설명
Hieff Trans™ 범용 트랜스펙션 시약은 최신 나노기술을 기반으로 개발된 다목적, 편리하고 효율적인 리포좀 트랜스펙션 시약입니다. DNA, RNA 및 올리고뉴클레오타이드, 일차세포를 포함한 트랜스펙션에 적합합니다. 뉴런을 포함한 트랜스펙션이 어려운 세포는 트랜스펙션 효율이 높습니다. 독특한 공식으로 배지에 직접 첨가할 수 있으며 혈청이 있어도 트랜스펙션 효율에 영향을 미치지 않아 혈청 제거로 인한 세포 손상을 줄입니다. 트랜스펙션 후 핵산-트랜스펙션 시약 복합체를 제거하거나 새로운 배지로 교체할 필요가 없으며 세포의 영양 상태에 따라 4~6시간 후에 새로운 배지를 교체할 수도 있습니다.
제품 구성 요소
구성 요소 번호 |
구성 요소 |
고양이 번호/크기 |
||
40808ES02 |
40808ES03 |
40808ES03 |
||
40808-A |
유니버설-A |
0.5ml (100ml) |
1ml(1ml) |
5×1ml |
40808-B |
유니버설-B |
0.5ml (100ml) |
1ml(1ml) |
5×1ml |
배송 및 보관
제품은 아이스팩과 함께 배송되며 2-8℃에서 1년 동안 보관할 수 있습니다. 얼리지 마세요!
주의사항
1) 형질전환 작업 중 세포 밀도는 70%-90%에 도달하는 것이 좋으며, 구체적인 도금 밀도는 세포 상황에 따라 결정됩니다.
2) 형질감염 복합체를 제조하려면 혈청이 없는 배지에서 DNA와 형질감염 시약을 희석해야 합니다.
3) 형질감염 중 배지에 항생제를 첨가할 수 없습니다.
4) 고순도 DNA 또는 RNA를 사용하면 더 높은 형질 전환 효율을 얻는 데 도움이 되며, 플라스미드 내의 엔도톡신은 형질 전환의 적입니다.
5) 2~8ºC에서 보관하시고, 장시간 뚜껑을 반복해서 열지 않도록 주의하세요.
6) 최대의 형질감염 효율을 얻으려면 첫 번째 사용 시 핵산 농도와 시약 양을 최적화해야 합니다.
7) 이 제품은 과학적 연구 목적으로만 사용됩니다!
지침
DNA의 형질전환
[주의] 트랜스펙션 시약의 사용량은 세포 종류 및 기타 실험 조건에 영향을 받으므로, 최초 사용 시 적정 사용량을 최적화하기 위해 그래디언트를 설정하는 것이 좋습니다.
1) 세포를 도말하고, 형질감염 시까지 세포 밀도가 70%-90%가 되어야 합니다.
2) 아래 표에 따라 Universal-B 용액을 Opti-MEM 배지로 희석한 후 부드럽게 혼합합니다.
3) Opti-MEM 배지로 DNA를 희석하여 DNA 프리믹스를 만든 다음, Universal-A 용액을 첨가하고 가볍게 혼합하여 희석된 DNA를 얻습니다.
4) 희석된 DNA를 희석된 Universal-B 용액에 첨가합니다(비율 1:1).
5) 실온에서 5분간 배양합니다.
6) DNA-리포좀 복합체를 세포에 한 방울씩 떨어뜨린 후 부드럽게 섞습니다.
7) 유전자 발현 분석이 이루어질 때까지 37°C, 5% CO2 배양기에서 48~96시간 동안 배양합니다.
siRNA의 형질전환
siRNA의 형질감염 절차는 DNA 형질감염 절차와 동일하지만, siRNA를 희석할 때 Universal-A 용액(3단계)을 추가할 필요가 없습니다.
