폴리브렌(헥사디메트린 브로마이드)은 폴리브렌이라고도 하며, 포유류 세포를 대상으로 한 DNA 형질감염 실험에서 리포좀의 형질감염 효율을 높이기 위해 일반적으로 사용되는 양이온성 폴리머입니다. 이는 레트로바이러스 매개 유전자 형질감염 및 렌티바이러스 매개 유전자 형질감염에 널리 사용됩니다. 작용 기전은 세포 표면의 시알산을 중화하여 바이러스 입자와의 정전기적 반발을 극복하여 흡착을 용이하게 하는 것입니다. 폴리브렌은 또한 항응고제(헤파린 길항제)로 알려져 있으며 비특이적으로 응집된 적혈구 생산에 자주 사용됩니다. 또한 단백질 시퀀싱에서 저용량의 폴리브렌은 자동 시퀀싱 분석에서 펩타이드 분해를 크게 개선하는 것으로 나타났습니다. PVDF 멤브레인에 폴리브렌을 추가하면 멤브레인 친화도를 높일 수도 있습니다.

사양

제품은 용액 형태로 제공되며, 분말은 0.9% NaCl에서 재구성되어 10 mg/mL 용액을 만든 다음 0.22 μm 필터를 사용하여 살균합니다. 일반적으로 관련 문헌에 설명된 대로 세포 유형에 따라 특정 희석 비율을 사용하여 1:1000-1:2000의 비율로 희석하여 사용합니다.

배송 및 보관

운송 및 보관은 -20ºC에서 권장되며, 유통기한은 2년입니다. 반복적인 동결-해동 주기를 피하기 위해 분주하여 보관하는 것이 좋습니다.

지침:

1. 안전과 건강을 위해 실험실 복장과 ​​일회용 장갑을 착용하세요.

2. 이 제품은 연구 목적으로만 사용됩니다.

운영 단계

(참고로, 특정 농도는 다를 수 있으니 관련 문헌을 참조하세요):

참고사항: 폴리브렌은 특정 세포(말단 분화된 신경 세포, DC 세포 등)에 심각한 독성을 나타낼 수 있으며, 최초 사용 시 독성 시험을 실시하는 것이 좋습니다.

실험 1: 레트로바이러스 감염

1. 재조합 레트로바이러스 스톡 준비: 100mm 접시에 5mL 성장 배지(5% 혈청)가 들어 있는 트랜스펙션 레트로바이러스 패키징 세포의 단층을 포함하는 세포를 배양합니다. 24시간 후, 배양 배지를 제거하고 0.45μm 필터로 여과합니다.

2. 감염을 위한 세포 배양: 100mm 접시에 접시당 세포 밀도가 5× ¹⁰⁵ 인 완전 성장 배지 10mL를 첨가합니다.

3. 바이러스 감염: 세포 배양 24시간 후, 전체 배양 배지를 제거합니다. 폴리브렌(최종 농도: 5-10 μg/mL)이 포함된 2 mL 바이러스 상층액으로 37°C에서 3-6시간 동안 세포를 감염시킵니다.

4. 바이러스 입자 수집: 8 mL의 완전 성장 배지를 추가합니다. 배양 2-3일 후, 배양 배지를 수집하여 바이러스 입자를 얻습니다.

실험 2: 형질감염

1. 세포 밀도가 약 50%인 완전 성장 배지에서 세포를 배양합니다.

2. 18-24시간 세포 배양 후, DNA-성장 배지-폴리브렌 혼합물을 준비합니다. 완전한 성장 배지(60mm 접시의 경우 2mL, 100mm 접시의 경우 3mL)를 넣고 37°C로 예열합니다. 10ng~10µg 플라스미드를 부드럽게 섞습니다. 폴리브렌을 최종 농도 5-10µg/mL로 첨가합니다. 부드럽게 섞습니다. 각 성분은 지정된 순서대로 첨가해야 합니다.

3. 배양 배지를 제거하고 DNA-성장 배지-폴리브렌 용액을 37°C에서 6-20시간 동안 세포에 첨가합니다. 세포 배양의 처음 6시간 동안 1.5시간마다 부드럽게 섞습니다.

4. DNA-성장 배지-폴리브렌 용액을 제거합니다. 세포를 DMSO 충격 용액(1× HBSS에 15% DMSO)으로 덮습니다. 용액을 첨가할 때마다 배양 접시를 10초 동안 가볍게 흔들어 균일하게 분포되도록 합니다. 세포를 37°C에서 4분간 배양합니다.

5. DMSO 충격 용액을 즉시 제거하고 완전 성장 배지로 세포를 두 번 부드럽게 씻습니다. 60mm 접시의 경우 매번 5mL의 배양 배지로 씻고, 100mm 접시의 경우 매번 10mL의 배양 배지로 씻습니다.

6. 세포에 완전한 성장 배지를 추가합니다.

7. 단백질 발현: 배양 24~72시간 후, 필요에 따라 단백질 발현 분석을 위해 세포를 수집합니다.

세포 선택: 배양 24~72시간 후, 세포 상태에 따라 새로운 선택 배지로 바꾸고 세포 선택을 계속합니다.