Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit는 호스래디시 퍼옥시다아제(HRP)로 직접 또는 간접적으로 표지된 항체 및 관련 항원을 검출하도록 설계되었습니다. Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit의 원리는 전기영동 후 단백질 또는 핵산을 임프린트된 멤브레인으로 옮기고 멤브레인에 있는 표적 단백질을 HRP로 표지된 1차 항체 및 2차 항체에 결합시키거나 멤브레인에 있는 핵산을 HRP로 표지된 프로브에 직접 또는 간접적으로 결합시키는 것입니다. 멤브레인을 세척한 후, 제품으로 준비한 ECL 작업 용액을 사용하여 실온에서 몇 분 동안 멤브레인을 배양했습니다. 임프린트된 멤브레인을 플라스틱 랩으로 감싸고 X-선 노출 카세트에 고정했습니다. 그런 다음 X-선 필름을 암실에서 멤브레인에 눌러 몇 초에서 몇 시간 동안 노출시킵니다. 현상 및 고정 후 단백질 또는 핵산 밴드를 X-선 필름에 명확하게 표시할 수 있습니다.

이 키트는 독특한 발광 기질 시스템을 갖추고 있어 노출 배경을 줄이는 동시에 새로운 산화제를 도입하여 키트의 안정성을 크게 개선하여 최대 1년 동안 실온에서 안정을 유지할 수 있습니다. X선 외에도 형광 CCD 스캔은 주로 WB 검출 및 화학 발광 면역 검출 시스템에 직접 사용할 수 있습니다.

특징

민감도가 높고 신호대잡음비가 높아 중간 수준의 항원을 검출할 수 있습니다.

빠르고 밝게 빛나며, 형광등 아래에서도 인쇄된 필름 밴드를 관찰할 수 있습니다.

특히 표적의 풍부함을 검출하는 데 적합한 것은 기존의 단백질 샘플입니다.

실온에서 최대 1년 동안 안정한 새로운 산화제입니다.

응용 프로그램

화학발광 ELISA

웨스턴 블롯

도트 블롯-DNA/RNA

서던 블롯-DNA

노던 블롯-RNA

명세서

구성 요소

배송 및 보관

제품은 실온으로 배송되며, 1년간 실온 보관이 가능합니다. 장기간 사용하지 않을 경우 유효기간을 연장하기 위해 2 ℃ ~8 ℃ 에서 보관하는 것이 좋습니다.

참고사항: 36222-A는 빛을 피해 보관해야 합니다!

지침(예: X선 필름)

1. 일반 전기영동, 전이막, HRP로 표지된 항체 또는 HRP로 표지된 핵산 프로브 배양 및 세척막.

참고사항: ECL 발광 용액은 HRP의 컬러 기질이므로 검출 시스템은 HRP 효소 표지 항체 또는 핵산 프로브를 기반으로 해야 합니다.

2. 마지막으로 멤브레인을 세척하는 동시에 발광 작업 용액을 새롭게 준비합니다(100-200 μL 발광 작업 용액/cm2 멤브레인): 동일한 양의 시약 A와 B를 취하여 나중에 사용하기 위해 잘 섞습니다.

참고사항: 시약 A와 시약 B는 다른 팁을 사용해야 합니다. 작동 유체는 즉시 사용하는 것이 좋습니다. 실온에서 몇 시간 후에도 사용할 수 있지만 감도가 약간 떨어집니다.

3. 평평한 핀셋을 사용하여 막을 꺼내고 여과지에 올려 로션을 빼냅니다. 막을 완전히 말리지 마십시오. 막을 발광 작동 용액에 완전히 담그고 발광 작동 유체와 충분히 접촉합니다. 실온에서 1-2분 동안 배양하고 즉시 정제 노출을 준비합니다.

4. 핀셋으로 막을 집어 올려 여과지 위에 올려놓고 발광 작동액을 빼냅니다. 하지만 발광액은 씻어내지 마세요.

5. X선 필름 옵스큐라의 안쪽 표면에 멤브레인보다 큰 플라스틱 랩을 놓습니다. 임프린트된 멤브레인을 플라스틱 랩에 부착하고, 플라스틱 랩을 임프린트된 멤브레인 주위로 완전히 접고, 가스 버블을 제거하고 접으면 과도한 플라스틱 랩의 가장자리를 잘라낼 수 있습니다. 여과지를 사용하여 과도한 발광 작동 유체를 빨아들입니다. 테이프로 옵스큐라에 임프린트된 멤브레인을 덮고 있는 플라스틱 랩을 고정하고, 단백질 밴드가 위를 향하게 합니다.

6. 암실에서 엑스레이 필름 한 장을 꺼내서 감싼 멤브레인 위에 올려놓았다. 필름을 눌러서 30초~2분 동안 노출시켰다. 그런 다음 필름을 현상해서 고정시켰다.

참고사항: 노출 시간은 노출 강도에 따라 조정해야 합니다. 배경이 너무 높으면 두 개의 X선 필름을 동시에 사용합니다.

기타 노출 방법

CCD 사진을 사용하는 경우: 작동 유체에 막을 넣고, 부트를 사용한 후 지침에 따라 필름을 제거하고 사진을 찍습니다. 또한 기계의 측정 매개변수를 상황에 따라 조정하여 신호 대 잡음비를 개선할 수 있습니다.

노트

1. 멤브레인 전이, 밀봉 및 배양 시 거품을 피해야 합니다. 또한 장갑을 착용하면 멤브레인에 지문이 남지 않고 깨끗하게 유지할 수 있습니다.

