권장되지 않습니다.

4. 라이브러리 정량화에는 qPCR 방법을 사용하는 것이 좋습니다. Qubit 및 PicoGreen과 같은 형광 기반 방법은 불완전한 dsDNA 구조(어댑터가 없거나 어댑터로 연결된 끝 중 하나만 있는 삽입물)와 완전한 라이브러리를 구별할 수 없습니다. qPCR 방법은 어댑터로 양쪽 끝이 연결된 완전한 라이브러리(시퀀싱 가능한 라이브러리)만 증폭하고 측정하므로 로딩을 위한 보다 정확한 측정을 제공합니다.

5. 라이브러리의 크기 분포는 모세관 전기영동이나 미세유체역학의 원리를 기반으로 하는 Agilent Bioanalyzer 또는 기타 장치를 사용하여 분석할 수 있습니다.

서류:

안전 데이터 시트

1 2316 _MSDS_HB 250211 _EN.PDF

매뉴얼

12316_매뉴얼_ 버전.E N 20241225.pdf