Hifair™ V 멀티플렉스 원스텝 RT-qPCR 프로브 키트( UDG Plus )는 RNA를 템플릿으로 하는 멀티플렉스 정량 PCR 키트입니다. 실험 과정에서 역전사와 정량 PCR을 같은 튜브에서 수행하여 실험 작업을 간소화하고 오염 위험을 줄였습니다.

이 키트에서, 첫 번째 가닥 cDNA는 내열성 Hifair ^TM V 역전사효소에 의해 효율적으로 합성되었고, UNICON ^TM HotStart Taq DNA Polymerase에 의해 정량적으로 증폭되었습니다. 이 키트는 주로 최적화된 MP 완충액, 효소 혼합물 등을 포함합니다. 완충액에는 이미 Mg ²⁺ 와 dNTP가 포함되어 있습니다. 또한, 비특이적 PCR 증폭을 효과적으로 억제하고 다중 qPCR 반응의 증폭 효율을 개선할 수 있는 요소가 추가되어 증폭 효율을 보장하고 최대 다중 증폭 반응을 수행할 수 있습니다. dUTP/UDG 시스템이 추가되어 에어로졸 오염의 위험을 효과적으로 방지합니다.

특징

높은 감도 : 신중하게 최적화된 버퍼 시스템은 최대 250개/mL의 저농도 템플릿의 검출 감도를 향상시킵니다 .

뛰어난 안정성: 해당 제품은 18개월간 실시간 안정성 테스트를 통과했습니다.

dUP/UDG 오염 방지 시스템 ： dUTP/UDG 오염 방지 시스템은 제품의 에어로졸 오염을 효율적으로 분해하고, 거짓 양성 결과를 줄이며, 신뢰성 있는 결과를 보장하기 위해 도입되었습니다 .

빠른 프로그램 지원: 빠른 프로그램과 호환되며 40분이면 결과를 얻을 수 있습니다.

구성 요소

참고 : 1 ) 2×Hifair ^TM V MP 버퍼 의 약어입니다 dNTP, dUTP, Mg 2+ , 안정제, 증강제 등이 포함된 Hifair ^TM V Multiplex One Step RT-qPCR 프로브 버퍼입니다 .

2) Hifair ^TM V 효소 혼합물은 주로 내열성 Hifair ^TM V 역전사효소, UNICON TM HotStart Taq DNA 중합효소 및 UDGase를 함유하고 있습니다.

저장

그​ 제품 ~해야 한다 BE 저장됨 ~에 -25도~-15도 ~을 위한 18개월.

지침

반응 조성

주의사항 : 사용 전 반드시 잘 섞어주시고, 격렬한 진동으로 인해 과도한 거품이 생기지 않도록 주의하세요.

a) 프라이머 /프로브 농도 : 프라이머 멀티플렉스 프라이머를 포함한 믹스, 상황에 따라 최적 프라이머 농도는 0.1~1.0 μM 사이일 수 있습니다. 멀티플렉스 프로브 라벨링 차이 형광 그룹을 포함한 프로브 믹스, 상황에 따라 최적 프로브 농도는 0.05~0.5 μM 사이일 수 있습니다 .

c) 템플릿 희석: qPCR은 매우 민감하므로 템플릿을 희석하는 것이 좋습니다. 제어 Ct 값은 20~35 사이가 적합합니다.

d) 시스템 준비: 필터 요소로 헤드를 풉니다. 교차 오염 및 에어로졸 오염을 방지합니다.

최적화된 사이클링 프로토콜

참고사항 ： a) 역전사 : 온도는 10~15분 동안 42 ℃ 또는 50 ℃를 선택할 수 있습니다 .

b) 증폭반응 : 온도는 설계된 프라이머의 Tm 값에 따라 조절됩니다.

c) 형광 신호 수집 : 장비 설명서의 요구 사항에 따라 실험 절차를 설정하세요.

3. 신청 장비

Rox가 포함된 장비 : ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™

Low Rox를 갖춘 장비 : ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 및 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex

스트라타진 MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™

Rox가 없는 장비 ：

Bio-Ra d CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™

에펜도르프 마스터사이클러® ep 리얼플렉스, 리얼플렉스 2s; 퀴 아젠 코벳 로터진® Q, 로터진® 3000, 로터진® 6000

로슈 응용과학 LightCycler® 480, LightCycler® 2.0, Lightcycler® 96

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

노트

건강과 안전을 위해 실험실 가운과 장갑 등 필요한 개인 보호 장비를 착용해 주세요 !

실험 에는 RNasefree 소모품을 사용하세요 .

민감도 테스트

-20°C에서 18개월 동안 보관한 13650(실험군)과 유통기한 내(대조군)의 13650을 ORF 유전자와 N 유전자를 표적으로 하는 유사바이러스 SARS-CoV-2의 기울기 희석(500개 사본/ml, 250개 사본/ml)에 대해 동시에 테스트했습니다. 각 농도에 대해 8개의 반복 웰을 테스트했으며 검출률은 100%였습니다. 게다가 증폭 곡선 피크 모양과 Ct 값에 유의한 차이가 없었습니다.

실시간 안정성 테스트

13650은 -20°C에서 18개월 동안 보관했고 유통기한 내에 보관했습니다. 두 그룹 모두 20개의 복제 웰을 사용하여 1000개 사본/ml의 농도로 SARS-CoV-2 유사바이러스 ORF 유전자와 N 유전자에 대해 동시에 테스트했습니다. 두 그룹의 검출률은 모두 100%였고 증폭 곡선 모양이나 Ct 값에 유의한 차이는 없었습니다.

그림 1. 빨간색 : 유통기한 내의 13650 ； 파란색 : -20°C에서 18개월 동안 보관한 13650 。

반복적인 동결-해동 사이클 후에도 안정적인 성능

건조 얼음을 사용하여 13650 시약을 30회 및 50회 동결-해동 사이클에 적용하고, -20°C에서 정상적으로 보관한 시약과 동시에 SARS-CoV-2 유사바이러스 ORF 유전자를 테스트한 결과, 13650 시약의 성능은 50회 동결-해동 사이클 이후에도 영향을 받지 않는 것으로 나타났습니다.

그림 2. 빨간색: -20°C에서 정상적으로 보관된 13650; 보라색 : 13650에서 30번의 동결-해동 사이클 ; 녹색 : 13650에서 50번의 동결-해동 사이클.

표준 및 Rapid 프로토콜과 호환

13650ES를 사용하여 SARS-CoV-2 유사바이러스의 ORF 유전자와 N 유전자를 표준 및 신속 프로토콜을 모두 사용하여 동일한 반응 시스템에서 검출했습니다. 결과는 4-플렉스 시스템에서 두 프로토콜 간의 증폭 곡선 피크 모양과 Ct 값에 차이가 없음을 보여주었습니다.

서류:

매뉴얼