표 1 다양한 세포 배양 용기에서의 형질감염량 (참고용)
세포 배양 용기 |
96웰 |
24웰 |
6웰 |
|
부착세포 |
1-4×104 |
0.5-2×105 |
0.25-1×106 |
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아래 표에 따라 Universal-B 용액을 Opti-MEM 배지로 희석하고 부드럽게 혼합합니다. |
Opti-MEM 매체 |
5 μL |
25 μL |
125 μL |
유니버설-B |
0.2 μL |
1 μL |
5 μL |
|
DNA를 Opti-MEM 배지로 희석하여 DNA 프리믹스를 만든 다음, Universal-A 용액을 첨가하고 가볍게 혼합하여 희석된 DNA를 얻습니다. |
Opti-MEM 매체 |
5 μL |
25 μL |
125 μL |
DNA(0.5–5μg/μL) |
0.1μg(마이크로그램) |
0.5μg(마이크로그램) |
2.5μg(마이크로그램) |
|
유니버설-A(2 μL/μg DNA) |
0.2 μL |
1 μL |
5 μL |
|
희석된 DNA를 희석된 Universal-B 용액에 넣습니다(비율 1:1). |
희석된 DNA 용액 |
5 μL |
25 μL |
125 μL |
유니버설-B |
5 μL |
25 μL |
125 μL |
|
실온에서 5분간 배양합니다. |
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DNA-리포좀 복합체 |
구성요소(각 웰) |
96웰 |
24웰 |
6웰 |
옵티-멤 |
10 μL |
50 μL |
250 μL |
|
DNA(0.5–5μg/μL) |
0.1μg(마이크로그램) |
0.5μg(마이크로그램) |
2.5μg(마이크로그램) |
|
유니버설-B |
0.2 μL |
1 μL |
5 μL |
|
유니버설-A |
0.2 μL |
1 μL |
5 μL |
|
DNA-리포좀 복합체를 세포에 한 방울씩 떨어뜨린 후 부드럽게 섞습니다. |
DNA-리포좀 복합체 |
10 μL |
50 μL |
250 μL |
[참고] 표에 사용된 양은 참고용일 뿐입니다. 사용되는 DNA와 Universal-B 용액의 구체적인 양은 세포 유형 및 기타 실험 조건에 따라 최적화해야 합니다. 비율은 1:0.5-1:5 사이로 유지하는 것이 좋습니다.
안전 데이터 시트
(1) Q: 핵산전사시약 복합체 제조시 혈청이 존재할 수 있나요?
A: 혈청의 존재는 리포좀의 형성에 영향을 미칩니다. 핵산 트랜스펙션 시약 복합체를 제조할 때는 혈청이 없는 배지(일반적으로 MEM 배지)를 사용하는 것이 좋습니다.
(2) Q: 트랜스펙션 시약을 동결할 수 있나요?
A: 이 시약은 2~8°C에서 보관해야 하며, 뚜껑을 오랫동안 반복적으로 여는 것은 피해야 합니다. 뚜껑을 오랫동안 열면 리포좀 산화가 발생하여 형질감염 효율에 영향을 미칩니다.
(3) Q: Hieff Trans™ Universal Transfection Reagent 사용 시 주의해야 할 점은 무엇입니까?
A: 1) 형질전환 작업 중 세포 밀도는 70%-90%에 도달하는 것이 좋으며, 구체적인 도금 밀도는 세포 상황에 따라 결정됩니다.
2) 형질감염 복합체를 제조하려면 혈청이 없는 배지에서 DNA와 형질감염 시약을 희석해야 합니다.
3) 형질감염 중 배지에 항생제를 첨가할 수 없습니다.
4) 고순도 DNA 또는 RNA를 사용하면 더 높은 형질 전환 효율을 얻는 데 도움이 되며, 플라스미드 내의 엔도톡신은 형질 전환의 적입니다.
5) 2~8ºC에서 보관하시고, 장시간 뚜껑을 반복해서 열지 않도록 주의하세요.
6) 최고의 형질감염 효율을 얻으려면 첫 번째 사용 시 핵산 농도와 시약 양을 최적화해야 합니다.
(4) Q: 형질전환 후 종료가 필요한가요?
A: 필요 없습니다. 트랜스펙션 후 핵산-트랜스펙션 시약 복합체를 제거하거나 새로운 배지로 교체할 필요가 없으며, 세포의 영양 상태에 따라 4-6시간 후에 새로운 배지를 교체할 수도 있습니다.
(5) Q: 트랜스펙션 시약을 바이러스 벡터 패키징의 트랜스펙션에 사용할 수 있나요?
A: 네. 바이러스 벡터 패키징의 효율성은 반드시 형질감염의 효율성과 관련이 있는 것은 아니지만, 패키징 플라스미드의 선택과 플라스미드 간의 비율과도 관련이 있습니다.
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자주 묻는 질문
이 제품은 연구 목적으로만 사용되며 인간이나 동물의 치료 또는 진단용으로 의도되지 않았습니다. 제품과 콘텐츠는
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