제품 설명

Hieff NGS™ mRNA Isolation Master Kit은 mRNA 정제를 위한 특수 자기 비드 키트입니다. mRNA Capture 비드는 Oligo dT(poly A) 꼬리와 결합된 마이크로미터 크기의 상자성 마이크로구체로, poly A 꼬리가 있는 mRNA에 결합하여 10ng에서 4μg의 완전한 RNA에서 mRNA를 분리하는 데 사용할 수 있습니다.

명세서

구성 요소

저장

본 제품은 2~8℃에서 1년간 보관 가능하며, 동결은 피하시기 바랍니다.

지침

1. 필수 재료가 포함되지 않음

자기 랙, Nuclease-free PCR 튜브

2. 작업

1) mRNA 캡처 비드를 실온(약 30분)에서 평형을 이룹니다.

2) Nuclease-free PCR 튜브에 Nuclease-free water를 넣어 총 RNA 10 ng – 4 μg을 50 μL로 희석한 후 얼음에 둡니다.

3) 자석 비드를 거꾸로 뒤집거나 vortexing하여 섞습니다. 자석 비드 50 μL를 총 RNA 샘플 50 μL에 넣고 6번 피펫으로 잘 섞습니다. 튜브 바닥까지 잠시 회전시킵니다.

4) 열 순환기에서 자기 비드와 RNA 혼합물을 배양하고 다음 프로그램을 실행합니다: 65°C, 5분; 25°C, 5분; 25°C, 유지.

5) 튜브를 자석 랙 에 5분간 놓아 mRNA와 총 RNA를 분리합니다. 상층액을 조심스럽게 제거합니다.

6) 튜브를 자석 랙 에서 꺼내고 자석 비드를 200 μL 비드 세척 완충액으로 재부유시킵니다. 전체 볼륨을 위아래로 6번 피펫팅하여 완전히 섞습니다. 튜브를 자석 랙 에 5분 동안 올려놓고 상층액을 조심스럽게 제거합니다.

7) 6단계를 반복합니다.

8) 자석 랙 에서 튜브를 꺼냅니다. 50 μL Tris Buffer를 추가하여 자석 비드를 재부유시키고 6번 피펫팅하여 완전히 섞습니다.

9) 샘플을 열 순환기에 넣고 다음 프로그램을 실행하여 mRNA를 용출합니다: 80°C, 2분; 25°C, 유지.

10) 열 순환기에서 샘플을 꺼냅니다. 50μL의 Beads Binding Buffer를 넣고 6번 반복해서 피펫팅하여 완전히 섞습니다.

11) mRNA가 자기 비드에 결합되도록 실온에서 5분간 배양합니다.

12) 튜브를 자석 랙 위에 5분간 올려놓고, 상층액을 조심스럽게 제거합니다.

[참고]: 남은 액체를 흡입하려면 10 μL 피펫이 필요합니다.

13) 튜브를 자기 랙 에서 꺼내고, 자기 비드를 200 μL 비드 세척 완충액으로 재부유시키고, 피펫을 6번 반복해서 섞어 완전히 섞습니다. 튜브를 자기 랙 에 실온에서 5분간 놓습니다. 상층액을 모두 제거하고 버립니다.

14) mRNA 최종 용출

계획 A: 예비 전사 반응의 경우

튜브를 자석 랙 에서 꺼냅니다. 12μL Nuclease-free water를 넣고 6번 반복해서 피펫으로 섞어줍니다. 튜브를 thermal cycler에 넣고 다음 프로그램을 실행합니다: 80°C, 2분. 그런 다음 튜브를 즉시 자석 랙 에 놓고 실온에서 5분 동안 방치합니다. 용액이 맑아지면 상층액 10μL를 조심스럽게 다른 새로운 Nuclease-free PCR 튜브에 흡인합니다.

계획 B : RNA 라이브러리 준비를 위해

라이브러리 구축을 위한 관련 키트 지침에 따라 적절한 양의 Frag/Primer Buffer를 첨가합니다.

메모

1. 여러분의 안전과 건강을 위해, 작업 시에는 실험실 가운과 일회용 장갑을 착용해 주시기 바랍니다.
2. 연구 목적으로만 사용하십시오.
3. 자기 비드를 사용하기 전에 반드시 실온으로 따뜻하게 하고 잘 섞어주세요. 그렇지 않으면 샘플의 회수 효율에 영향을 줄 수 있습니다.
4. 작업 시에는 RNase와 핵산 오염이 전혀 없어야 합니다.
5. 이 제품을 다른 시약과 함께 사용하는 경우, 작동을 위한 특정 실험 지침을 따르세요.
6. 좋은 정제 결과를 얻으려면 총 RNA의 무결성이 양호해야 하며 RIN 값이 7.0 이상이어야 합니다.