설명
Hieff NGS™ DNA 선택 비드는 SPRI(Solid Phase Reverse Immobilization) 원리에 따라 제조되며 차세대 시퀀싱(NGS) 라이브러리를 준비하는 동안 DNA 정제 및 크기 선택에 적용 가능합니다. Hieff NGS™ DNA 선택 비드는 다양한 DNA 및 RNA 라이브러리 준비 키트와 호환되며 AMPure 비드의 좋은 대안입니다 .
구성 요소
| 구성품 번호 | 이름 | 12601ES08 | 12601ES56 | 12601ES75 |
| 12601 | Hieff NGS™ DNA 선택 비즈 | 5ml(5ml) | 60ml (60ml) | 450ml |
명세서
| 제품 라인 | DNA 세척 및 선택 비즈 |
| 시작 물질 | DNA |
| 호환성 | DNA |
| 격리 기술 | 자석 비드 |
| 최종 제품 유형 | DNA |
| (응용 프로그램)과 함께 사용 | DNA 셀란 업, DNA 크기 선택 |
배송 및 보관
구슬은 얼음팩과 함께 배송되며 2°C-8°C에서 1년 동안 보관할 수 있습니다.
지침
- 1. 준비
사용하기 전 최소 30분 동안 실온에서 선택 비드를 평형화하세요.
- 2. DNA 크기 선택
크기 선택의 동작 흐름은 그림 1에 나타나 있으며 프로토콜은 다음과 같습니다.
그림 1. DNA 크기 선택의 흐름도
2.1 사용하기 전에 매번 구슬을 위아래로 흔들거나 피펫으로 흔들어 완전히 섞어주세요.
2.2 첫 번째 라운드의 선택 비드를 샘플에 추가합니다(표 1 참조). 최소 10회 위아래로 흔들거나 피펫팅하여 완전히 섞습니다.
2.3 실온에서 5분간 배양합니다.
2.4 튜브를 잠시 스핀다운하고 자석 스탠드에 올려놓습니다. 용액이 투명해지면(약 5분) 상층액을 새 PCR 튜브로 옮깁니다.
2.5 표 1에 따라 2.4단계의 샘플에 두 번째 라운드의 선택 비드를 추가합니다. 최소한 10번 위아래로 흔들거나 피펫팅하여 완전히 섞습니다.
2.6 실온에서 5분간 배양합니다.
2.7 튜브를 잠시 회전시키고 자석 스탠드에 올려놓습니다. 용액이 투명해지면(약 5분) 상층액을 흡인하여 버립니다.
2.8 튜브를 자석 스탠드에 두고, 비드를 흔들지 않고 신선하게 준비한 80% 에탄올 200 μL를 넣고, 실온에서 30초 동안 배양합니다. 에탄올을 흡인하고 버립니다.
2.9 2.8단계를 한 번씩 반복하여 총 2번의 세척을 실시합니다.
2.10 10 µL 피펫 팁으로 잔류 에탄올을 제거합니다. 튜브를 자석 스탠드에 두고, 균열이 생길 때까지 뚜껑을 열어둔 채 선택 비드를 공기 건조합니다(약 5분).
참고사항:선택 비드를 과도하게 건조하지 마십시오.그러면 DNA 표적 회수율이 낮아질 수 있습니다.
2.11 튜브를 자석 스탠드에서 꺼냅니다. 적절한 양의 ddH2O(≥20 µL)를 추가하고 최소 10회 위아래로 흔들거나 피펫팅하여 완전히 섞습니다.
2.12 실온에서 5분간 배양합니다.
튜브를 잠시 회전시키고 자석 스탠드에 올려놓습니다. 용액이 투명해지면(약 5분) 상층액 20 μL를 새 튜브로 옮깁니다.
- 3. DNA 크기 선택을 위한 권장 조건
송아지 흉선 DNA를 초음파 처리하여 단편화하여 100-1,000 bp의 단편을 제조하였고, 표 1에 따라 두 차례의 크기 선택을 수행하였다. 결과는 Agilent 2100 Bioanalyzer를 사용하여 분석하였다(그림 2).
표 1. DNA 크기 선택을 위한 권장 조건
| DNA 단편의 길이 | 250~350bp | 320~420bp | 450~550bp | 550~700bp | 700~900bp | 800~1,000bp |
| 1라운드 의 비즈 : DNA 비율 | 0.80× | 0.70× | 0.60× | 0.55× | 0.50× | 0.45× |
| 2라운드를 위한 비즈:DNA 비율 | 0.20× | 0.20× | 0.20× | 0.15× | 0.15× | 0.15× |
참고: 표의 "×"는 샘플 DNA의 양을 나타냅니다. 예를 들어, 라이브러리의 삽입 길이가 250bp이고 샘플 DNA 양이 100μL인 경우, 첫 번째 정렬 라운드에서 사용된 자기 비드의 양은 0.80×100μL=80μL이고, 두 번째 정렬 라운드에서 사용된 자기 비드의 양은 0.20× 100μL=20μL입니다.
그림 2. Agilent 2100 고감도 DNA 칩 전기영동도
참고사항:
1. 안전과 건강을 위해 작업 시에는 실험실 가운과 일회용 장갑을 착용해 주시기 바랍니다.
"Candidatus Nitrosopumilus koreensis AR1의 family 1 casposase에 의한 서열 특이적 통합. Nucleic Acids Res. 2021;49(17):9938-9952. doi:10.1093/nar/gkab725"에서 인용
"최근 Wolbachia 감염은 야생 Laodelphax striatellus 개체군의 미생물 군집을 변화시킵니다. Microbiome. 2020;8(1):104. 2020년 7월 2일 출판. doi:10.1186/s40168-020-00878-x"에서 인용
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