Natural Protein A는 Staphylococcus aureus에서 발견되는 세포벽 표면 단백질로, G 또는 C Streptococcus 속에서 분리된 단백질 G와 유사하며, 주로 면역글로불린(Ig)의 Fc 영역과 상호 작용하여 대부분의 포유류 IgG에 결합하지만 결합 특이성이 다릅니다. 다양한 항체(단일클론 항체 및 다클론 항체)의 분리 및 정제에 사용할 수 있습니다. Protein A와 Protein G는 서로 다른 면역글로불린 하위 클래스에 대한 결합 특성이 다릅니다(자세한 내용은 부록 1 참조).
이 제품은 유전자 변형 단백질 A를 사용하는데, 이는 Ig 친화성을 유지할 뿐만 아니라 천연 단백질 자체의 비주요 결합 도메인을 제거하여 비특이적 결합을 줄입니다. 매트릭스로 고도로 가교된 아가로스 겔과 리간드로 변형된 알칼리 저항성 재조합 단백질 A인 SuRi rProtein A Agarose Resin은 높은 물리화학적 안정성을 가지고 있습니다. 이 제품을 사용하면 복수, 혈청 및 배양 배지 샘플에서 원스텝 친화성 크로마토그래피를 통해 고순도 항체를 얻을 수 있으며, 사용이 편리하고 널리 사용됩니다.

구성 요소

명세서

해운 그리고 저장

제품은 아이스팩과 함께 배송됩니다. 2~8℃에서 5년간 안정적으로 보관할 수 있습니다.

지침

1. 버퍼 준비

다음 완충액은 사용하기 전에 0.22 μm 또는 0.45 μm 필터 멤브레인으로 여과하는 것이 좋습니다. 완충액의 균형/결합/세척: 0.15 M NaCl, 20 mM Na2 HPO4, pH 7.0

용출 완충액: 0.1 M 글리신, pH 3.0

중화 완충액: 1 M Tris-HCl, pH 8.5

2. 샘플 준비

컬럼에 로딩하기 전에 혈청 샘플, 복수 또는 세포 배양 용액을 결합/세척 완충액으로 희석하거나, 결합/세척 완충액으로 샘플을 투석하여 샘플 용액의 이온 강도와 pH가 적절한지 확인합니다.

3. 컬럼 패킹

거품이 생기지 않도록 주의하면서 SuRi rProtein A 아가로스 수지를 적합한 크로마토그래피 컬럼에 넣습니다.

4. 샘플 정제

1) 균형: 크로마토그래피 컬럼은 컬럼 부피의 5배에 해당하는 결합 완충액으로 균형을 이루므로, 패킹이 표적 단백질과 동일한 완충계에 위치하여 단백질을 보호하는 역할을 합니다.

2) 샘플 로딩: 샘플은 균형 잡힌 rProtein A Agarose Resin에 로딩되어 표적 단백질과 수지 사이의 완전한 접촉을 보장하고, 표적 단백질의 회수율을 높이고, 테스트할 유출물을 수집합니다.

3) 세척: 세척 완충액의 컬럼 용량의 10~15배로 세척하고, 특이적으로 흡착되지 않은 불순물 단백질을 제거하고 세척 용액을 수집합니다.

4) 용출 : 용출 완충액의 컬럼 부피의 5~10배로 용출하여 용출액, 즉 표적 단백질 성분을 수집합니다.

5) CIP 세척 및 보존: 일반적으로 3CV보다 큰 0.1-0.5 M NaOH를 사용하고 접촉 시간은 15분입니다. 그런 다음 중성이 될 때까지 5CV 밸런싱 솔루션으로 헹굽니다. 마지막으로 컬럼 부피의 5배인 20% 에탄올로 밸런싱한 다음 4°C에서 같은 부피의 20% 에탄올에 보관하여 패킹이 박테리아에 의해 오염되는 것을 방지합니다.

5. SDS-PAGE 검출

정제 과정에서 얻은 시료(원시료, 유출 성분, 세척 및 용출 성분 등)를 SDS-PAGE로 검출하여 정제 효과를 확인하였습니다.

노트

1. 제품을 냉장 보관하지 마십시오.
2. rProteinAAgarose Resin은 사용하기 전에 여러 번 완전히 역전시켜서 아가로스 수지가 균일하게 혼합되도록 해야 합니다.
3. 모든 작업 중에 샘플은 4°C 또는 얼음 위에서 작업해야 합니다.
4. 여러분의 안전과 건강을 위해, 작업 시에는 실험실 가운과 일회용 장갑을 착용해 주시기 바랍니다.
5. 연구 목적으로만 사용하십시오.

첨부표 1 : 다양한 항체의 Ig에 대한 단백질 A 및 G의 결합 능력 요약 종

SuRi rProtein A 아가로스 수지