글로빈 mRNA 고갈 프로브(인간) 인간 글로빈 mRNA를 제거하도록 설계되었습니다. HBA1/2, HBB, HBD, HBM, HBG1/2, HBE1, HBQ1 및 HBZ를 포함한 성인, 유아 및 배아 니코틴 소스에서 글로빈 mRNA를 효과적으로 제거할 수 있습니다. 이 제품은 Hieff NGS ^TM MaxUp rRNA Depletion Kit(인간/마우스/래트)(Yeasen#12253)와 함께 사용하여 총 RNA에서 rRNA 및 글로빈 mRNA를 효과적으로 제거합니다. 이 키트는 손상되지 않은 RNA 샘플과 분해된 RNA 샘플 모두에 적합합니다. rRNA 및 글로빈 mRNA를 제거한 후의 RNA 샘플은 mRNA 및 비코딩 RNA의 고처리량 시퀀싱 분석에 사용할 수 있으며, 이는 시퀀싱 결과에서 유효한 데이터의 비율을 크게 향상시키고 cDNA 합성 또는 기타 다운스트림 응용 프로그램을 향상시킵니다.

제품 응용 프로그램

100 ng~1 μg의 인간 , 마우스 및 쥐의 혈액 자원 총 RNA 샘플 과 손상되지 않은 RNA 샘플 또는 부분적으로 분해된 RNA 샘플 모두에 적합합니다.

제품 구성 요소

배송 및 보관

모든 구성품은 건조 얼음과 함께 배송되며 -20°C에서 1년 동안 보관할 수 있습니다 .

수치

총 500ng과 100ng의 인간 혈액 총 RNA를 각각 rRNA 제거와 rRNA 및 Globin 제거를 병행했습니다. 라이브러리 구축 및 시퀀싱 후 Globin mRNA의 함량을 비교했습니다.

주의사항

1. RNase 오염이 없는 소모품을 사용하고 실험 구역을 정기적으로 청소하십시오. ThermoFisher의 RNAZap ^TM 고효율 핵산 제거 스프레이를 사용하여 RNase 오염을 제거하는 것이 좋습니다.

2. RNA 샘플은 게놈 DNA 오염이 없어야 합니다. 샘플에 gDNA가 남아 있으면 DNase I로 소화하고 사용하기 전에 정제해야 합니다.

3. RNA 샘플의 최대 입력 볼륨은 10 μL입니다. 샘플 볼륨이 크면 먼저 농축할 수 있습니다.

4. 여러분의 안전과 건강을 위해, 작업 시에는 실험실 가운과 일회용 장갑을 착용해 주시기 바랍니다.

5. 연구 목적으로만 사용하세요!

지침

1. RNA에 대한 프로브 하이브리디제이션

1.1 총 RNA 10 ng–1 μg을 Nuclease-free Water로 희석하여 PCR 튜브에서 최종 용량이 10 μL가 되도록 합니다. RNA를 얼음 위에 보관합니다.

1.2 얼음 위에서 다음 RNA/Probe 하이브리다이제이션 반응을 조립하세요 . 표 1에 따르면.

 표 1 RNA/Probe 하이브리다이제이션 반응

1.3 최소 10번 위아래로 부드럽게 피펫팅하여 완전히 섞습니다. 튜브를 마이크로 원심분리기에서 잠시 회전시켜 튜브 옆면에서 액체를 수집합니다.

1.4 튜브를 열 순환기에 넣고 가열된 뚜껑을 105°C로 설정하고 표 2의 다음 프로그램을 실행합니다.

표 2 RNA/Probe 하이브리다이제이션의 반응 프로그램

2. RNase H 소화

2.1 표 3에 따라 얼음 위에서 다음의 RNase H 소화 반응을 조립하세요 .

표 3 RNase H 소화 반응

2.2 최소 10번 위아래로 부드럽게 피펫팅하여 완전히 섞습니다. 튜브를 마이크로 원심분리기에서 잠시 회전시켜 튜브 옆면에서 액체를 수집합니다.

2.3 튜브를 열 순환기에 넣고 다음 프로그램을 실행합니다: 뚜껑 50°C; 37°C, 30분; 4°C, 유지.

3. DNase I 소화

3.1 표 4에 따라 얼음 위에서 다음의 DNase I 소화 반응을 조립하세요.

표 4 DNase Ⅰ 소화 반응

3.2 최소 10번 위아래로 부드럽게 피펫팅하여 완전히 섞습니다. 튜브를 마이크로 원심분리기에서 잠시 회전시켜 튜브 옆면에서 액체를 수집합니다.

3.3 튜브를 열 순환기에 넣고 다음 프로그램을 실행합니다: 뚜껑을 벗기고; 37°C, 30분; 4°C, 유지.

4. RNA 정제

4.1 사용 전에 Hieff NGS ^TM RNA Cleaner(제품번호 12602)를 실온으로 맞춰 놓고, 비드를 흔들어 완전히 현탁시킵니다.

4.2 3.3단계의 RNA 용액에 110 µL(2.2×) 비드를 넣고 최소 10회 위아래로 피펫팅하여 완전히 섞습니다.

4.3 RNA가 비드에 결합되도록 실온에서 5분간 배양합니다.

4.4 튜브를 자석 스탠드에 올려놓고 비드를 상층액에서 분리합니다. 용액이 투명해지면(약 3분) 상층액을 버립니다. 피펫 팁으로 비드를 만지지 않도록 주의하세요.

4.5 튜브를 자석 스탠드에 올려놓습니다. 튜브에 새로 준비한 80% 에탄올 200 µL를 넣습니다. 실온에서 30초 동안 배양한 다음 상층액을 버립니다. 피펫 팁으로 구슬을 만지지 않도록 주의합니다.

4.6 4.5단계를 한 번씩 반복하여 총 2번의 세탁을 실시합니다.

4.7 10 µL 피펫 팁으로 잔류 에탄올을 제거합니다 . 튜브를 자석 스탠드에 놓고 뚜껑을 연 채로 최대 5분 동안 구슬을 공기 건조합니다.

4.8 튜브를 자석 스탠드에서 꺼냅니다. Nuclease-free Water 11 μL를 첨가하여 비드에서 RNA를 용출합니다. 최소 10회 위아래로 피펫팅하여 완전히 섞은 다음 튜브를 잠깐 돌립니다.

4.9 실온에서 5분간 배양합니다. 용액이 투명해질 때까지 튜브를 자석 스탠드에 놓습니다(~ 3분).

4.10 상층액 10 µL를 뉴클레아제가 없는 튜브로 옮깁니다.

참고: 이 지점에서 멈춰야 하는 경우, 샘플은 -80°C에서 보관할 수 있습니다.