Concanavalin A(ConA) 비드는 Concanavalin A와 공유 결합된 초상자성 폴리머 미세구체입니다. (곡물 식물의 씨앗에서 분리된 식물성 만노스/포도당 결합 렉틴)이 표면에 있습니다. 이 구슬 단분산성과 강한 자기 반응성을 포함한 몇 가지 주목할 만한 특성을 가지고 있습니다. Ca ²⁺ 및 Mg ²⁺ 이온이 존재할 때 ConA 자기 비드는 ConA 글로불린 A와 말단 α-D-만노스 및 α-D-글루코스 그룹 간의 친화력을 활용하여 폴리사카라이드, 당단백질 및 당지질과 같은 다양한 생체 분자를 효율적이고 빠르게 분리하고 정제할 수 있습니다.

ConA 자기 비드는 세포를 분리하거나 고정하는 편리한 방법을 제공하여 후속 세척 단계에서 세포 손실을 최소화합니다. 또한, 핵의 수집 및 고정에 사용할 수 있습니다. 게다가, 이러한 비드는 ChIP-seq 실험에 사용되는 혁신적인 접근 방식인 CUT & Run 및 CUT & Tag와 같은 혁신적인 기술에서 유용성을 찾습니다.

요약하자면, ConA 자기 비드는 생체 분자의 효율적인 정제, 편리한 세포 분리 및 고정, 핵 수집, 최첨단 실험 기술에의 응용을 위한 강력한 도구입니다.

명세서

특성

그림과 표

표 1. Yeasen ConA 비드는 높은 포획률을 가지고 있습니다. 마이크로스피어에 비례하여 사용된 Concanavalin A(ConA)의 양은 CUT&Tag 실험에서 세포 결합 후 과도한 자기 비드 응집을 방지하면서 최대 결합 용량을 보장하는 것으로 검증되었습니다. 예를 들어, ConA 코팅 비드 10 μL를 사용하면 E7 수준과 동일한 양의 세포를 결합할 수 있으며 결합 효율은 98%를 초과합니다.

그림 1. Yeasen ConA 비드는 높은 분산도를 보입니다. 비드 라벨링 공정에서 비생물학적 실런트를 선택하여 배치 간 변화에 영향을 받지 않고 효율적인 폐쇄를 보장했습니다. 이를 통해 자성 비드의 우수한 밀봉이 보장되어 ConA 코팅 비드를 보관하는 동안 높은 단일 분산도가 유지되며, 이는 후속 실험에서 탄수화물 분자에 효율적으로 결합하는 데 도움이 됩니다.

그림 2. Yeasen Con A Beads를 사용한 CUT&Tag 크로마틴 신호 분포.

저장

본 제품은 2~8℃에서 2년간 보관하시기 바랍니다.

지침

다음 작업은 당단백질 정제 또는 세포 분리를 예로 들 수 있습니다. 컷앤태그 실험 , 프로토콜에 대한 내용은 Yeasen Cat# 12598ES를 참조하세요.

1. 버퍼의 준비

1) 고객 제공

1. 필수 재료 불포함 사항: 자석 스탠드, 에펜도르프 튜브, PCR 튜브, 자석 스탠드, 열 순환기 등.
2. 비즈를 최소 30분 동안 실온에서 평형을 유지하세요. 병을 흔들거나 진탕하여 비즈를 완전히 현탁시키세요.

1. 샘플 취급（ 포유류 세포를 예로 들면 ）

1. 포유류 세포(1.0×10 ⁴ ~1.0×10 ⁵ 세포)를 준비하고 원심분리(4℃，600×g, 3~5분)합니다. 상층액을 버립니다.
2. 140 μL 결합 완충액을 첨가하고 잘 섞은 후 세포를 현탁시키고 원심분리하여 수집합니다(4℃，600×g, 3~5분). 상층액을 버립니다.
3. 90 μL 결합 완충액을 첨가하고 잘 섞은 후 세포를 재현탁시킵니다.
   주의: 단단히 부착된 포유류 세포는 트립신과 같은 효소를 사용하여 부분 소화를 통해 얻을 수 있습니다. 동물 조직, 식물 세포 또는 균류 세포의 경우 분산된 세포 또는 원형질체를 얻으려면 종종 특정 특성에 맞게 조정된 특수 처리가 필요합니다.

1. ConA 비즈를 준비하세요

1. ConA 비드를 완전히 현탁시킬 때까지 부드럽게 피펫팅한 다음 10을 놓습니다. 새로운 200 μL 원심분리관에 비드 현탁액 1 μL를 넣습니다.
2. 40 μL의 결합 완충액을 첨가하고 잘 섞은 후 자석 스탠드에 1분간 올려놓고 자석 비드가 원심분리관 측벽에 흡착되면 상층액을 버립니다.
3. 10 μL 결합 완충액을 첨가하고 잘 섞은 후, ConA 비드를 재부유시킵니다.

1. 샘플 바인딩

1. 준비된 세포 샘플을 전처리된 비드에 넣고, 재부유된 비드를 조심스럽게 피펫으로 섞은 다음, 인버티드 믹서(실온에서 30분 또는 4℃에서 밤새)에서 배양합니다.
2. 1분 동안 자석 스탠드에 서서 자석 비드가 원심분리관 측벽에 흡착될 때까지 기다린 후, 상층액을 조심히 버립니다.
3. 세포-ConA 비드 복합체에 500 μL 용출 완충액을 첨가합니다. 부드럽게 피펫으로 구슬을 다시 현탁한 다음 1분 동안 자석 스탠드에 서서 자석 비드가 원심분리관 측벽에 흡착될 때까지 기다린 후, 상층액을 조심히 버립니다.
4. 3) 단계를 3~4번 더 반복합니다.

1. 용출

1. 당단백질의 경우, 50~250 μL 용출 완충액을 넣고, 재부유시킨 비드를 부드럽게 피펫으로 옮긴 다음, 역전 믹서(실온에서 10~30분)에서 배양합니다. 역전 혼합 후, 자석 스탠드에 1분 동안 서 있고, 상층액을 새로운 1.5 mL 튜브에 모아 SDS-PAGE 또는 Western blot을 진행합니다.
2. 세포의 경우 용출이 필요 없습니다.

노트

1. 평형을 이루다 사용 전 ConA 비드를 실온으로 두세요.
2. 동결은 피하십시오. 동결하면 구슬 재료가 분해되거나 활동이 손실됩니다.
3. ConA가 활성화되려면 Ca2+와 Mn2+ 이온이 필요하므로 실험 중에는 EDTA나 기타 금속 이온 킬레이트제가 함유된 시약은 피해야 합니다.
4. 세포와 함께 배양하면 ConA 비드가 응집될 수 있는데, 이는 정상적인 현상이며 자석 비드의 정상적인 사용에는 영향을 미치지 않습니다.
5. 이 제품은 연구 목적으로만 사용됩니다.
6. 안전을 위해 실험실 가운과 일회용 장갑을 착용해 주시기 바랍니다.

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