2. 장시간 노출 또는 과도한 단백질은 배경을 짙게 만들고 밴드 강도의 변화가 선형 관계를 잃게 합니다. 노출 부족은 밴드를 흐릿하게 만듭니다.

3. 일부 플라스틱 랩은 인쇄된 멤브레인을 포장할 때 형광을 억제할 수 있습니다. 고품질 플라스틱 랩을 선택해야 합니다.

4. 동일한 세척 멤브레인 상자에 여러 개의 멤브레인을 두지 마십시오. 상호 흡착 또는 마찰로 인해 배경이 짙어질 수 있습니다.

5. 필름 상의 밴드 위치와 크기는 미리 염색된 가시 단백질 마커와 형광-자가방사선 노출 태그를 사용하여 정확하게 결정할 수 있습니다.

6. 바이오틴-아비딘 시스템을 사용하고 밀크 클로저 사용을 피하십시오. 밀크 클로저를 사용하면 배경이 너무 높아질 수 있습니다.

7. 금속 산화물 입자는 막에 과립상 반점을 일으킬 수 있습니다. 녹슨 가위와 핀셋을 사용하지 마십시오. 플라스틱 플랫 핀셋을 사용하십시오.

8. 아지드화나트륨(NaN3)은 HRP 활성을 저해할 수 있으므로 HRP 표지된 프로브 또는 항체의 회수에는 NaN3 사용을 피해야 하며, 필요하다면 0.01%를 넘지 않도록 합니다.

9. 본 제품은 일반적인 화학 처리법에 따르면 특별한 독성이 없습니다.

10. 건강과 안전을 위해 실험실 가운과 장갑 등 필요한 PPE를 착용하세요 !

11. 연구용으로만 사용하세요!

서류:

안전 데이터 시트

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매뉴얼

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 인용 및 참조:

[1] He X, Li J, Zhou G, et al. 억제성 인터뉴런의 시냅스 가소성에 의한 해마 리듬 및 기억의 게이팅. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)

[ 2 ] Wang X, Zhang S, Jin D, et al. μ-opioid receptor agonist helps circulating tumor cell formation in bladder cancer via the MOR/AKT/Slug pathway: a comprehensive study including randomized controlled trial. Cancer Commun (Lond). 2023;43(3):365-386. doi:10.1002/cac2.12408(IF:16.2)

[ 3 ] Li Y, Zhou S, Song H, Yu T, Zheng X, Chu Q. 증폭된 칼슘 과부하 암 치료를 가능하게 하는 KAE와 통합된 CaCO3 나노입자. Biomaterials. 2021;277:121080. doi:10.1016/j.biomaterials.2021.121080(IF:12.479)

[ 4 ] Xu Z, Xu J, Sun S, et al. Mecheliolide는 간세포암에서 ROS 매개 ERS 구동 면역원성 세포 사멸을 유발합니다. Redox Biol. 2022;54:102351. doi:10.1016/j.redox.2022.102351(IF:11.799)

[ 5 ] Cai Z, Zhang Y, Zhang W, et al. 적혈구의 비소 유지 및 과도한 적혈구 식세포 작용은 산화환원 항상성 손상으로 인한 낮은 셀레늄 상태와 관련이 있습니다. Redox Biol. 2022;52:102321. doi:10.1016/j.redox.2022.102321(IF:11.799)

[ 6 ] Kaushik AC, Wu Q, Lin L, et al. 결핵균 감염의 엑소좀 ncRNA 프로파일링은 miRNA-185-5p를 결핵의 새로운 바이오마커로 확인했습니다. Brief Bioinform. 2021;22(6):bbab210. doi:10.1093/bib/bbab210(IF:11.622)

[ 7 ] Hu P, Li H, Sun W, et al. 콜레스테롤 관련 리소좀 장애는 혈액 악성 종양의 세포 사멸을 유발합니다: LW-218의 세포독성 효과에 대한 동적 분석. Acta Pharm Sin B. 2021;11(10):3178-3192. doi:10.1016/j.apsb.2021.02.004(IF:11.614)

[ 8 ] Wang X, Ni J, You Y, et al. SNX10 매개 LPS 감지는 카스파제-5 의존 신호 전달 계단을 통해 장 장벽 기능 장애를 유발합니다. EMBO J. 2021;40(24):e108080. doi:10.15252/embj.2021108080(IF:11.598)

[ 9 ] Jiang K, Chen H, Fang Y 등. 엑소좀 ANGPTL1은 Kupffer 세포 분비 패턴을 조절하고 MMP9 유도 혈관 누출을 방해하여 대장암 간 전이를 약화시킵니다. J Exp Clin Cancer Res. 2021;40(1):21. 2021년 1월 7일 출판. doi:10.1186/s13046-020-01816-3(IF:11.161)

[1 0 ] Zhang S, Yang Z, Bao W, et al. SNX10(nexin 10 정렬)은 SRC의 자가포식 분해를 제어하여 대장암 개시 및 진행을 억제합니다. Autophagy. 2020;16(4):735-749. doi:10.1080/15548627.2019.1632122(IF:11.059)

[1 1 ] Liu L, Liang L, Yang C, Zhou Y, Chen Y. Fusobacterium nucleatum의 세포외 소포는 RIPK1 매개 세포 사멸 경로를 표적으로 하여 장 장벽을 손상시킨다. Gut Microbes. 2021;13(1):1-20. doi:10.1080/19490976.2021.1902718(IF:10.245)