이 키트에는 강력한 용해 완충액이 장착되어 있어 샘플(예: 세포, 마우스 꼬리, 마우스 귀, 마우스 발가락, 근육 등)을 빠르게 용해하여 게놈 DNA를 방출할 수 있으며, 용해물은 정제 없이 PCR 반응 시스템에 직접 첨가할 수 있어 작업이 편리합니다. 또한 이 키트는 샘플 입력이 적게 필요하며, 마우스 조직 5mg 또는 마우스 꼬리 1-5mm를 실험에 사용할 수 있습니다.

구성 요소

저장

19697-A(용해액)는 다음 장소에 보관해야 합니다. 2~8℃에 대하여 1년. 여러 번 사용하는 경우 교차 오염을 방지하기 위해 별도의 포장으로 냉동하십시오. 19687-B(정지용액)는 다음 위치에 보관해야 합니다. -25~-16℃에 대하여 1년.

지침

마우스 게놈 DNA 방출

1. 1.5 mL 원심분리관*에 동물 조직 5~10 mg 또는 쥐 꼬리 1~5 mm를 클립으로 고정합니다.
2. 위의 원심분리관에 완충액 ML 90 μL를 넣고, 용해물이 샘플에 완전히 스며들도록 가볍게 흔든 후, 잠시 원심분리합니다.
3. **항온 배양기**에서 95°C에서 15분간 배양합니다.
4. Buffer MT 10 μL를 첨가하고 가볍게 흔들어 섞은 후 용해를 종결합니다.
5. 선택 단계: 2분 동안 12000rpm으로 원심분리합니다.
6. 상층액을 새로운 원심분리관에 옮겨 4°C 또는 -20°C에 보관하거나 상층액을 바로 채취하여 후속 PCR 증폭에 사용합니다.

* 용해 반응이 더 원활하게 진행될 수 있도록 최대한 조직을 잘라내야 합니다.

**대부분의 PCR 요구 사항에는 일반적으로 95°C에서 15분간 배양하면 충분합니다. 더 많은 양의 DNA가 필요하거나 샘플을 용해하기 어려운 경우 시간을 30분으로 연장할 수 있습니다. 조직 블록을 완전히 용해할 필요는 없으며 잔류물은 후속 원심분리 단계에서 제거할 수 있습니다.

세포 게놈 DNA 방출

48-well 플레이트에서 3일 동안 형질감염된 세포를 배양하여 약 70,000개의 세포/well의 세포 밀도에 도달하면 배지를 가능한 한 완전히 제거합니다. 그런 다음 웰당 90ul의 ML 완충액을 직접 첨가하고 각 웰을 피펫으로 옮깁니다. 모두 96 well-PCR 플레이트로 옮깁니다. 95°C에서 5-15분 동안 PCR 기계로 처리하고 식힌 후 10ul MT 완충액을 첨가하고 고르고 철저히 불어냅니다. 고충실도 효소(Cat# 10164) 또는 Taq 효소를 사용하여 PCR 반응 시스템 50ul마다 0.5-2ul 세포 용해물을 첨가하고 PCR을 수행합니다.

그림 1. 19697로 처리한 세포 용해물을 사용한 직접 PCR.

노트

1. 이 제품은 연구 목적으로만 사용됩니다.
2. 안전을 위해 고글, 실험실 가운, 일회용 장갑을 착용하고 작업해 주시기 바랍니다.
3. 샘플 간 교차 오염을 피하기 위해, 샘플링 장치의 가장자리 또는 샘플과 직접 접촉하는 부분을 샘플링 후마다 2% 차아염소산나트륨 용액에 담그고, 여러 번 씻은 다음, 깨끗한 종이 타월로 잔여 액체를 말린 다음 다시 사용해야 합니다. 테스트의 편의를 위해, 여러 샘플링 장치를 사용 후 균일하게 준비하고 세척하여 각 개별 샘플이 오염 없는 샘플링 장치로 샘플링되도록 할 수 있습니다.
4. 신선하게 채취한 동물 조직을 사용하는 것이 좋습니다. 장기 동결 조직의 경우 반복적인 동결 및 해동은 가능한 한 피해야 합니다. 그렇지 않으면 템플릿이 분해되어 PCR 효율에 영향을 미칩니다.

서류:

매뉴얼