선형 폴리에틸렌이민 PEI 25000 형질전환 시약은 음전하를 띤 핵산 분자를 쉽게 결합하고 복합체를 형성하며 복합체가 세포 내로 유입되도록 하는 고전하 양이온성 폴리머입니다. 형질전환 시약은 HEK293 및 CHO와 같은 세포에서 낮은 세포독성, 높은 형질전환 효율 및 높은 유전자 발현 효율을 가진 일시적 형질전환 시약입니다. 선형 PEI 형질전환 시약은 HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 및 Hela 세포 등 다양한 세포주에 널리 적용할 수 있다는 것이 검증되었습니다. 이 시약은 혈청이 포함된 배지와 호환되며 핵산을 세포 내로 효율적으로 도입할 수 있습니다.

사양

배송 및 보관

제품은 실온에서 배송되며, 분말은 2-8ºC에서 2년간 보관할 수 있습니다. 스톡 용액은 2-8ºC에서 3개월 동안 보관합니다.

주의사항


1) 제조된 PEI 용액을 -20ºC에서 꺼내 해동한 후 4ºC 냉장고에 보관하고 다시 냉동해서는 ​​안 됩니다.

2) 대부분 세포의 경우, 1μg DNA당 3.0μL의 PEI 트랜스펙션 시약으로 높은 트랜스펙션 효율을 얻을 수 있습니다. 최적화를 위해 1μg DNA당 1.5~4μL의 선형 PEI 트랜스펙션 시약을 사용해 볼 수도 있습니다.

3) 안전과 건강을 위해 작업 시에는 실험실 가운, 일회용 장갑, 환기후드를 착용해 주시기 바랍니다.

4) 본 제품은 과학적 연구 목적으로만 사용 가능하며, 사람이 사용하기에는 적합하지 않습니다.

스톡 용액 제조(1 mg/mL)


1. 재료

PEI 25000, 밀리-Q® 정제수/주사용 정제수(WFI) 또는 이와 유사한 생물학적 등급 정제수, 12 mol/L 염산(HCl), 10 mol/L 수산화나트륨(NaOH), 일회용 0.1~0.2 μm PES 진공 멸균 필터, 멸균 HDPE 또는 폴리프로필렌 보관 병.

2. 스톡 용액(1 mg/mL)을 준비합니다.

1) 1L 유리 비이커에 PEI 25000 분말 1g을 900mL의 밀리-Q® 초순수 또는 이와 동등한 생물학적 물에 넣고 자석 교반기로 고르게 교반하여 작은 소용돌이를 생성합니다.

2) 교반하면서 염산(12 mol/L)을 적하하여 pH<2.0이 될 때까지 조절합니다.

3) 비커의 윗부분을 덮고 완전히 녹을 때까지 3시간 동안 저어줍니다. 이 과정 전체에 걸쳐 pH를 2.0 미만으로 유지하세요.

【주의사항】: 용해되지 않는 작은 섬유질 입자가 있을 수 있는데, 이는 정상적인 현상입니다.

4) 교반하면서 NaOH(10 mol/L)를 적하하여 pH가 6.9 ~7.1이 될 때까지 조절한다.

5) 용액을 메스실린더에 옮기고, 물을 넣어 1L로 만듭니다.

6) 일회용 0.1-0.2 µm PES 진공 필터로 여과 및 살균하여 1 mg/mL 스톡 용액을 얻습니다.

7) 필요에 따라 나누어 -20 °C에 보관하면 1년간 안정합니다.

【주의사항】: 보관용액을 재해동한 후 4℃에서 보관하면 2주간 안정하나 재동결해서는 안 됩니다.

형질감염 절차(6-well plate를 예로 들어 설명)


1. 세포 접종: 형질감염 효율을 높이기 위해 형질감염 1일 전에 세포를 접종하는 것이 좋으며, 형질감염 시점의 세포 밀도는 바람직하게는 70%~80%입니다.

2. DNA-PEI 복합체 준비: 다음 시스템에 따라 DNA-PEI 핵산-트랜스펙션 시약 복합체를 준비합니다.

1) 각 세포 웰에 대해 2 μg의 표적 DNA를 100 μL의 무혈청 배지로 희석하고, DNA 희석액이 될 때까지 완전히 혼합합니다.

[참고]: 혈청이 없는 희석제로는 Opti-MEM 또는 ddH2O를 권장합니다.

2) 100 μL의 DNA 희석액에 5 μL의 PEI 25000 형질전환 시약을 즉시 첨가하고 10초간 진탕한 후 잘 혼합합니다.

3) 10~25분 동안 실온에서 배양하여 DNA-PEI 양이온 핵산 형질감염 시약 복합체를 형성합니다.

3. 형질전환된 세포:

1) 복합체 형성 동안 세포 성장 배지를 제거하고 각 웰에 신선하고 예열된 완전 배지 2 mL를 첨가합니다.

2) 100 μL DNA-PEI 핵산-PEI 복합체를 세포에 직접 첨가하고, 배양판을 흔들어 가볍게 섞습니다.

3) 37°C, 5% CO2 배양기에서 배양하고, 형질전환 후 7시간 만에 형질전환체의 발현을 검출할 수 있습니다. 적절한 검사 시간은 직접 결정하세요.

4. 안정된 회전 스크리닝(선택 사항)

형질감염 24시간 후, 세포를 신선한 성장 배지(세포를 10배 이상 희석)에 계대배양하고, 5% CO2 인큐베이터에서 37°C에서 하룻밤 배양했습니다. 다음 날, 형질감염 저항 유전자와 일치하는 스크리닝 약물을 첨가했습니다. 약물 저항성 클론은 약 1~2주 안에 스크리닝할 수 있습니다. 이 기간 동안 스크리닝 약물이 들어 있는 성장 배지를 자주 교체해야 합니다.

다양한 세포 배양 용기에 대한 형질 전환 복용량(참조용):